热应激时大鼠肺中肾上腺素能受体的变化及其调节机理

研究了急性热应激致大鼠肛温达42℃时即刻、持续15min及持续15min并在室温恢复4h后三种状态下肺肾上腺素能受体(α,β)的动态改变及其相应配基去甲肾上腺素(NE),肾上腺素(E)含量的改变。同时测定了肺中磷脂酶A_2(PLA_2)活性的变化。结果表明,急性热应激可使大鼠肺中肾上腺素能受体发生改变,内源性配基NE、E及PLA_2的活性也相应发生改变。NE和/或E含量以及PLA_2活性的改变在肾上腺素能受体变化的过程中可能起重要的调制作用。     

牛磺酸对大鼠肢体缺血倡灌注后肺损伤时磷脂酶A2的影响

目的：探讨牛磺酸对大鼠肢体缺血／再灌注后肺损伤时磷脂酶A2（PLA2）的影响。方法：实验采用大鼠肢体缺血／再灌注损伤模型,将Wistar大鼠30只随机分为3组（n=10）,对照组（control）、单纯缺血／再灌注组（1／R）、牛磺酸＋缺血／再灌注组（Tau＋I／R）,分别测定血浆丙二醛（MDA）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、超氧化物歧化酶（SOD）以及肺组织Taurine、XOD、SOD、MDA、髓过氧化物酶（MPO）的含量、肺湿／干比值（W／D）和磷脂酶A2（PLA2）的活性。结果：口服牛磺酸可有效地降低肺组织MPO、PLA2和XOD的活性．结论：牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤具有保护作用,其机制之一可能与降低PLA2活性和抑制炎症反应有关。     

热应激时大鼠肺组织中β-肾上腺素受体的变化与膜磷脂代谢的关系

本文观察了热应激对大鼠肺组织细胞膜中β-受体Bmax,磷脂酶A_2(PLA_2)活性,磷脂酰胆碱(PC),磷脂酰丝氨酸(PS)含量的影响及膜流动性的改变。测得正常大鼠肺中β-受体的B_(max),PLA_2活性,PC和PS值分别为479±94fmol/mg蛋白,78.5±8.2U,53.5±9.7mg/g湿重和425.1±68.1μg/g湿重;在热应激使肛温达42℃并持续15min时,β-受体B_(max)减少43％;PLA_2活性增加83％,PC和PS分别减少50％和47％;测流动性结果表明,热应激使红细胞和肺组织细胞膜流动性都明显减弱。作者认为这些变化之间的关系是:β-受体B_(max)的减少可能是热应激时激活了肺组织细胞膜中的PLA_2,加速了PC和PS等的分解代谢,使膜液晶态改变的结果。     

牛磺酸对大鼠肢体缺血/再灌注后肺损伤时磷脂酶A2的影响

目的:探讨牛磺酸对大鼠肢体缺血/再灌注后肺损伤时磷脂酶A2(PLA2)的影响。方法:实验采用大鼠肢体缺血/再灌注损伤模型,将Wistar大鼠30只随机分为3组(n=10),对照组(control)、单纯缺血/再灌注组(I/R)、牛磺酸 缺血/再灌注组(Tau I/R),分别测定血浆丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)以及肺组织Taurine、XOD、SOD、MDA、髓过氧化物酶(MPO)的含量、肺湿/干比值(W/D)和磷脂酶A2(PLA2)的活性。结果:口服牛磺酸可有效地降低肺组织MPO、PLA2和XOD的活性。结论:牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤具有保护作用,其机制之一可能与降低PLA2活性和抑制炎症反应有关。     

广西眼镜王蛇毒碱性磷脂酶A_2(PLA_2)的分离纯化及其性质的研究

广西眼镜王蛇毒用羧甲基纤维素CM-52、磷酸纤维素P-11和Sepharose CL-6B柱层析纯化,得到一个在聚丙烯酰胺凝胶电泳上为单一蛋白带,PLA_2的比活性较原蛇毒提高3.6倍,分子量的为13000,由122个氨基酸组成,_pI为8.9,具有良好的热稳定性。从碱性PLA_2对红细胞影响的电镜观察可见,对人的红细胞膜有明显的作用,而对山羊红细胞作用不明显。PLA_2无论对人还是对山羊、兔和豚鼠红细胞电泳速度都有明显的迟缓作用。     

