TGF-β1通过PI3K及ERK信号通路调节肺动脉高压过程中IGFBPs蛋白表达

目的:探讨大鼠肺动脉高压(PAH)过程中TGF-β1对胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)表达调节是否依赖于PI3K及ERK信号通路。方法:取健康成年SD大鼠26只,随机分成2组:PAH组,腹腔注射1%的野百合碱,剂量为60 mg/kg;对照(C)组腹腔注射生理盐水。于4周后超声检测肺动脉平均压力,取肺组织做HE染色,应用NIS-Element系统测量中膜厚度。原代培养肺动脉平滑肌(PASMC)细胞,分别加入TGF-β1及TGF-β1中和抗体后,Western-blot检测IGFBP3,IGFBP5,Smad2/Smad3表达。加入ERK特异性抑制剂PD98059或PI3K抑制剂LY294002,检测IGFBP3,IGFBP5表达。结果:野百合碱处理4周后,肺动脉高压组的平均肺动脉压力及右室/(左室+室间隔)比值显著高于对照组。TGF-β1可显著升高IGFBP3,IGFBP5及p-Smad3的表达(P0.05),而抑制TGF-β1则可显著降低三种蛋白的表达(P0.05)。加入LY294002抑制PI3K ERK后,IGFBP3和p-Smad2两种蛋白的表达量显著下调(P0.05)。加入PD98059抑制ERK后可显著降低IGFBP3及IGFBP5的表达水平(P0.05)。结论:PAH中TGF-β1升高可通过活化Smad2/Smad3上调IGFBP3和IGFBP5的表达。TGF-β1促进IGFBP3,IGFBP5表达的作用依赖于PI3K及ERK信号通路。     

Rab11a通过PI3K/AKT和Ras/MEK/ERK信号通路调节胰腺癌细胞凋亡和侵袭

目的:探究Rab11a在胰腺癌中的表达模式及其对肿瘤生长和转移的影响.方法:通过免疫组织化学法、RT-PCR和Western blot检测60例胰腺癌患者的癌组织和癌旁组织中Rab11a的表达.通过对人胰腺癌细胞系PANC1转染靶向Rab11a的小干扰RNA或过表达Rab11a的pcDNA3.1质粒考察Rab11a对细...     

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.     

Cyclosporin A通过MEK／ERK1／2信号通路调节滋养细胞titin表达

探讨MEK／ERK1／2信号通路在CyclosporinA(CsA)诱导滋养细胞表达titin中的作用。应用RT—PCR、Western blot检测CsA诱导的滋养细胞titin的表达水平,Western blot检测CsA作用于滋养细胞后ERK1／2的活化程度,并观察MEK特异性抑制剂U0126对其mRNA转录的影响。发现CsA以时间和剂量依赖方式诱导titin表达,并刺激滋养细胞ERK1／2的活化,U0126以剂量依赖方式抑制CsA诱导的titin表达。结果表明CsA通过活化MEK／ERK1／2信号通路诱导滋养细胞titin的表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育。     

ERK信号通路内源性负调控分子与白血病

白血病的发生发展与多种ERK内源性负调控分子密切相关,它们的下调或缺失是白血病形成的关键因素。对ERK信号通路内源性抑制分子的深入研究将有望为包括白血病在内的恶性肿瘤的治疗发掘新靶点。本文简要介绍了5类与白血病发生发展密切相关的ERK信号通路内源性负调控分子的ERK调控机制,并分析了它们与白血病的相关性。     

聚焦治疗肺动脉高压的靶向药物

肺动脉高压(PAH)是一种以血管收缩和重构所致的肺血管阻力升高为病理生理学特征的临床综合征,其呈进行性发展,最终可 导致右心衰竭甚至死亡,预后差。随着对 PAH 病理生理学机制的深入研究,该病所涉不同信号通路的关键位点逐渐被认识,相应的靶向 药物也不断涌现,它们的应用明显改善了PAH患者的生活质量和预后。综述针对PAH 发生发展过程中所涉的3条主要通路:前列环素通路、 内皮素通路和一氧化氮-鸟苷酸环化酶-环磷酸鸟苷通路以及其他靶点(如酪氨酸激酶受体和 Rho 激酶等)而开发的靶向药物研究进展。     

