Integrin beta1在结肠癌及其淋巴转移灶中的表达及临床意义

目的：检测integrin-beta1在结肠癌组织中的表达水平差异,研究其与结肠癌临床病理特征及其预后的关系。方法：采用免疫组化 SP法检测integrin 茁1在82例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中的表达情况。结果：邻近正常结肠粘膜组织integrin beta1的阳性表 达率为93.33 %,原发灶癌细胞integrin beta1的表达率为73.17 %,两者之间integrin beta1的阳性表达率比较P<0.01;结肠癌转移性淋 巴结组织integrin beta1的阳性表达率为87.67 %,结肠癌非转移性淋巴结组织integrin beta1的阳性表达率为11.29 %,两者之间integrin 茁1的阳性表达率比较P<0.01。在所有与结肠癌相关的临床病理因素中,是否穿透浆膜层、有无淋巴结转移、分化程度不同、Dukes 分期不同,integrin beta1的阳性表达率比较P 值均小于0.05。结论：Integrin beta1与结肠癌分化程度、侵袭深度、淋巴结转移状况及 Dukes 分期等病理因素密切相关,其表达水平的检测对评估结肠癌淋巴结转移程度和分析结肠癌分期具有一定临床实用价值。     

不同年龄组人表皮干细胞Integrin β1表达分析研究

目的:分析不同年龄组包皮组织中表皮干细胞Integrinβ1的表达,为组织工程学种子细胞的选用提供依据。方法:利用DispaseⅡ和BSA共同作用,分散表皮和真皮组织部分。对不同年龄组分离的表皮干细胞进行Integrinβ1免疫荧光染色,利用流式细胞仪检测不同年龄组Integrinβ1表达的阳性率。结果:不同年龄组分离得到的表皮干细胞形态一致。细胞生长状态和生长速度以7岁年龄组为最佳,其次是16岁年龄组,最后是30岁年龄组。流式细胞仪检测不同年龄组Integrinβ1的表达,7岁组阳性率为93%,16岁组阳性率为56%,30岁组阳性率仅为3.5%。结论:随着年龄的增长,皮肤组织中表皮干细胞的含量降低,低年龄段皮肤组织是组织工程学种子细胞的良好选择。     

人皮肤表皮干细胞体外培养与应用研究进展

人皮肤表皮干细胞是具有无限增殖潜能以及多向分化能力的专能干细胞,广泛存在于表皮基底层以及毛囊隆突部位。目前,表皮干细胞在分离、纯化、培养等领域都取得了一定进展。表皮干细胞的应用主要在皮肤创面的修复、组织工程皮肤的构建以及基因治疗等领域。本文从干细胞的来源、分离、纯化鉴定、培养与应用等方面进行综述。     

过表达细胞周期蛋白的Dl对成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞的作用

目的：观察过表达细胞周期蛋白D1（CCND1）对成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞的调控作用。方法：构建携带CCND1基因的真核表达载体PEGFP-N1-CCND1,将PEGFP-N1-CCND1转染人成熟表皮细胞,5 d后,倒置显微镜下观察细胞形态;细胞计数法观察细胞的增殖情况;免疫荧光法检测表皮干细胞标志抗原β1整合素和成熟表皮细胞标志抗原CK10的表达变化。结果：转染PEGFP-N1-CCND1后,细胞体积变小,核浆比例增大;细胞增殖较快,细胞数量比对照组增加了4倍（P<0.01）;表型检测结果显示,转染PEGFP-N1-CCND1组,表达干细胞标志性蛋白β1整合素表达阳性,成熟表皮细胞标志性蛋白CK10表达阴性,而转染空载体组则相反。结论：CCND1过表达能够诱导成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞。     