腺苷预处理对培养大鼠心肌细胞"缺血-再灌注"性膜损伤的影响

目的探讨腺苷预处理对缺血-再灌注心肌细胞膜损伤的保护作用.方法将培养5天的SD乳鼠心肌细胞随机分成4组正常组常规条件下(DMEM培养基及95% 空气+ 5% CO2 气体环境)培养50min;拟缺血/再灌注组先在缺糖缺氧条件下(无糖Eagle 培养基及95% N2+ 5% CO2 气体环境)培养30min,再恢复常规条件培养20min;拟缺血预处理组先缺糖缺氧培养5min,再复氧复糖培养5min,反复3次后按模拟缺血/再灌注组操作;腺苷预处理组用含腺苷(0.15g/L)培养液在常规条件下培养10min,再作拟缺血/再灌注组处理.扫描电镜下观察各组细胞的变化,并用胶体苯胺染色及Ridit分析法对PLA活性进行半定量.结果与正常组比较,模拟缺血/再灌注组细胞的质膜和线粒体的结构损伤严重,PLA活性显著性增强.而模拟缺血预处理和腺苷预处理组细胞质膜和线粒体损伤较轻,PLA活性显著低于拟缺血/再灌注组.结论腺苷预处理对"缺血-再灌注"损伤心肌的细胞膜有保护作用,其机制可能与腺苷直接或间接地抑制PLA活性,增强质膜的稳定性有关.     

肠缺血/再灌注损伤后白介素1-β水平与磷脂酶A2激活的关系

为了探讨肠缺血/再灌注损伤后IL-1β基因表达和蛋白含量变化与磷脂酶A2抑制之间的关系,采用大鼠肠缺血/再灌注损伤模型,在对照组,损伤组和磷脂酶A2抑制剂处理组动物中收集血清,肺灌洗液,腹腔灌洗液及全身重要脏器组织样品,采用放射免疫法测定IL-1β含量,并且RT-PCR法测定肺组织中IL-1β和Ⅱ型PLA2基因表达,结果表明,损伤后6h血清中IL-1β含量明显高于对照组;损伤后1和3h,腹腔注保IL-1β也明显高于对照组;损伤后肝组织中IL-1β水平有明显增加,而肺,肾、肠组织中IL-1β没有明显变化。损伤后肺灌洗液中IL-1β也明显高于对照组水平,肺组织中IL-1βmRNA表达增加,而Ⅱ型PLA2mRNA在损伤后表达反而有所下降,采用磷脂酶A2抑制剂氯喹,环氧化物酶抑制剂消炎痛,血小板活化因子受体阻断剂SR27417后,IL-1β蛋白和基因表达有不同的改变,提示肠缺血/再灌注损伤后一定时间内,肝内IL-1βmRNA表达和血中IL-1β水平明显增高,但是否与磷脂酶A2激活或其代谢产物的释放有关尚需进一步证明。     

磷脂酶参与二萜类化合物冬凌草甲素(oridonin)对拟南芥的化感作用

为探究二萜类化合物冬凌草甲素(oridonin)对拟南芥的化感作用机制,本研究以冬凌草甲素为供体,以哥伦比亚野生型拟南芥WT和3个拟南芥磷脂酶A_1(PLA_1)、磷脂酶A_2(PLA_2)、磷脂酶C(PLC)的突变体株系pla_1、pla_2和plc_1为受体植物,通过施加不同浓度的冬凌草甲素(10、60μmol·L~(-1)),对4种拟南芥株系的种子萌发率、幼苗生长状况、相对电导率(EL)、丙二醛(MDA)含量以及3种磷脂酶活性进行了检测。结果表明:外施不同浓度的冬凌草甲素后,拟南芥种子萌发受到抑制,PLA_1和PLA_2参与此抑制过程;根长和下胚轴生长呈现典型的"低促高抑"趋势,PLA_1参与其对根的调控,PLC参与其对下胚轴的调控; 3种磷脂酶PLA_1、PLA_2和PLC酶活性均有不同程度的变化; EL和MDA增大且与浓度和时间呈正相关,PLA_2正调控10μmol·L~(-1)冬凌草甲素增大EL的过程,PLA_1和PLA_2共同响应60μmol·L~(-1)冬凌草甲素增大EL的过程; PLA_1和PLA_2共同作用正调控MDA积累过程;冬凌草甲素对植物的化感作用与磷脂酶有关,植物通过调控磷脂酶响应了冬凌草甲素的部分化感作用,且不同的磷脂酶在调控植物响应冬凌草甲素的生长过程中具有不同的作用。     