PI3K/Akt信号通路与肺纤维化

肺纤维化(pulmonary fibrosis)是进行性、致命性的疾病。其致病机制不明,治疗效果差。PI3K/Akt信号通路主要与细胞的生长、增殖、分化、凋亡及血管形成等有关。近年来,随着对PI3K/Akt信号通路的深入研究,发现其活化后可激活下游中的一些因子参与肺纤维化,且与其他通路协同作用促进肺纤维化的形成。因此该通路有可能成为治疗肺纤维化的新靶点。将PI3K/Akt信号通路参与肺纤维化形成的研究进展作一综述。     

Exendin-4通过JNK和ERK信号通路增强大鼠脂肪来源干细胞的增殖

目的:探讨Exendin-4对大鼠脂肪来源干细胞的(Adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖作用及其机制。方法:体外分离培养SD大鼠腹股沟处脂肪组织,流式细胞学方法鉴定分离的ADSCs,使用Exendin-4(Ex-4,0-50 nm/L)对P4代(第四代)ADSCs进行干预,采用MTT检测ADSCs的增殖情况,Western blot检测MAPK通路中JNK和ERK的磷酸化水平,使用相应的阻断剂来观测JNK和ERK通路对ADSCs增殖作用的影响。结果:分离培养的ADSCs高表达CD29、CD90和CD105,低表达CD31、CD34和CD45,符合间充质干细胞的表型。Ex-4以浓度依赖方式促进ADSCs体外增殖,10 nm/L为最适促增殖处理浓度。同时,Ex-4可以提高细胞中c-Jun和ERK的磷酸化水平,而给予相应阻断剂后,磷酸化蛋白表达减弱,细胞增殖能力也明显减弱。结论:Ex-4可以通过JNK和ERK通路增强大鼠脂肪来源干细胞的增殖。     

ERK3信号通路的活化阻止细胞增殖

ERK3是ERK家族中结构较为独特的成员,尤其在分子生物学特征上与ERK家族其他成员明显不同,如基因结构中外显子之间的大内含子、蛋白质结构中活化环的丝氨酸单磷酸化位点以及激酶C端的延伸序列等.ERK3具有独特的丝氨酸单磷酸化位点,导致所有以苏氨酸/酪氨酸双磷酸化位点为磷酸化靶点的MEK分子均不能活化ERK3.ERK3的C端延伸序列能与细胞周期蛋白D3结合并调控ERK3的亚细胞定位,从而影响ERK3对细胞周期的调节.据目前文献推测,ERK3调控细胞周期的信号通路可能为:Ras→B-Raf→ERK3激酶→ERK3→G1期CDK复合物减少→S期抑制因子增多→细胞增殖阻滞于S期→细胞停止增殖,进入分化.此外,ERK3信号通路的活化与细胞分化、胚胎发育、胰岛素分泌以及肿瘤的发生密切相关.     

Cyclosporin A通过MEK/ERK1/2信号通路调节滋养细胞titin表达

探讨MEK/ERK1/2信号通路在Cyclosporin A(CsA)诱导滋养细胞表达titin中的作用。应用RT-PCR、Western blot检测CsA诱导的滋养细胞titin的表达水平,Western blot检测CsA作用于滋养细胞后ERK1/2的活化程度,并观察MEK特异性抑制剂U0126对其mRNA转录的影响。发现CsA以时间和剂量依赖方式诱导titin表达,并刺激滋养细胞ERK1/2的活化,U0126以剂量依赖方式抑制CsA诱导的titin表达。结果表明CsA通过活化MEK/ERK1/2信号通路诱导滋养细胞titin 的表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育。     

MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其机制研究

目的:探讨MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的MEK抑制剂PD98059处理人结膜上皮细胞(HConEpiC),通过CCK-8法检测不同浓度PD98059作用不同时间(0、12、24、48 h)对人结膜上皮细胞增殖的影响,Western blot检测不同浓度PD98059对人结膜上皮细胞ERK1/2、P-ERK1/2表达的影响。结果:相比对照组(0μmol/L),不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)PD98059处理后的人结膜上皮细胞增殖率明显下降,呈剂量-效应关系,且随处理时间增加(12、24、48 h)其抑制作用也显著增强,差异均有统计学意义(P0.05)。不同浓度PD98059处理人结膜上皮细胞24 h后,其ERK及p-ERK1/2表达随处理浓度增加而降低,与对照组(0μmol/L)相比差异有统计学意义(P0.05),且二者表达量与细胞增值抑制率均呈显著负相关(r=-0.995、r=-0.968,P0.05)。结论:PD98059可抑制人结膜上皮细胞增殖,这可能与其下调ERK表达和减少其活化有关。     

Initiation of Oligodendrocyte Progenitor Cell Migration by a PDGF-A Activated Extracellular Regulated Kinase (ERK) Signaling Pathway

During CNS development, oligodendrocyte progenitor (OP) cells migrate from germinal zones to presumptive white matter tracts to generate myelinating oligodendrocytes. In vitro and in vivo studies indicate that platelet-derived growth factor-A (PDGF-A) is a potent chemoattractant for OP cells and important for normal distribution throughout the developing CNS. However, PDGF-A does not localize in concentration gradients corresponding to OP migratory pathways, as would be expected for a chemoattractant to direct migration. Therefore, the mechanism by which PDGF-A regulates OP distribution remains to be clarified. Here we show that PDGF-A induces OP migration and continuous exposure to PDGF-A is not required to maintain migration. Using pharmacological inhibitors, we show that a self-sustaining extracellular-regulated-kinase signaling pathway drives OP migration for up to 72 hours after the initial PDGF stimulus. These findings indicate PDGF-A may act to mobilize OP cells that then respond to distinct directional signals to distribute appropriately within the CNS. Special issue article in honor of Dr. George DeVries.     

PI3K/AKT/mTOR信号通路及其在卵巢癌治疗中的应用

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,发病率居于妇科恶性肿瘤第三位,死亡率居于妇科恶性肿瘤之首。目前对卵巢癌的标准治疗包括肿瘤细胞减灭术及卡铂和紫杉醇的联合化疗。PI3K/AKT/mTOR信号通路在卵巢癌的细胞增殖、侵袭、细胞周期进展、血管生成及耐药中发挥重要作用,是卵巢癌中最常发生改变的细胞内途径。本文对PI3K/AKT/mTOR信号通路及其在卵巢癌增殖和进展中的影响、PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂在卵巢癌中的治疗应用做简要综述。     

泛素连接酶对Notch信号途径的调节作用

Noah信号途径是生物进化过程中高保守的信号通路,对细胞的定向发育及成熟起到决定性的作用。Notch信号途径受到多种分子机制的严格调控。近年来,多项研究均突出了泛素化在调控Noah信号途径活性中的重要性。本文就四种E3泛素连接酶Su（dx）Itch、Sel-10、LNX以及Neuralized对于调控Noah受体及Notch信号途径配体的研究现况作一综述。     

泛素连接酶对Notch 信号途径的调节作用

Notch信号途径是生物进化过程中高保守的信号通路,对细胞的定向发育及成熟起到决定性的作用。Notch信号途径受到多种分子机制的严格调控。近年来,多项研究均突出了泛素化在调控Notch信号途径活性中的重要性。本文就四种E3泛素连接酶Su(dx)/Itch、Sel-10、LNX以及Neuralized对于调控Notch受体及Notch信号途径配体的研究现况作一综述。     