小鼠表皮干细胞的分离与培养

目的:探讨体外分离和培养小鼠表皮干细胞和分析表皮干细胞克隆形成能力的方法。方法:采用中性蛋白酶和胰酶消化新生小鼠表皮基底层细胞,将细胞直接接种在细胞瓶中,在无滋养层条件下培育;利用表皮干细胞标记物K15和α6整联蛋白进行免疫荧光鉴定;以小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层与成年小鼠角质细胞共培养,进而分析表皮干细胞的克隆形成能力。结果:新生小鼠表皮干细胞克隆在培养2～3 d后开始形成,细胞核质较小,细胞呈小而圆的形态特征;传代后的细胞可以被K15和α6整联蛋白特异性标记。结论:利用该方法能够实现对小鼠表皮干细胞的体外培养和传代。     

表皮生长因子对精原干细胞的作用研究

应用不连续Percoll梯度液和选择性贴壁法分离纯化精原干细胞:c-kit细胞免疫组化鉴定细胞类型;MTT法研究EGF对精原干细胞增殖的效应;加入MAPK-ERK信号通路特异性抑制剂PD98059,探讨EGF对精原干细胞增殖作用的可能机制.证明:1)c-kit细胞免疫组化结果显示分离得到细胞为精原千细胞;2)MTT结果显示各实验组比对照组细胞数量均有显著增多(p＜0.01),且20 ng/mL剂量组的增殖作用最明显;3)与对照组相比,加入PD98095组的活细胞数有显著下降(p＜0.01).结论:EGF能够促进精原干细胞的增殖,并且可以通过MAPK-ERK信号通路起作用.     

MicroRNA-9-1促进大鼠表皮干细胞分化为神经细胞

目的:探讨MicroRNA-9-1在体外诱导大鼠表皮干细胞向神经细胞分化过程中的作用。方法:构建大鼠MicroRNA-9-1慢病毒载体,并感染SD大鼠的表皮干细胞;实验分为感染组、未感染组和阴性对照组;采用β-巯基乙醇诱导感染后的SD大鼠表皮干细胞分化为神经细胞。倒置荧光显微镜下观察表皮干细胞感染后GFP荧光表达的情况;免疫细胞化学染色检测神经微管结合蛋白2(MAP-2)的表达水平;RT-PCR检测MAP-2mRNA的表达水平。结果:阳性克隆PCR检测证明大鼠MicroRNA-9-1慢病毒载体构建成功;感染后48 h,在倒置显微镜下观察到,感染组GFP荧光表达达到峰值,感染效率达到了(85.6±1.9)%;β-巯基乙醇诱导7 h时,感染组大部分表皮干细胞向神经细胞分化,且诱导效果显著好于未感染组和阴性对照组;MAP-2在蛋白((87.3±0.6)%)和mRNA水平(约2倍)的表达率显著高于其他各组(P0.05)。结论:MicroRNA-9-1慢病毒载体可以高效感染大鼠表皮干细胞,且可以促进表皮干细胞在β-巯基乙醇的诱导下向神经细胞分化。     

周期性静水压对人软骨细胞IL-1beta和MMP-3 代谢的影响

目的：以正常成人软骨细胞及OA软骨细胞为研究对象,探讨在静水压作用下正常软骨细胞IL-1beta和MMP-3 代谢的变化, 以及与OA软骨细胞之间的差异。同时观察在力学信号刺激下软骨细胞的IL-1beta和MMP-3 代谢有无相关性。方法：将体外培养的 正常成人膝关节软骨第3 代软骨细胞随机分为加压组和对照组。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。将加压 组细胞放入高压恒温静水压加压系统,冲入含有95％的空气和5％的CO2混合气体,以10MPa 进行加压2h,共加压5d。分别于 加压前、加压第3 天、加压第5 天后取加压组、对照组和OA 组细胞培养液检测IL-1beta、MMP-3 含量。同时采用MTT 法分析3 组 细胞的增殖情况。对三组细胞中IL-1beta与MMP-3 的水平做双变量相关分析,采用方差分析对三组标本间的IL-1beta、MMP-3 含量进 行比较。结果：各组细胞IL-1beta与MMP-3 两者间存在正相关关系。OA组细胞中IL-1beta与MMP-3含量高于加压组和对照组,加压 组高于对照组。加压组、OA组软骨细胞的生长曲线与对照组相比增殖高峰降低,平台时间缩短。结论：10MPa 间歇性静水压加压 可抑制软骨细胞增殖,增加IL-1beta与MMP-3 分泌。     