按摩对兔骨骼肌损伤修复自由基相关酶的活性的影响

目的通过检测按摩对兔骨骼肌钝挫伤修复过程中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、髓过氧化物酶(MPO)活力值,及细胞磷脂酶A2(PLA2)mRNA表达的影响,探讨按摩加快清除肌肉损伤修复过程中自由基的作用机制。方法选取新西兰大白兔42只,随机分为4组,即正常对照组(A组,n=3)、损伤组(B组,n=3)、按摩组(C组,n=18,包括损伤后第5d和第10d各9只)和自然恢复组(D组,n=18,包括损伤后第5d和第10d各9只)。A组实验兔不作处理,作为正常对照;B、C、D组实验动物用自制打击器来制备兔左后肢股四头肌损伤模型。C组于造模后第4天用按摩器施以按摩治疗,1次/天至处死取材;B、D组不进行按摩。各组于伤后5d及10d活体心脏取血,用于进行生化指标检测GSH-Px和MPO的活力值;取股四头肌样本,进行HE染色和实时荧光定量PCR法检测PLA2mRNA的相对表达量,并同A组正常股四头肌检测结果进行比较。结果正常组、损伤组、伤后5d及10d按摩组和自然恢复组的GSH-Px和MPO活力值经比较,按摩组较自然恢复组明显减少(P0.05);经按摩干预后,各组的PLA2mRNA表达量也显示,按摩组明显比自然恢复组减少(P0.05)。结论按摩可促进兔股四头肌损伤的修复过程,其机制可能是按摩能够通过加快清除损伤后自由基的产生,使中性粒细胞浸润减少,降低PLA2活性来保护细胞结构完整性,减轻疼痛。     

浙江蝮蛇毒磷脂酶A抗凝作用的研究

本文研究分析了从浙江产蝮蛇毒提纯的三种磷脂酶A(PLA)的抗凝活性,结果只有碱性PLA具有抗凝作用,而酸性PLA与中性PLA(Agkistrodotoxin)均无此作用。碱性PLA能显著延长血浆复钙时间和凝血酶原时间,影响血液凝血活酶的生成,抑制血小板磷脂与红细胞磷脂的促凝活性,但对凝血酶时间及纤维蛋白平板溶解试验无影响。这些结果表明,碱性PLA可能通过对膜磷脂的作用而干扰凝血酶原酶的形成。碱性PLA明显改变了血小板和红细胞的电泳速率,而酸性及中性PLA则影响较小,提示碱性PLA抗凝活性可能与膜磷脂特异活性部位的结合反应有关。     

日本蝮蛇蛇毒磷脂酶A2(Gln49-PLA2)的细胞毒性

从日本蝮蛇(Agkistrodonblomhoffiiussurens)蛇毒中分离得到PLA2同源物Gln49PLA2,该蛋白具有抗凝血活性、肌肉毒性,缺乏磷脂酶A2活性。分析了该蛋白质对不同培养细胞生长的影响,探讨其细胞毒性。结果表明:贴壁细胞的Gln49PLA2半致死量(LD50)明显低于悬浮细胞,肝素可以明显抑制Gln49PLA2的细胞毒性。将其作用于K562细胞,随着Gln49PLA2用量的增加乳酸脱氢酶(LDH)释放量增加,细胞凋亡率增大,线粒体膜电位下降,但Bcl2蛋白的表达量无明显变化。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒PLA2分离纯化及性质鉴定

目的 从长白山自眉蝮蛇粗毒中分离提取了一种新的PLA2,并对其进行了性质鉴定.方法 采用DEAE Sephadex A-25、Sephadex G-75、HPLC等层析方法 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳;磷脂酶A2活性测定.结果 得到了一种新的PLA2,分子量在14 kD左右,PLA2比活力为41μmol·mg-1·min-1,最适温度50℃,最适pH8.5左右.结论 长白山白眉蝮蛇毒存在一种新的PLA2同源物,具有PLA2活性,有较好的耐热、耐酸性.     

