黑麦叶肉原生质体的分离、培养与幼小愈伤组织的形成

黑麦叶肉原生质体系用纤维素酶溶去壁后分离出来的。酶液混合液为:纤维素酶(2％)、果胶酶(0.5％)溶于0.65M的甘露醇中,保温在24～26℃。将生长5—6天的黑麦叶片在酶掖中处理2—3小时后,就可使90％以上的原生质体分离下来。将每毫升含有5×10~4—10~5密度的原生质体培养在液体培养基中(表1),其中附加2,4-D(1毫克/升)、6BA(0.5毫克/升)、CH(1克/升)和0.56M蔗糖。培养条件为光照800—2000米烛光,温度23—26℃。培养48小时后长出新壁。第3天出现第一次分裂,4—7天进行第二、三次分裂,9天后形成细胞团,25天后长成大细咆团。此后,定期加等体积的新鲜培养液,继续培养一个时期后便形成了幼小愈伤组织。     

枳多芽苗的诱导

枳幼苗茎段的腋芽在含BA(0.5毫克/升)和NAA(2毫克/升)的MS培养基上能诱导出大量丛生芽,丛生芽苗茎段的腋芽在含BA(0.5-2毫克/升)的MS继代培养基上又可增殖,将无根幼苗分别转至含IAA、IBA和NAA(均为1毫克/升)的MS培养基上则生根形成完整植株。     

石梓茎尖培养

植物名称:石梓(Gmelina arborea)材材类别:侧枝顶芽。切取5毫米左右的茎尖接种。培养条件:基本培养基均为MS。(一)不定芽分化培养基,每升添加1.0毫克BA;(二)幼苗培养基,每升添加0.8毫克BA和0.5～1.0毫克IAA;(三) 生根培养基,每升添加0.5毫克IBA,或先经125ppm浓度的IBA溶液处理,再培养在无激素的液体MS培养基上。培养温度在24℃以上,室内自然散射光。生长和分化情况:(一)在MS+BA 1.0毫克/升培养基上,培养十天以后,逐渐形成3～4个或更多个不定芽,间或有少量幼苗形成,二十天以后如不转移到MS+BA     

紫云英叶片及叶肉原生质体的培养

本工作研究了豆科植物紫云英的叶片及叶肉原生质体的培养。叶片培养实验表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS加1.0-2.0毫克/升2,4-D和0.25毫克/升KT;诱导根分化需加1.0—5.0毫克/升NAA和0.5毫克/升BA;而苗分化则以0—0.5毫克/升IAA和0.5毫克/升BA为好。高浓度的NAA有利于根分化而抑制茎芽形成;高浓度的IAA对根和芽分化都有抑制作用。叶肉原生质体分离和培养试验表明,紫云英叶肉原生质体的释放及其培养活力受叶龄、植株生理状态和酶浓度的影响。叶肉原生质体在改良的KM8P培养基中能分裂。用改良KM8细胞培养基定期稀释,可使分裂持续进行而得到细胞团。BA和2,4-D为诱导紫云英叶肉原生质体分裂所必需。其最佳组合激素为BA 0.21毫克/升和2,4-D 1.13毫克/升。葡萄糖作为渗透压稳定剂时,其浓度明显影响原生质体的存活率。弱光条件下培养比黑暗培养有利于叶肉原生质体分裂。由叶肉原生质体形成的愈伤组织能形成瘤状结构和根。     

甜茶组织培养研究

甜茶的茎段和实生苗培养在MS基本培养基中,研究植物激素对器官形成的影响,试验结果表明BA0.5-2.0毫克/升明显促进芽的形成和增殖;而对照(基本培养基)无形成芽。细胞分裂素对芽的起动是必需的。BA0.5-2.0毫克/升和GA_s1.0毫克/升配合使用,对茎段形成芽和增殖反而减少,但形成的苗较高和幼叶生长良好。通过继代培养,可繁殖大量小苗,它揭示出同一块外植体生长出许多小植株的可能,将无根苗转入含有IBA0.25-0.50毫克/升的1/2MS培养基中,能诱导生根,发展完整植株。试管苗移植土壤中,获得成功,幼苗生长良好。     