微波辐射对PC12细胞Raf/MEK/ERK信号通路相关分子表达的影响

体外培养PC12细胞,将其诱导分化为神经元后,建立微波辐射细胞模型,采用免疫印迹技术和图像分析技术研究微波辐射后Raf/MEK/ERK信号通路相关分子的动态表达变化规律,进一步探讨微波辐射损伤的分子机制。结果发现,微波辐射后6h～3d,假辐射组和辐射组PC12细胞中Raf-1、ERK表达均呈先增加后减少趋势,两组差别不显著,但辐射组Raf-1、ERK和CREB的磷酸化水平均较假辐射组明显升高,表明Raf/MEK/ERK信号通路活化增强可能是微波辐射致神经细胞损伤的重要机制。     

Ras-PI3K信号负性调节的H3K56乙酰化促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力

Ras蛋白常见的第12、13氨基酸残基突变引起的Ras信号通路异常与人类恶性肿瘤发生相关。然而,Ras致瘤信号通路是否涉及表观遗传学因素尚不明了。本研究旨在阐明人乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白H3第56位赖氨酸残基乙酰化修饰（H3K56ac）水平是否受Ras信号通路调控,以及H3K56ac水平对MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响。点突变结合基因转染揭示,与野生型比较,第12位氨基酸突变的Ras质粒（pEGFP-H-RasG12V）转染导致MCF-7细胞内H3K56ac水平明显降低。采用可特异激活Ras下游3条通路（Ras-Raf、Ras-RalGEF和Ras-PI3K）的3种质粒（pEGFP-H-RasG12V T35S,pEGFP-H-RasG12V E37G和pEGFP-H-RasG12V Y40C）转染证明,只有转染pEGFP-H-RasG12V Y40C的MCF-7细胞内不仅有Ras-PI3K-AKT通路被激活,且与H3K56ac水平下调相伴;而其他两条通路的激活不影响H3K56ac水平。MTT法结合Transwell、软琼脂克隆形成能力实验证明,RasG12V Y40C转染增强细胞增殖、迁移和克隆形成能力。上述结果表明,MCF-7细胞中H3K56ac水平受Ras-PI3K通路的负性调控,但不受Raf和RalGEF通路影响。Ras-PI3K激活导致的H3K56ac水平降低可增强乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力。总之,这些结果提示,组蛋白H3K56ac是Ras-PI3K致瘤信号通路中的重要成员。Ras信号通路与组蛋白修饰相结合研究将会加深对乳腺癌细胞增殖和迁移调控机制的认识。     

MiR-942-3p as a Potential Prognostic Marker of Gastric Cancer Associated with AR and MAPK/ERK Signaling Pathway

Gastric cancer is a common tumor with high morbidity and mortality. MicroRNA (miRNA) can regulate gene expression at the translation level and various tumorigenesis processes, playing an important role in tumor occurrence and prognosis. This study aims to screen miRNA associated with gastric cancer prognosis as biomarkers and explore the regulatory genes and related signaling pathways. In this work, R language was used for the standardization and differential analysis of miRNA and mRNA expression profiles. Samples were randomly divided into a testing group and a training group. Subsequently, we built the five miRNAs (has-miR-9-3p, has-miR-135b-3p, has-miR-143-5p, has-miR-942-3p, has-miR-196-3p) prognostic modules, verified and evaluated their prediction ability by the Cox regression analysis. They can be used as an independent factor in the prognosis of gastric cancer. By predicting and analyzing potential biological functions of the miRNA target genes, this study found that the AR gene was not only a hub gene in the PPI network, but also associated with excessive survival of patients. In conclusion, this study demonstrated that hsa-miR-942-3p could be a potential prognostic marker of gastric cancer associated with the AR and MAPK/ERK signaling pathways. The results of this study provide insights into the occurrence and development of gastric cancer.