乳腺癌转移中的磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱分析（英文）

我们以前曾报道花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢产物可以促进乳腺癌细胞增殖和迁移.为了进一步寻找维持高转移乳腺癌细胞中AA高水平代谢的内源机制,深入探求AA代谢促进乳腺癌细胞转移的分子机理,我们应用HPLC/ESI/MSn技术检测和分析了乳腺癌MCF-7和高转移乳腺癌LM-MCF-7细胞中溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholines,Lyso PCs)和磷脂酰胆碱(phosphatidylcholines,PCs)的成分和含量.发现了10种Lyso PC的含量在LM-MCF-7细胞中显著高于MCF-7细胞,有6种PC可水解产生AA,它们在LM-MCF-7细胞中的含量显著低于MCF-7细胞,提示这些溶血磷脂含量的升高和磷脂含量的降低可能与乳腺癌转移相关.在LM-MCF-7细胞中,COX-2抑制剂吲哚美辛(indomethacin,Indo)和LOX抑制剂(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)共同作用可明显下调c PLA2的活性,应用HPLC-ESI-MSn技术比较c PLA2活性下调前后LM-MCF-7细胞中Lyso PC和PC含量的变化,发现其中4种PC可被c PLA2水解产生AA.还发现,细胞内Lyso PC与PC的比值可以反映c PLA2的活性.通过以上研究进一步证实了由c PLA2活性调节的AA释放及代谢对乳腺癌转移具有重要作用.     

中华蜜蜂PLA2基因的生物信息学分析及响应高温胁迫的表达模式

磷脂酶A2 (PLA2)对细胞膜流动性、膜蛋白活性等细胞生理功能有重要调节作用。高温等环境压力对细胞的生理代谢有较大的影响,其在生物体抗逆过程中的调控作用一直备受关注。本研究以中华蜜蜂Hymenoptera: Apidae: Apis cerana cerana PLA2基因序列为基础,对其蛋白结构进行预测,分析该基因在不同温度和高温不同胁迫时间下的表达差异,以揭示该基因在中华蜜蜂抗高温过程中的生理功能。结果显示,中华蜜蜂PLA2基因包含745 bp的开放阅读框,编码169个氨基酸,蛋白分子量为19.3 kDa,无跨膜结构,不属于膜蛋白。氨基酸同源序列比对结果显示,中华蜜蜂PLA2序列与蜜蜂科昆虫的相似性最高,与其他膜翅目昆虫的相似性存在差异。qRT-PCR结果显示,PLA2在35℃、40℃和45℃处理下的表达量较高,较高的温度能诱导该基因表达的增加。同时,PLA2的表达受高温胁迫时间的影响,较长时间的高温胁迫导致PLA2基因的表达增加。本研究结果表明PLA2在中华蜜蜂应对高温胁迫时发挥重要生理功能。     

广西眼镜蛇蛇毒磷脂酶A_2的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

目的对广西眼镜蛇毒中磷脂酶A2(PLA2)进行分离纯化,测定其对肝星状细胞HSC-T6的增殖抑制作用。方法采用Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱结合的方法分离广西眼镜蛇粗毒,经平板法测定各峰的PLA2活性;经SDS-PAGE电泳鉴定终产物纯度并测定分子量,NanoLC-ESI-MS/MS鉴定其组分;CCK-8法测定PLA2对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,确定其凋亡的最小毒性浓度。结果 Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱层析法,得到第Ⅲ峰具PLA2活性,且达到电泳纯,经NanoLCESI-MS/MS鉴定其为PLA2,分子量约为14.06kD;PLA2在0~1μg/ml的浓度下对HSC-T6细胞具有一定的促增殖作用,2μg/ml时细胞数达到最大值,4~16μg/ml时对细胞生长有抑制作用,且随浓度增大细胞数降低。结论采用Sephadex G-50、CM-Sepharose CL-6B、Macro-prep High S预装柱结合的方法对广西眼镜蛇毒进行分离纯化,得到电泳纯且具PLA2活性的磷脂酶A2;广西眼镜蛇毒PLA2对肝星状细胞HSC-T6增殖有抑制作用,PLA2对HSC-T6细胞的最小毒性浓度为2μg/ml。     

平颏海蛇碱性磷脂酶A_2的融合表达、纯化及活性特征

 将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2 的基因 (PLA2 9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 .2 5℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达 ,表达量达 2 0 %以上 .利用金属螯合亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化 ,得到纯度 85%的融合蛋白 .经肠激酶切割和离子交换柱层析进一步纯化后 ,得到浓度 95%以上的成熟PLA2 9.对重组PLA2 9进行了Western印迹检测 .重组PLA2 9具有与天然PLA2 相近的酶活性 ;并具有对HL60等几种肿瘤细胞的细胞毒作用 ,这在海蛇PLA2 中是首次报道 .平颏海蛇碱性PLA2 融合表达及快速纯化系统的建立 ,为深入开展其结构与功能关系研究奠定了基础     

