“乳珍”对哺乳类发育的某些生物学效果

服用“乳珍”后,实验动物的迷宫训练次数显著减少(p<0.05),腹腔巨噬细胞总数和吞噬指数明显提高(p<0.01)。人群试验显示,服“乳珍”者血浆游离牛磺酸和全血血红蛋白浓度明显上升(p<0.01),受试者体质得到改善。     

缺氧对新生大鼠海马培养细胞的影响

脑缺氧的研究,通常使用整体动物模型,为了排除麻醉、温度、酸中毒等因素的影响,有人用脑片方法,但不易鉴别神经细胞和非神经细胞发生变化的差别。体外培养的细胞易于进行形态观察分析,近年来已开始应用于缺氧的研究。本实验选用对缺氧较为敏感的海马脑区进行体外分散培养,探讨了缺氧对海马神经元的损害。     

不同缺氧时间对神经细胞中外源性HSP70表达的影响

目的:探讨不同缺氧时间刺激对神经细胞中外源性HSP70基因表达的影响.方法:采用重组腺病毒vAd-HSP70感染体外原代培养的神经细胞,48h后给予感染细胞不同缺氧时间(缺氧0h,0.5h,1h,2h,3h,4h)刺激,再复氧处理后,用RT-PCR和Westernblotting检测重组腺病毒介导的HSP70基因在神经元和胶质细胞中的转录表达.结果:重组腺病毒vAd-HSP70感染的神经细胞可检测到外源性HSP70基因的转录表达.经缺氧再复氧处理后,随着缺氧时间延长,HSP70转录水平和蛋白表达都增加,缺氧1h时最高(1.1539±0.0315,0.9699±0.0023),其次是缺氧2h时(1.0398±0.0723,0.9622±0.0026),随后依次降低,缺氧4h组(0.7477±0.0328,0.9335±0.0034)HSP70表达最低,与其他各组比较有统计学意义(P<0.05).结论:缺氧2h内给予神经细胞再复氧处理外源性HSP70表达水平较高,有利于神经细胞功能的恢复.     

缺氧对离体鸡胚前脑神经细胞生长的影响

在缺氧(95％N_2和5％CO_2)条件下进行8d鸡胚前脑的纯神经细胞培养。培养24,48和72h后,MTT微量比色法检测显示,甲(目替)明显减少,表明神经元已遭严重损害,同时,培养液中葡萄糖被急剧地消耗。但是,即使把糖浓度提高到800—1200mg/100ml,缺氧仍造成神经细胞死亡。结果提示,胚胎脑神经细胞对缺氧敏感,胶质细胞对缺氧神经元的保护可能不在于提供糖原。     

小白鼠缺氧耐受形成中不同脑区一氧化氮水平的变化

本研究组的研究证实,在重复缺氧产生缺氧耐受过程中,小白鼠体内通过某些机制的调节,减少了全脑组织ＮＯ合成。本实验通过观察小鼠在缺氧耐受形成中不同脑区ＮＯ水平的变化,旨在进一步探讨缺氧耐受产生的机制。1　材料和方法(1)试剂　4Ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ(4羟基香豆素,Ｓｉｇｍａ公司),乙腈(中国科学院上海脑研所,上海脑海生物科技公司)。(2)方法　①缺氧耐受模型　选体重为(18～22)ｇ昆明小白鼠雌雄不拘,随机分组:正常对照组、1次缺氧组、4次缺氧组(ｎ=10～13)。1次缺氧组、4次缺氧组,按急性重复缺氧方法,将小白鼠置于含有新鲜…     

热休克蛋白70与围产期缺氧缺血性脑损伤

围产期缺氧缺血性脑损伤是严重危害儿童健康的疾病。神经细胞代谢障碍、脑血流异常、潜在毒性产物氧自由基和兴奋性氨基酸等是造成脑损伤的主要原因。热休克蛋白７０是一类应激反应蛋白,缺氧缺血后其信息核糖核酸及蛋白在不同脑区有不同表达,可在一定程度上反映神经细胞的细胞状态及其对缺血缺氧的耐受程度。     

海马培养细胞的缺氧损伤及降钙素基因相关肽的保护作用

采用新生大鼠海马细胞进行分离培养,观察缺氧对海马培养细胞的影响以及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的保护作用。结果表明：培养１２ｄ的细胞置于缺氧环境（９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）中４─２４ｈ后,随着缺氧时间延长,神经细胞由肿胀、胞膜受损乃至死亡,台盼蓝染色细胞数增多,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和Ｋ＋漏出增加。经ＣＧＲＰ孵育的细胞缺氧后形态变化轻微,细胞死亡率以及ＬＤＨ和Ｋ＋漏出量均明显低于对照组。本结果表明,体外培养的海马神经元对缺氧甚为敏感。缺氧造成海马细胞严重损伤,ＣＧＲＰ对此有明显的保护作用。     