猴表皮干细胞横向分化为角膜上皮细胞的研究

表皮干细胞可以作为角膜上皮细胞的替代物, 在自体眼表修复及组织工程生物角膜的构建中将产生不可估量的作用. 将体外分离培养的2 ~ 4代猴表皮干细胞和人角膜缘基质组织及角膜上皮细胞进行共培养(Transwell法), 于共培养前后使用流式细胞仪、RT-PCR和免疫组织 化学技术对其分化情况进行检测和鉴定. 并于第2, 4, 6, 8和10天进行免疫组织化学染色观察表皮干细胞转分化的比率. 实验采用条件培养基诱导法作为对照. 表皮干细胞在共培养前表达表皮干细胞标志, K15和整合素β1阳性, K3/K12阴性; 共培养后转为表达K3/K12, 从基因水平和蛋白质水平表现出角膜上皮细胞的特征, 但是条件培养基诱导法阳性率较低. 可见, 表皮干细胞具有可塑性, 在角膜缘基质组织及角膜上皮细胞的调控下, 可以横向分化为类角膜上皮细胞, 有可能重建角膜上皮, 进行自体生物角膜的构建.     

过表达β-catenin诱导人表皮干细胞向成釉质细胞分化

人表皮干细胞可作为上皮源性的成体干细胞可应用于人类牙齿再生,但是其诱导效率较低。该研究利用过表达手段上调Wnt/β-catenin信号通路核心因子β-catenin在人表皮干细胞的表达,以期提高诱导其向成釉质细胞分化的效率。分别构建β-catenin和β-catenin（S33Y）基因的慢病毒载体,转染293T细胞生产病毒液并感染人表皮干细胞,采用Western blot检测人表皮干细胞感染后β-catenin的蛋白表达水平;然后与具有诱导成牙潜能的小鼠牙胚间充质进行重组,移植裸鼠体内培养;嵌合体组织切片染色和免疫组化检测形成牙齿的效率（成牙率）和成釉质细胞分化的效率（成釉率）。结果显示,过表达β-catenin的人表皮干细胞的重组嵌合体的成釉率提高至100%。提示,过表达β-catenin可诱导人表皮干细胞向成釉质细胞分化。     

肿瘤干细胞分离研究进展

癌症是严重威胁人类生命健康的疾病之一,传统治疗方法未能彻底根除癌症。究其原因是癌症的发病机制复杂,至今尚未完全认识。肿瘤干细胞理论的提出为肿瘤的发生、发展乃至术后复发提供了新的研究思路,同时也为癌症的治疗带来了新的曙光。但由于肿瘤干细胞含量极低、分离困难,给肿瘤干细胞的研究带来诸多不便。目前常用的分离方法为无血清培养法与流式分选法,但二者均存在一定的缺陷,因此亟须建立一种新型有效地分离方法。肿瘤干细胞与普通干细胞有许多相似的信号通路,因此可利用干细胞的微环境筛选分离分化程度较低的肿瘤干细胞。水凝胶由于其独特的性质,目前广泛用于细胞的三维培养。有鉴于此,科研工作者利用水凝胶模拟普通干细胞生长的力学环境筛选、富集肿瘤干细胞。本文就肿瘤干细胞目前常用分离及鉴定方法,同时结合国内外最新的肿瘤干细胞分离方法进行综述。     

不同物种诱导性多潜能干细胞研究进展及应用

将特定的转录因子转入细胞并使其重编程后,获得与胚胎干细胞极其相似的多潜能性干细胞,称为诱导性多潜能干细胞(induced Pluripotent Stem Cells,iPS),它是由日本Yamanaka研究小组首次构建并命名。iPS细胞具有极强地自我更新和多项分化潜能,有发育和分化形成机体内几乎所有组织细胞类型的潜能,从而构成机体各种复杂的组织器官,且避免了在伦理、道德、宗教、法律和免疫排斥等诸多问题。随着iPS技术的不断发展,不同物种的iPS细胞相继产生,为细胞代替治疗、疾病模型的建立和药物筛选及再生医学等注入了新的活力。目前,iPS细胞的研究尚处于初级阶段,在临床应用上还存在诸多问题,本文将对近年来不同物种iPS细胞的产生、应用,及我们未来面临的问题和挑战进行综述。     