罗汉果叶组织培养的研究

用MS基本培养基培养罗汉果叶组织,研究植物激素对形成器官的影响。不同细胞分裂素的试验结果表明:在试验浓度范围内(0.5—1.0毫克/升)。BA明显促进茅的形成,KT和对照(基本培养基)均无形成茅,BA为罗汉果叶组织形成芽所必需的。IAA或IBA0.5毫克/升和BA1.0毫克/升配合使用。对叶组织形成芽有增效作用。茅进一步长出茎叶,将茎叶转入含有NAA0.2毫克/升的1/2MS的生根培养基,明显促进根的形成和发展成完整植株。 我们进行长滩果,拉江果及青皮果等三个罗汉果主要品种的叶组织离体培养,均能诱导形成丛生茅,将丛生叶分开,可不断扩大繁殖,促进芽的增殖,能获得大量绿苗。幼苗移栽土壤获得成活,成活率达80—100％,幼苗生长良好。     

烟草单倍体植株的大孢子发生和雌配子体败育

单倍体植株小孢子母细胞减数分裂现象,一些作者曾作过大量观察,但有关大孢子发生过程中减数分裂和胚囊发育情况,工作和报道较少。本文较为系统地观察了花药培养得到的再生单倍体植株大孢子母细胞减数分裂和胚囊发育过程,从大孢子角度为单倍体植物增添了具体的细胞学和胚胎学内容。供试材料烟草(Nicotiana tabacum c.)“金星”品种(2n=48)花药接种于附加KT 2毫克/升,IAA 0.5毫克/升的H固体培养基上。约40天形成愈伤组织后转移到NAA 0.15毫克/升,IAA 0.375毫克/升的MS固体培养基上,待分化出小苗后经盆栽适应,再定植于大田中。用FAA和纳瓦兴液固定单倍体植株不同长度花     

生长激素对油菜苔段分化成苗的影响

在B_5培养基上,研究了不同激素、不同激素浓度和比例,以及不同生长素对油菜(Brassica napus L.刁叶青品种)苔段分化成苗的影响。结果表明:①5～10毫克/升的BA,ZT和KT均可使苔段分化成苗,但BA和ZT效果好,KT效果差。②激素配合使用,有利于苗的分化,其中以BA2毫克/升 ZTl毫克/升效果最好,分化频率高,苗数多,生长正常。③激素和生长素配合使用,对苗的分化也有明显影响。在BA2毫克/升 KT1毫克/升的基础上,附加0.5毫克/升的2,4-D、NAA,或IAA均抑制苗的分化。若同时追加0.5毫克/升的NAA IAA,NAA GA_3,仅分化出大量的根,而未分化成苗。④激素和GA_3配合使用,明显促进苗的分化和生长。⑤在B_5 3％蔗糖的培养条件下,能成功地诱导根的生长。由于从苔段能分化出大量的苗和诱导生根,并形成完整的植株,这对油菜的育种和繁殖均有利用价值。     

单倍体水稻体细胞组织的植株再生及其激素调节

本文报道激素对调节单倍体幼穗组织去分化与分化的方向以及器官形成的影响。发现在试验浓度内(2毫克/升),2,4-D诱导组织去分化,NAA诱导根的大量形成,KT抑制愈伤组织形成和器官分化。KT2毫克/升 NAA2毫克/升使外植体不经过愈伤组织阶段就直接分化大量的苗。当KT/NAA=2:2时,直接分化苗的频率较高,达76％,不同浓度的2,4-D试验表明,2,4-D2毫克/升或4毫克/升时,愈伤组织诱导率高达94％以上。固体和液体继代培养中,低浓度的2,4-D(0.5—0.1毫克/升)加0.1毫克/升的KT,对愈伤组织保持旺盛的生长和后来的分化有良好的作用。发现单倍体体细胞组织再生的植株,白苗很少。讨论了单倍体体细胞愈伤组织无性系用于诱发突变和体细胞遗传研究的可能性。对于愈伤组织的再分化,不仅需要细胞分裂素,而且诱导培养基中生长素浓度的影响也是显著的。     

小麦(Triticum vulgare)花粉植株的诱导及其形态发生过程的研究

采用离体培养小麦(Triticum vulgare)花药的方法成功地诱导小麦花粉形成了单倍体植株。在附加2—20毫克/升的2,4-D 和各种有机附加物的 MS 培养基上,属于27个杂种或品种的21094个花药中有103个花药产生了愈伤组织,这些愈伤组织均着生在裂开的药室内,显微观察证明它们是由花粉经过多次细胞分裂形成的。花粉愈伤组织转移到含有0.2—2毫克/升的萘乙酸和0.2—2毫克/升的激动素或含有0.5毫克/升的吲(口朶)乙酸和15%椰乳的 MS培养基上培养5天以后,即陆续分化出幼苗。此外还发现接种在含有20%椰乳或吲(口朶)乙酸及激动素各2毫克/升的 MS 培养基上的花药直接从药室内产生出幼苗。已检查的6株幼苗的根尖细胞的染色体数均为21,表明它们是单倍体。单倍体植株能够抽穗而不结实。     

Histo-Cytological Observations on Callus and Bud Formation in Cultures of Nicotiana tabacum L.