“乳珍”对体外培养细胞的作用

“乳珍”是我们利用牛初乳研制成的营养保健品,它不仅含有丰富的蛋白质、维生素和矿物质,而且含有多种生物活性物质。本实验研究了它对体外培养细胞的作用。 方法 一、鸡胚骨胳肌细胞的体外培养在无菌条件下,取9d龄鸡胚后肢肌肉,制成细胞悬液。用Eagle MEM(MEM中另加入右旋葡萄糖6g/L、青霉素钠盐10万U/L、硫酸链霉素     

细胞红蛋白在缺氧性脑损伤中的研究进展

细胞红蛋白(CYGB)是2002年德国科学家Burmester在小鼠和人体内发现的第四种携氧球蛋白,与肌红蛋白(MB),血红蛋白(HB),脑红蛋白(NGB)属于同一家族,是血红素蛋白家族的新成员.它广泛分布于各个组织器官,跟其他携氧蛋白一样具有携氧,贮氧,氧感受器的功能.研究发现其在脑特定区域神经细胞的细胞质和细胞核都有分布,能够受脑缺氧的诱导,体内、外实验均表明其在缺氧情况下表达上调,能增加脑组织对缺氧的耐受能力,抵抗氧化应激所致损伤.缺氧所导致的脑损伤发生率很高,而且此类脑损伤严重影响了人类的健康和生活.所以,对细胞红蛋白进行深入的研究和探讨对于缺氧缺血性脑病,脑卒中,脑肿瘤等缺氧性脑疾病的预防和治疗有重大意义.此综述,通过概括细胞红蛋白的结构,脑内的分布,对缺氧的反应等说明其对缺氧性脑损伤潜在的保护作用.     

多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖及缺氧耐受的影响

为了观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖和缺氧耐受的影响,体外培养H9C2心肌细胞后,将其分为对照组和多肽组,对照组只使用10%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)和胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)处理,多肽组在对照组处理的基础上分别加入浓度为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L的多肽K-YFAE,7 d后对各组细胞分别行CCK-8检测、细胞周期的流式细胞术检测、细胞周期相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖的影响;用三气培养箱对细胞行缺氧处理后分组,并分别行细胞凋亡的TUNEL检测和流式细胞术检测,以及细胞凋亡相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞缺氧耐受的影响。结果显示:与对照组比较, K-YFAE的干预可促进H9C2心肌细胞进入增殖期,并且减少其凋亡。实验结果初步表明,多肽K-YFAE既可以促进H9C2心肌细胞增殖,又可以增加其缺氧耐受。     

人参皂甙对缺氧大鼠海马DG区神经细胞DNA损伤保护作用的研究

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究急慢性缺氧大鼠海马DG区神经细胞细胞DNA损伤和人参皂甙对缺氧大鼠海马细胞DNA的保护作用.方法:健康成年SD大鼠随机分为急、慢性缺氧正常对照组、急性缺氧组和慢性缺氧组(分别在模拟海拔5000米高原环境连续缺氧暴露0d、3d和30d)、急性缺氧人参皂甙干预组、慢性缺氧人参皂甙干预组.应用SCGE检测海马DG区神经细胞DNA损伤.结果:随着缺氧时间的增加,海马DG区神经细胞DNA的损伤程度加重,尾长、尾部DNA百分含量和尾距显著增加(P＜0.05).人参皂甙能使缺氧损伤的海马DG区神经细胞的尾长、尾部DNA百分含量和尾距均较缺氧组减少(P＜0.05).结论:人参皂甙能有效地减轻缺氧引起的海马组织细胞DNA的断裂损伤.     

缺氧应激对肝癌细胞代谢信号通路的调节作用

通过实验阐明在缺氧条件下糖酵解相关基因表达的变化规律及对肿瘤细胞和正常细胞增殖的影响,并探索活性氧(ROS)介导肝癌细胞代谢途径及对相关基因表达和酶活性的调节作用.以SMMC-7721人肝癌细胞和L02正常肝细胞作为研究对象,分别在单纯缺氧及加葡萄糖缺氧条件下,观察细胞生长,并检测糖代谢关键酶:丙酮酸激酶(pyruvate-kinase,PK)、己糖激酶(hexokinase,HK)、琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)、异柠檬酸脱氢酶(isocitric dehydrogenase,IDH)mRNA表达水平和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性.还检测了pkb基因及缺氧诱导因子hif-1的表达.实验结果说明:a.肿瘤细胞较正常细胞具有更强的缺氧耐受性;b.缺氧条件下,糖酵解途径的增强是保证肿瘤细胞能快速增殖的机制之一;c.ROS通过HIF-1介导了糖代谢通路相关酶的基因表达,参与肝癌细胞缺氧信号通路调节,用抗氧化剂干预可以降低肿瘤细胞的缺氧耐受能力.     