平颏海蛇毒磷脂酶A2基因的多样性

通过对平颏海蛇毒腺cDNA文库的随机测序和PCR筛选,分离到3种未曾报道的磷脂酶A2（PLA3）cDNA,分别命名为PLA2－8,PLA2－9,PLA2－384。这些cDNA均含有完整的读码框（长度分别为456bp、438bp和438bp）,编码含27个氨基酸残基的信号肽和长度分别为4．8、7．8和8．4。氨基酸序列分析和二级结构预测表明,3种PLA2均属I类磷酯酶A2家族,其中PLA2－8与来自澳大利亚虎蛇Notechis scutatus scutatus的PLA2有81％的同源性;而PLA2－9和PLA2－384则与来自海蛇Enhydrina schistosa的肌毒PLA2有90％的同源性,这不仅预示着他们在功能上可能存在某些相似性,也反映出平颏海蛇PLA2的结构多样性。这组海蛇PLA2同功酶基因的成功克隆为进一步揭示PLA2的结构与功能关系及的分子机制提供了新的信息。     

弹丸腹壁浅层致伤犬的肠道细菌易位的初步观察

高速投射物所致远达效应造成多脏器损伤已得到证明。由伤口而致的外源性感染也有大量的报道,但远达效应能否致机体微生态发生改变?能否致肠道细菌发生易位?还未见报道。肠道细菌易位可能是危重病人 MSOF 的致病因素、也可能是创伤、烧伤病人难以解释的败血症的主要原因。目前认为发生肠道细菌易位有三个原因:(1)肠粘膜屏障的破坏,(2)肠道中固有菌群比例失调而致某种细菌过量生长和(3)宿主的免疫功能下降。此三点在创伤的啮齿动物实验中已得到证实,而在大动物中还未有人证实。远达效应是除原发伤道外,在无解剖联系的伤道外组织和器官也能致伤。据此我们设想:如肠粘膜发生损伤,     

花色苷提取物对大鼠发育关键期铅致肝脏和肾脏损伤的保护作用研究

为研究天然色素花色苷（anthocyanins,ACNs）对铅中毒引起的脏器损伤的保护作用,构建了铅暴露大鼠模型,灌服不同剂量的ACNs溶液和强力排铅药二巯基丁二酸（dithioglysuccinic acid, DMSA）,连续3周,于末次给药24 h后考察脏器中的铅含量、组织病理学、血液及脏器生化指标;并采用综合生物标志物响应（integrated biomarker responses, IBR）评估ACNs对铅致发育期大鼠肝脏和肾脏氧化损伤的修复能力。实验结果表明,铅大量存在于大鼠的肝脏和肾脏组织中,造成脏器病理学结构及氧化损伤;而ACNs可促进铅排出机体,改善组织病理学结构,使血清中转氨酶、肌酐等生化指标水平明显好转,并升高肝和肾抗氧化酶的活性,减少还原性物质的含量,改善铅诱导组织的氧化损伤;IBR分析结果显示,ACNs可使铅损伤的脏器得到明显的修复。结果表明,ACNs营养干预可有效拮抗铅致机体的氧化损伤,从而有效修复铅损伤的肝肾组织。     

乌司他丁对COPD合并呼吸衰竭患者血清COX-2，PGE2及PLA2 的影响

目的：探讨乌司他丁对慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者血清环氧化酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）,前列腺素E2 （prostaglandin E2,PGE2）及磷脂酶A2（phospholipase A2,PLA2）浓度的影响。方法：选取2014 年1 月至2015 年1 月我院收治的 80 例慢性阻塞性肺疾病患者,按照单盲法均分为实验组和对照组。对照组给予慢性阻塞性肺疾病常规对症治疗;实验组在对照组 常规对症治疗的基础上,给予乌司他丁治疗。检测治疗前后患者COX-2、PGE2 及PLA2 血清浓度。结果：两组COX-2、PGE2 及 PLA2 血清浓度,实验组治疗后均显著低于治疗前（P<0.05）;对照组治疗后均低于本组治疗前,（P<0.05）。实验组治疗前与对照组 无显著差异（P>0.05）;治疗后,实验组COX-2、PGE2、PLA2 血清浓度显著低于对照组,治疗后实验组肺功能FEV1、FVC均显著优 于对照组（P<0.05）。结论：乌司他丁治疗慢性阻塞性肺疾病合并呼衰患者能够显著降低其COX-2、PGE2 及PLA2 血清浓度,有效 改善患者炎症反应、细胞损伤及临床症状,为临床积极治疗慢性阻塞性肺疾病提供新的思路。