Leaf explants of tobacco were cultured on MS medium supplemented with 2 mg/ l NAA and 0.5 mg/l BA for induction of callus formation, or supplemented with 2 mg/l BA for bud formation. Histocytological observations on callus and bud formation were carried out. Three days after cultivation, mesophyll cells enlarged, the nuclei became more apparent and dark stained, and starch accumulated in the cells. Cell divisions began in the mesophyll cells at the cut ends, in the palisade cells near the vascular bundles and in the vascular parenchyma. Mitotic activity then spreaded over tbc explants, and was most active at the edges of leaf explants. Regular rows of cells appeared as a result of series of transverse divisions in the palisade. The number of chloroplast in the mesophyll cells decreased and degenerated gradually. A number of meristemoids ware initiated in the cultured leaf explants after 7 days of cultivation. They were originated from two kinds of tissues, the mesophyll and vascular bundle, including the phloem parenchyma and vascular sheath. On the medium with NAA and BA, callus formation was induced with vigorous divisions, whereas bud primordia were differentiated from the meristomoids on the medimn with 2 mg/l BA. The buds were developed from both the superficial meristemoids and the meristematic regions deep within the callused leaf explants. The accumulated starch in the cells gradually disappeared as bud formation proceeded.     

不同分化状态的白百利烟草愈伤组织在生长过程中核酸蛋白质的变化

本文报道了在正常分化芽和根、诱导芽或恨定向发生的白百利烟草(Nico-tiana tabacum Baibaili)愈伤组织在生长过程中DNA、RNA和蛋白质变化的结果。MS+0.2mg/1NAA+0.2mg/1 KT诱导白百利烟草愈伤组织正常分化出芽和根,MS+0.05mg/1NAA+2mg/1KT诱导愈防组织定向地芽发生,MS+0.5mg/1NAA+0.05mg/1KT诱导愈伤组织定向地根发生。在定向诱导芽或根发生愈伤组织里的RNA和蛋白质合成的第一个高峰出现,比正常发生芽和根的愈伤组织里DNA、RNA和蛋白质的第一个高峰迟5天,在芽发生的愈伤组织里DNA峰出现也迟5天,在根发生的愈伤组织里DNA蜂,则相同于正常分化的愈伤组织DNA峰出现。外源的植物生长物质诱导器官定向发生的作用表现在RNA水平上。在三种分化状态的愈伤组织里,蛋白质组成在第8天表现出明显的差异。41KD和46KD蛋白质在器官的定向发生中可能起着相当重要的作用。     

Shoot regeneration and somatic embryogenesis from needles of redwood (Sequoia sempervirens (D.Don.) Endl.)

A rapid and effective system of somatic embryogenesis and organogenesis from the in vitro needles of redwood (Sequoia sempervirens (D.Don.) Endl.) had been established. The influences of plant growth regulators (PGRs) and days of seedlings in vitro on adventitious bud regeneration and somatic embryogenesis were studied. The process of somatic embryo formation was also observed. The results showed that embryogenic callus was induced and proliferated on Schenk and Hildebrandt (SH) medium with BA (0.5 mg/l), KT (0.5 mg/l) and IBA (1.0 mg/l). SH medium containing BA (0.5 mg/l), KT (0.2 mg/l) and IBA (0.2 mg/l) effectively promoted adventitious bud regeneration. The highest frequency (66.3%) of direct somatic embryogenesis was obtained in the combination of BA (0.5 mg/l) and IBA (0.5 mg/l). The optimal days of seedling in vitro for adventitious bud and somatic embryogenesis were 30 days and 30–40 days, respectively. The developments of somatic embryos were similar to that of zygotic embryogenesis. The result of histocytological studies indicated that proteins were gradually accumulated in the process of somatic embryo formation and there were two peaks of starch grains accumulation that one was in the embryogenic callus and the other was in the globular embryos. These results indicated that starch and protein were closely related with the energy supply and the molecular base of somatic embryogenesis, respectively.     