兴奋性氨基酸在缺氧耐受形成中的变化

在缺血缺氧性脑损伤中 ,兴奋性氨基酸 (ＥＡＡ)起重要作用。但ＥＡＡ在缺氧耐受形成中的作用尚未见报道。本实验通过观察ＥＡＡ的ＮＭＤＡ(Ｎ 甲基 Ｄ 天门冬氨酸 )受体激动剂Ｌ ＧＬＵ(Ｌ 谷氨酸 )、受体拮抗剂氯氨酮对缺氧耐受的影响及在缺氧耐受中ＥＡＡ和抑制性氨基酸的变化 ,旨在初步探讨缺氧耐受的机制。1　材料与方法(1)试剂　Ｌ ＧＬＵ(上海伯奥生物科技公司 ) ;氯氨酮 (美国Ｓｉｇｍａ公司 ) ;ＡＱＣ(6 氨基喹啉 Ｎ 羟基 琥珀酰亚胺基甲酸酯 )及 18种氨基酸标准品 (美国Ｗａｔｅｒｓ公司 ) ;Ｄ 正亮氨酸 (中国科学院生物技术厂…     

霉变玉米面致突变作用的初步研究

把从林县分离出的串珠镰刀菌(FM),或串珠镰刀菌,黄曲霉,白地霉,圆弧青霉(FAGP)分别接种于玉米面窝头。这两种霉变食物的提取物明显增加V_(79)细胞和中国地鼠骨髓细胞的姐妹染色单体交换。接种FAGP的窝头提取物,在加入肝微粒体酶制备物后,还能诱导V_(79)细胞6-琉基鸟嘌呤耐受突变种(6-TG耐受)。将V_(79)野生型细胞(6-TG敏感)和V_(79)突变型细胞(6-TG耐受)混合培养时,这两种提取物都可以增加6-TG耐受V_(79)细胞的集落形成率。初步实验结果指出,霉变窝头中可能包含致突变物和促癌物。食用霉变食物对林县食管癌的发生可能起重要作用。     

缺氧环境下MSCs促进血管内皮细胞增殖和血管形成

目的 探讨成人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)在体外缺氧环境下对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖和血管形成能力的影响及其可能机制.方法密度梯度离心法收集分离成人骨髓血MSCs并进行体外培养扩增,传代至4代进行实验,流式细胞仪鉴定MSCs表面标志.BMSCs缺氧培养0h(对照组)、12h、24h和48h后,RT-PCR检测SDF-1和VEGF基因表达,ELISA法检测细胞上清液中SDF-1和VEGF蛋白含量.HUVECs传代培养后分成三组进行实验:对照组、BMSCsCMN-HUVECs组,BMSCsCMH-HUVECs组,MTT检测三组细胞增殖能力,体外血管形成实验分析三组细胞在Matrigel上管腔样结构形成情况.结果 (1) BMSCs呈旋涡状长梭形即纤维母细胞样生长;(2) 人BMSCs阳性表达CD29、CD44和CD90,而CD34、CD45和CD106为阴性;(3) BMSCs缺氧培养后SDF-1和VEGF在mRNA和蛋白水平表达均较常氧培养显著增高(P均<0.05);(4) BMSCsCMH明显提高HUVECs增殖能力(P<0.05),显著增加HUVECs在Matrigel上形成管腔样结构的能力(P<0.05).结论 人BMSCs在缺氧环境下通过旁分泌SDF-1和VEGF提高血管内皮细胞增殖和管腔样结构形成能力,促进血管新生.     

