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1.
根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5’端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个氨基酸,轻链可变区基因全长321bp,编码107个氨基酸。 相似文献
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抗人CD3单抗重,轻链可变区基因的体外扩增,克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5'端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个 相似文献
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浑球红细菌谷氨酰胺合成酶基因(glnA)及PⅡ蛋白基因(glnB)的序… 总被引:1,自引:1,他引:0
测定了浑球红细菌的glnA和glnB基因DNA序列,共2707nt。其中glnA基因编码区为1401nt,编码467个氨基酸;glnB基因编码区为336nt,编码112个氨基酸。DNA序列的G+C百分含量为65%,它们的密码子第三位GC利用率高灰89.1%。 相似文献
4.
以人成骨肉瘤细胞株HOS-8603为热休克模型,在利用DDmRNA方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的cDNA片段的基础上,以该片段为探针,筛选HOS-8603细胞的cDNA文库,获得该基因的全长cDNA克隆(HSSG-1);DNA序列测定表明该cDNA全长1456bp,编码276个氨基酸,经计算机辅助分析,该cDNA序列尚未被报道。经RNA斑点杂交证实,该基因的表达于多种组织细胞之中,并且 相似文献
5.
玉米苹果酸脱氢酶基因的分离与结构分析 总被引:9,自引:0,他引:9
以一个玉米(ZeamaysL.)杂种一代超亲表达的cDNA片段为探针,从玉米幼苗期cDNA文库中筛选到一个全长1287bp的cDNA克隆。序列分析表明,该cDNA编码细胞质苹果酸脱氢酶,推导的氨基酸序列与龙须海棠(Mesembryanthemum crystallium L.)及拟南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.)同一编码基因的氨基酸序列同源性分别为90%和84%。这是禾谷类作物中首次克隆的编码细胞质苹果酸脱氢酶的完整基因。 相似文献
6.
利用多聚酶链反应技术,从人膀胱癌细胞系5637细胞中快速扩增并克隆了人粒细胞集落刺激因子cDNA,序列分析证明,该cDNA包含人粒细胞集落刺激因子的全部编码基因,全长612bp,编码30个氨基酸的信号肽和174个氨基酸的成熟蛋白。其中第43位codon出现一个碱基的突变(CAC→TAC)导至第43位氨基酸的改变(组氨酸→酪氨酸)。经逆转录病毒导入SP2/0细胞并初步表达。结果表明:该基因产物具有G 相似文献
7.
烟草花叶病毒蚕豆株系外壳蛋白基因及3‘端非编码区的克隆与序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据烟草花叶病毒U1株系序列,人工合成引物,用RT法合成了cDNA后,通过PCR技术扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系的外壳蛋白的基因和3‘端非编码区。DNA序列测定结果表明,外壳蛋白基因全长480个碱基,编码158个氨基酸,3’端非编码区全长204个碱基,与TMV-U1株系的同源率为100%。 相似文献
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岸蟹(Carcinus maenas)金属硫蛋白cDNA及其基因的克隆 总被引:3,自引:0,他引:3
利用已知的C.maenas金属硫蛋白氨基酸序列资料,用全简并的PCR引物,从鳃组织总RNA中扩增出两种金属硫蛋白cDNA片断,并将其克隆到pGEM-T载体中,序列测定表明,其中一种cDNA片断核苷酸序列和推知的C.maenas金属硫蛋白核苷酸序列完全吻合;另一种cDNA片断则在3’端有较大变异。根据前者cDNA片段序列设计特异性引物,扩增并克隆了其编码区全长cDNA和其编码基因,测序结果表明,岸蟹 相似文献
9.
将编码番茄核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基转运肽的一段DNA序列与菠菜Rubisco大亚基的编码区连接,构建了一个Rubisco融合基因。限制性内切酶图谱和DNA序列分析证明副合部位的核苷酸序列符合构建前的三联密码子框架。将Rubisco融合基因转入E.coli,用IPTG进行诱导表达。利用蛋白质印迹技术检测到诱导产物的存在。 相似文献
10.
大鼠OB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
采用RTPCR技术扩增大鼠OBcDNA编码区序列。PCR产物酶切后定向克隆至pUC19质粒。经核苷酸序列测定表明与文献报道的大鼠OBcDNA编码区序列一致。继之构建了pBV220rOB表达质粒并获得了OB基因在大肠杆菌中的特异表达。大鼠OB基因产物的获得为研究肥胖与某些非传染性疾病(如糖尿病、高血压病)间的关系提供了条件 相似文献
11.
周京旭 《国外医学:分子生物学分册》2000,22(3):185-189
基因免疫的研究已成为免疫治疗研究的热点之一。其产生的机制目前认为主要是注射的DNA直接转专职递呈细胞,它可激活CD4T细胞、B细胞和CD8T细胞。但也有证据表明DNA转染的肌细胞或角质细胞生产抗原后,转送给浸润在附近递呈细胞,激活相应的细胞。DNA免疫刺激序列的发现,使人们在基因免疫时应用或设计特殊DNA的结构成为可能。细胞因子和共刺激分子是基因免疫中最有前任的生物佐剂。 相似文献
12.