间充质干细胞对颞下关节炎患者血清PRG4 及TGF-beta1 的软骨生成作用比较研究

目的：探讨间充质干细胞对颞下关节炎患者血清PRG4 及TGF-beta1 的软骨生成作用。方法：选取我院颞下颌关节炎患者72例,随机分为实验组和对照组。对照组予盐酸氨基葡萄糖片口服1 个月,玻璃酸钠注射液颞下颌关节腔每周1 次,注射4 次治疗。实验组予间充质干细胞培养、自体移植,生理盐水0.5 mL稀释细胞5× 105个关节腔内注射,3 天后再次相同剂量及方式注射。两组患者分别测定血清TGF-beta1、IL-1alpha和PRG4 蛋白表达,最大张口度测试及疼痛程度评分,并通过影像学检查,评估两组患者关节组织损伤修复时间。结果：①与对照组相比实验组TGF-beta1 和PRG4 蛋白表达上升更迅速且维持在较高水平,IL-1alpha下降更显著,差异有统计学意义（P＜0.05）;②与对照组比较,实验组最大张口度增加、张口时疼痛评分下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;③与对照组比较,实验组受损关节组织均修复时间更短,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：间充质干细胞可通过调节血清TGF-beta1、IL-1alpha水平和PRG4 蛋白表达,促进软骨的生成,对改善预后,提高患者生活质量有重要意义。     

siRNA沉默整合素beta1 基因对子宫内膜癌细胞侵袭、转移的影响

目的：探讨siRNA 沉默整合素茁1 基因对子宫内膜癌细胞侵袭、转移的影响。方法：选取子宫内膜癌ECC-1细胞系(ER阳性)和KLE细胞系(ER阴性),分别转染Integrin beta1 siRNA 质粒(Integrin beta1 siRNA 组)、无义序列siRNA质粒(无义序列对照组)和空载质粒(空载对照组),利用实时荧光定量PCR 检测各组细胞中Integrin 茁1 mRNA的表达,Western blot 检测各组细胞中Integrin beta1、beta-catenin 和C-Myc 蛋白的表达,Transwell 小室检测各组细胞迁移和侵袭能力,MTT 法检测各组细胞的增殖情况。结果：Integrinbeta1 siRNA 组ECC-1 细胞和KLE 细胞中Integrin beta1 mRNA 和蛋白相对表达量均低于无义序列对照组和空载对照组(P<0.05);Integrin beta 1 siRNA组ECC-1 细胞和KLE细胞中beta-catenin 蛋白和C-Myc 蛋白相对表达量均低于无义序列对照组和空载对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);Integrin beta1 siRNA组ECC-1 细胞和KLE 细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数均低于无义序列对照组和空载对照组(P<0.05);Integrin beta1 siRNA 组ECC-1细胞和KLE 细胞的A 值均低于无义序列对照组和空载对照组(P<0.05)。结论：特异性抑制Integrin beta1 基因可抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和增殖,可能与抑制Wnt信号传导有关。     

黄牛表皮细胞分离与体外培养最适条件的探索

为了建立黄牛表皮细胞分离与体外培养的最适条件,比较了组织块法与单细胞悬液法、不同蛋白酶(胰蛋白酶和分离酶)的消化以及有无血清培养基对细胞生长的影响,以克隆形成率来检测细胞生长和存活情况。结果证明：采用分离酶分离表皮细胞进行无血清培养是黄牛表皮细胞体外培养的最适条件。     