缺氧条件下人脐带源性间充质干细胞增强缺氧诱导因子-1α表达促进肺腺癌细胞增殖

目的探讨缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)在人脐带源性间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells, hucMSCs)促进肺腺癌A549细胞增殖过程中的可能机制。方法分离培养和鉴定hucMSCs,分别与肺腺癌A549细胞、干扰了HIF-1α基因的A549细胞在常氧或缺氧条件下进行共培养,荧光定量PCR和Western blot法分别检测HIF-1α和生存素(survivin)表达水平,MTT法检测细胞增殖力,划痕实验分析细胞迁移力。结果 MTT和划痕实验检测显示,常氧条件下,hucMSCs共培养的A549 细胞增殖能力、迁移能力较无hucMSCs共培养的细胞明显减弱;缺氧条件下,A549 细胞增殖力和迁移力较常氧培养的A549 细胞明显增强,hucMSCs共培养使二者进一步增强,沉默HIF-1α则使二者减弱,hucMSCs共培养不改变沉默HIF-1α对细胞增殖力和迁移力的影响。荧光定量PCR和Western blot检测显示,缺氧培养时,A549 细胞内HIF-1α和survivin表达明显上调,hucMSCs共培养明显增强缺氧对HIF-1α和survivin表达的上调作用;沉默HIF-1α抑制缺氧对A549细胞HIF-1α和survivin表达的上调,hucMSCs共培养不改变沉默HIF-1α对HIF-1α和survivin表达上调的抑制。结论缺氧条件下,hucMSCs共培养导致肺腺癌A549细胞HIF-1α和survivin表达上调,从而使A549细胞的增殖和迁移能力增强。     

抑制NF-κB信号通路对缺氧诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤的影响

本研究试图从细胞衰老和凋亡方面,探讨NF-κB信号通路抑制剂PDTC对缺氧诱导的小鼠海马神经细胞HT22的影响。实验研究以小鼠海马神经元细胞HT22细胞为细胞模型,设置4组,分别是Control组、缺氧组、缺氧+PDTC组、PDTC组(PDTC, NF-κB信号通路抑制剂)。用CCK-8法检测细胞存活率;hochest33258染色观察细胞凋亡情况;Elisa检查细胞Caspase-3水平;Western blotting检测衰老相关蛋白P16和P21的表达。CCK-8结果发现,与缺氧组比较,缺氧+PDTC组中HT22细胞数存活率明显升高;hochest33258染色结果示:与缺氧组比较,缺氧+PDTC组中hochest33258染色阳性HT22细胞数目显著降低;Elisa结果显示,缺氧+PDTC组HT22细胞中Caspase-3水平与缺氧组比较显著降低。Western blotting结果显示:与缺氧组比较,缺氧+PDTC组HT22细胞中衰老相关蛋白P16和P21表达明显降低。本研究初步结果表明,运用PDTC抑制NF-κB信号通路能有效拮抗缺氧对小鼠海马细胞HT22细胞的损伤作用。     

多巴胺能神经元的体外培养及其纯度鉴定

目的通过建立体外培养的多巴胺能神经元模型,应用于帕金森病(PD)的病因和发病机制等基础研究.方法用孕14d的胎鼠中脑嘴侧被盖部组织进行分散细胞原代培养,并用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色法鉴定其纯度.结果本实验可观察细胞历时20～30d的生长过程,并观察到细胞生长的第7～11d是细胞生长最旺盛的时期,最适宜加入处理因素观察细胞变化.培养10d的神经细胞进行TH免疫组化染色,可见胞浆被染成棕黄色的细胞遍布视野,阳性率达90%.结论体外培养的神经细胞可保持结构和功能上的某些特点,提供了体内生长过程在体外重现的可能,可广泛应用于PD病因和发病机制的研究.     

神经肽对神经母细胞瘤细胞分裂和代谢的影响

神经-内分泌-免疫系统作为机体的整合系统,在衰老变化的发生和发展过程中起着重要的作用。一些资料表明,伴随神经系统的老化,脑和脑脊液中一些神经肽也显著变化。本实验采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型,以流式细胞光度术研究神经肽对无血消培养的神经母细胞瘤细胞的细胞周期和细胞总蛋白的影响。以了解神经肽对神经细胞老化过程中的DNA和细胞总蛋白的影响。1 材料与方法     

长链非编码RNA母系印迹基因3(MEG3)通过p53促进缺血缺氧神经细胞损伤

目的通过小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系印记基因3(maternally imprinted genes 3,MEG3)在神经细胞缺氧缺血损伤中的作用,并初步探讨其机制。方法采用OGD模型诱导N2a细胞凋亡模拟神经细胞缺血缺氧损伤过程,实时荧光定量PCR检测MEG3的水平;在N2a细胞中过表达MEG3,采用PI染色检测细胞凋亡,Western blot和荧光素酶报告基因检测N2a细胞中过表达MEG3后对p53蛋白表达及转录活性的影响。结果经OGD处理后,N2a细胞MEG3水平较对照组(常氧组)明显增强;在N2a细胞中过表达MEG3能够激活p53转录活性,增强p53蛋白表达,促进细胞凋亡。结论 lncRNA MEG3可能通过p53促进凋亡,加重缺血缺氧造成的神经损伤。