以赤霉素(GA)处理后的G2豌豆为材料,构建了一个2.0×106的cDNA文库,用随机筛选法从该cDNA文库中得到一个完整的cDNA.其中1115bp全序列分析表明,它编码了豌豆5S核糖体RNA(5SribosomalRNA,5SrRNA),基因内部存在着与核糖体蛋白L5及5SrRNA结合蛋白(5SrRNABindingProtein)同源的区段,这些同源区段是蛋白与RNA结合的位点.基因内部还存在着大量的重复序列. 相似文献
13.
DNA修复基因RAD24的分子克隆和序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
利用缺口修复(gaprepair)方法克隆啤酒酵母(S.cerevisiae)野生型RAD24基因,并将其亚克隆到M13mp18和M13mp19,用双脱氧末端终止法对该基因的两条链均进行了序列测定,DNAStrider程序分析显示该基因编码268个氨基酸的蛋白质,基因缺失试验表明,该基因为细胞生存所必需。 相似文献
14.
谷子(Setaria italica)叶绿体DNA 含有rbcL基因的3.0 kb Bgl Ⅱ+ XbaⅠ酶切片段被克隆到pBluescript SK (- )质粒载体上,并构建了该基因的限制性酶切图谱,测定了该基因的1990 bp 全序列。其中基因的编码区长1431 bp,共编码476 个氨基酸,推测其分子量为52679 D。其389 bp 的5′上游区含有类似于原核生物的- 10 box、- 35 box 和SD序列。其170 bp 3′下游区含有3 个茎环结构。对C4 植物和C3 植物中的rbcL基因序列进行比较,表明在编码区、启动区和3′下游区没有差别。由此认为C4 植物中rbcL基因的细胞特异性表达与其序列无关 相似文献
15.
鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
鸡马立克氏病病毒BamHI基因文库I3质粒中含有编码B抗原膜外Domain的DNA序列。经ScaI和SphI双酶酶解I3质粒,分离获得764bpDNA片段,并克隆进M13mp19中。DNA序列测定分析表明克隆片段为MDV-B抗原基因的494-1258bp部分序列。进一步分离NcoI-HindIII部分基因片(530bp),克隆于PLPromoter控制下的含有修饰型cIts857基因的表达载体中, 相似文献
16.
LDL受体基因cDNA的RT—PCR分离,克隆及其在RFLP中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术分离低密度脂蛋白受体基因cDNA,将长为2605bp的cDNA插入质粒pJN6,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第754位C→T,和1654位的G→A,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用LDL受体基因cDNA中的ClaI片段的作为探针,检测到LDL受体基因上外显子8的StuI位点是个限制性片段长度多态性位点,所克隆的cDNA含有可译框架的全 相似文献
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香蕉束顶病毒基因克隆和序列分析 总被引:11,自引:0,他引:11
对香蕉束顶病毒(BBTV)中国分离株DNA组份I(DNA-1)、外壳蛋白(CP)和运转蛋白(MP)基因进行了克隆和序列分析。BBTVDNA-1含有1103个核苷酸,与南太平洋和亚洲分离株分别有87%-88% 96.9-98%的核苷酸序列同源性。由DNA-1编码的复制酶含有186个在酸残基。与南太平洋和亚洲分离株分别有84.4%-95.8%和97.6%、98.0%的氨基酸序列同源性。外壳蛋白基因由5 相似文献
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反义寡聚脱氧核苷酸(ODN)衍生物抑制乙肝病毒抗原表达的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为比较针对中不同基因的ODN硫代衍生物阻断乙型肝炎病毒(HBV)的抗原表达,合成了与核心蛋白编码基因起始码上游序列,多聚酶蛋白编码基因起码上游及内部序列3.5kbRNA3'端起始负链DNA合成序列互补的寡聚脱氧核苷酸硫代衍生物,分别在HBV短暂表达和稳定表达细胞培养系统中观察其抑制HBV抗原表达的作用。结果发现,当培养液中ODN浓度为20μmol/LJF ,四种ODN均能抑HepG2.2.15细胞 相似文献
19.
朱应葆 《中国生物化学与分子生物学报》1995,11(5):541-550
利用缺口修复(gaprepair)方法克隆啤酒酵母(S.cerevisiae)野生型RAD_(24)基因,并将其亚克隆到M13mp18和M13mp19,用双脱氧末端终止法对该基因的两条链均进行了序列测定。DNAStrider程序分析显示该基因编码268个氨基酸的蛋白质;基因缺失试验表明,该基因为细胞生存所必需。 相似文献
20.
蝶兰胚珠发育基因的表达及序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
对从蝶兰(Phalaenopsissp.)成熟胚珠的cDNA文库中获得的cDNA克隆O138的时空表达特性和序列进行了分析。Northern分子杂交结果显示出该基因的mRNA在成熟胚珠和根中大量积累,但在大孢子母细胞时期的胚珠和子房组织中积累水平很低。DNA序列分析表明,该基因含一个编码284个氨基酸,分子量为30kD蛋白的开放阅读框架。O138是一个与成熟胚珠发育相关的基因。 相似文献