从石刁柏原生质体培养再生植株

石刁柏,又名芦笋(Asparagus officinalisL.)是百合科天门冬属植物。其栽培品种含有丰富的维生素类及蛋白质。同时,石刁柏对于某些疾病有一定的药效,因此它已成为人们所喜爱的一种高级营养蔬菜。国外已有不少关于石刁柏试管苗繁殖的报告,但至今只有Bui Dang Ha等从石刁柏枝状叶分离的原生质体得到愈伤组织,并由此愈伤组织诱导获得了再生植株。此后,未见在石刁柏的原生质体培养方面再有新的工作。在本文中,我们利     

小麦组织培养中体细胞胚胎发生的细胞胚胎学及淀粉消长动态的研究

小麦幼胚在附加2,4-D 2 mg/L+KT0.5 mg/L+LH 300 mg/L+3%蔗糖的MS 培养基上诱导出愈伤组织,继代2—3次后,降低2,4-D 的浓度,该愈伤组织约以60%的频率转变为胚性愈伤组织,继而形成不同发育期的体细胞胚。这些体细胞胚是起源于愈伤组织表层或近表层的单个胚性细胞,体细胞胚经球形胚、梨形胚、盾片胚、成熟胚而成再生植株。在胚性细胞内淀粉粒大最积累,淀粉颗粒大而密集。随着胚性细胞的分裂,淀粉逐渐被消耗,到多细胞原胚期,胚体细胞内淀粉粒趋于消失。球形胚期淀粉粒又开始积累,但到成熟胚期,淀粉积累只限于生长点区域,尔后随着胚体萌发,淀粉含量又趋于减少。这一消长动态过程与小麦合子胚发生中淀粉代谢动态基本一致。     

向日葵悬浮培养再生芽

从54份向日葵(Helianthus annuus L.)材料中筛选出三个再生能力较强的基因型,取其下胚轴诱导愈伤组织,再以愈伤组织制备悬浮细胞系。在 MS 添加 BA(0.5mg/l)和2,4-D(0.001mg/l)液体培养基上确定细胞生长量,悬浮培养细胞在去掉2,4-D 的 MS 培养基上能够诱导芽的再生。     

石刁柏组织培养中体细胞胚发生的组织细胞学观察

以石刁柏(Asparagus officinalis)无菌苗的嫩茎切段为外植体,在含有1 mg/LNAA+0.5 mg/L BA的MS培养基上可100%地被诱导形成愈伤组织,在此条件下可长期继代,将继代的愈伤组织转入含有2 mg/L 2,4-D 0.5mg/L NAA的MS培养基上后,约有70%的愈伤组织块转变为胚性愈伤组织,这些胚性愈伤组织在3,4-D浓度进一步降低为0.5mg/L的条件下发育形成体细胞胚。切片观察表明:这些胚性愈伤组织是从愈伤组织的表层或近表层产生的。这些细胞核大,多核仁,细胞质浓、染色深的胚性细胞中的一些单个细胞处于与邻近细胞隔离状态,细胞壁也明显加厚。这些单细胞开始分裂,第一次分裂多为不均等分裂,形成一个大的基细胞和一个小的顶细胞,进一步分裂形成三细胞、四细胞、五细胞和具胚柄的多细胞原胚。原胚发育形成球形胚、梨形胚、香蕉形胚,由于在胚的一侧细胞分裂旺盛形成单子叶突起,最后形成子叶胚。其发育过程类似于单子叶植物合子胚的发育过程。     

黑节草未成熟种子的形态发育及其在离体培养时的表现

黑节草(Dendrobium candidum Wall ex Lind.)2—6个月种龄的胚均处于球形胚阶段,不同种龄的胚在体积大小、胚细胞数目、胚细胞内的淀粉粒含量和超微结构上有差异。在离体培养条件下黑节草种子萌发率可达95％,种子萌发后形成原球茎,原球茎可以直接发育形成幼苗,又可以由原球茎产生大量愈伤组织,由愈伤组织再分化发育成幼苗。种子萌发过程中,胚顶端分生组织细胞的淀粉逐渐消耗,淀粉的变化与分生组织和子叶的形成有明显的相关性。     

百合鳞片细胞形态发生中生理生化特性研究

四倍体百合鳞片外植体脱分化形成愈伤组织过程其蛋白质、核酸含量与蛋白酶、淀粉酶、过氧化物酶ＰＯＤ、酸性磷酸酯酶活性先升高后降低,淀粉与ＡＴＰ含量呈降－升－降变化,ＳＯＤ活性先降低后升高,愈伤组织分化芽过程,除ＡＴＰ含量降低外,其余指标均不断升高．鳞片外植体直接分化发育不定芽过程中,仅见蛋白质、淀粉、ＡＴＰ含量与ＳＯＤ、酸性磷酸酯酶活性在５ｄ前降低,其它时间各项指标均升高,直到不定芽发育完成再下降．器官发生型比器官型经历了更为深刻的内部生理生化变化．