Expression and pathogenesis of VCAM-1 and VLA-4 cytokines in multiple myeloma

ObjectiveThe objective of this study is to investigate the expression of Vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and very late appearing antigen-4 (VLA-4) cytokines in MM (multiple Myeloma).MethodForty patients with MM are selected as the experimental group and 30 healthy persons as the control group. Flow cytometry is used to detect the expression of VCAM-1 (CD106), VLA-4 (CD49d), CD38 and CD138 antigens in experimental group and control group. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) is used to detect the concentration of VCAM-1 in serum of experimental group and control group. RT-PCR is used to detect the expression of VCAM-1.ResultsThe positive rate and antigen expression rate of VACM-1 antigen in the experimental group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05). There were statistical differences of VLA-4 and VCAM-1 antigens between the initial diagnosis group and the relapse/refractory group, and between the relapse/refractory group and the platform stage group (P < 0.05). There were significant differences between VLA-4 antigen and VACM-1 antigen, phase I and phase II, and between phase I and phase III (P < 0.05). The concentration of VCAM-1 and the expression of VCAM-1 mRNA in the experimental group were significantly higher than (P < 0.01). In the different stages of ISS (International Staging System) and different disease groups in the experimental group, the concentration of VCAM-1 and the expression level of VCAM-1 mRNA are significantly different among the three groups of stage I, II and III (P < 0.01). There is a significant difference between the initial diagnosis group, the relapse/refractory group and the platform group (P < 0.05).ConclusionThere are abnormal expressions of adhesion molecules VCAM-1 and VLA-4 in multiple myeloma patients, which are related to ISS staging.     

Epidermal calcium-binding protein: a marker of early differentiation of basal layer keratinocytes of rats

Epidermal calcium-binding protein (ECaBP) is present in the cells of the basal layer of the epidermis and other stratified epithelia. Since the basal layer compartment contains at least two types of cells: slow-cycling, poorly-differentiated, and actively proliferating, more differentiated cells, it was of interest to determine whether they both contained ECaBP. Basal and nearly suprabasal layer keratinocytes from newborn rat epidermis were fractionated into three fractions on the basis of cell size, using low-gravity sedimentation. The cell differentiation in each subgroup was estimated by cell size, morphology, cell cycle stage, RNA/DNA content, and the presence of specific keratins. The presence of ECaBP in these fractions was detected by immunocytochemistry and immunoblotting. Double staining with ECaBP antibodies and propidium iodide followed by flow cytometry was used to correlate ECaBP production and the stage of cell cycle. The relative cell size, measured by the light scattering was used to study the relationship between cell size and ECaBP production. The results show that small keratinocytes with low DNA and RNA content (G₀ cells) do not express ECaBP. ECaBP was found only in intermediate size basal keratinocytes with higher DNA and RNA contents, corresponding to actively proliferating S phase cells. Large keratinocytes, which express suprabasal keratin and have low DNA and high RNA content, cease to express ECaBP. ECaBP may, therefore, be a useful marker for assessing the movement of cells from poorly differentiated reserve compartment towards proliferation and further differentiation in both physiological and pathological situations.     

表皮生长因子对人二倍体成纤维细胞p21~(WAF-1)基因表达的双向性影响

p2 1 WAF-1又称 sdi- 1 ,是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 ( CDK)的抑制物基因 ,与细胞增殖调控及细胞衰老密切相关 .本研究为了解正常细胞中 p2 1 WAF-1对生长因子的反应性 ,以及其在细胞衰老时的表现 .我们以不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞 ( 2 BS细胞株 )为实验对象 ,通过 Northern杂交术 ,观察表皮生长因子 ( EGF)对年轻 (低代龄 )细胞与衰老 (高代龄 )细胞 p2 1 WAF-1基因表达的影响 .结果显示 :p2 1 WAF-1在衰老 2 BS细胞中高表达 .EGF对年轻细胞 p2 1 WAF-1的表达有诱导作用 ,对衰老细胞有轻微诱导作用 ,在刺激后 3h左右达高峰 ,3～ 6h逐渐回落 ,并持续下降 .作用后 1 2h,其表达水平反而远低于作用前 .此作用在年轻细胞较为明显 .由此可见 :( 1 ) EGF对人二倍体成纤维细胞 p2 1 WAF-1的表达有双向性影响 ,先是一过性诱导 ,随后转为阻抑 ;( 2 )衰老细胞 p2 1 WAF-1对EGF的反应性有所降低