高产铁载体荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens sp-f的筛选鉴定及其铁载体特性研究

采用改进的CAS检测平板从东湖中筛选得到了一株高产铁载体细菌sp-f,并用CAS检测液定量检测其分泌铁载体量,发现其As/Ar仅0.09(OD680),Su（Siderophore Unit）为90％,达到产铁载体菌最高级。用BIOLOG检测板,结合细菌生理生化反应、形态观察和16S rDNA序列比对分析等分类鉴定方法,确定sp-f为一株荧光假单胞菌。P. fluorescens sp-f生长过程中胞外铁载体的量在对数生长前期累积达到最高后有所减少,至稳定期时菌液中铁载体量达到稳定。在已知铁载体特异吸收峰波长下,用反向高效液相色谱检测无铁环境和高铁环境下培养液上清,比较发现sp-f上清含有3种含儿茶酚胺类基团铁载体,其中包括荧光和非荧光性的脓菌素,200 μmol/L Fe²⁺可完全抑制荧光性质脓菌素的分泌,但非荧光脓菌素的分泌不受抑制,并且对非脓菌素的儿茶酚胺类铁载体的合成分泌反而具有一定的诱导作用。     

Pseudomonas fluorescens sp-f铁载体高效液相凝胶色谱分析

利用高效液相凝胶色谱法对荧光假单胞菌所产铁载体进行了分析,结果显示高产铁载体P.fluorescens sp-f与P.fluorescens AB92001均可分泌3种铁载体,其中具有荧光的pyoverdine容易被细胞外的铁抑制。高效液相凝胶色谱法适用于假单胞菌铁载体的分析检测。     

假单胞菌荧光与非荧光铁载体对铁离子的应答差异

假单胞菌既能产荧光铁载体也能产非荧光铁载体.通过对假单胞菌在不同铁离子浓度下,在通用CAS(Chrome azroul S)检测平板、改进的蔗糖-天冬氨酸(SA)平板(MSA)上以及通用液体CAS培养基和MSA培养基内的铁载体产生情况的比较,发现在通用CAS的液体培养基上产生的主要为非荧光铁载体(pyochelin),而在改进的MSA培养基上产生的主要为荧光铁载体(pyoverdine);在铁离子的应答方面,pyoverdine较pyochelin灵敏,较低的铁离子浓度即可抑制荧光铁载体的产生,但是不能抑制非荧光铁载体.     

假单胞菌铁载体不产生突变体形成的进化机理

假单胞菌铁载体(Pvd)的产生是社会微生物学研究的一个重要模式系统:产生菌是合作者,而不产生菌是欺诈者。欺诈者可以不用付出Pvd合成的能量代价,而利用其他细菌产生的Pvd来获取生长所需的铁离子,因而处于竞争优势地位。合作与欺诈成为了当前解释自然界广泛存在的Pvd不产生菌进化形成的主要原理。本文将阐述荧光假单胞菌Pvd不产生菌形成的多条进化途径,并在此基础上剖析合作与欺诈原理的普遍适用性问题。     

油松菌根促生细菌——荧光假单胞菌的分离与鉴定

为了探讨菌根促生细菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)与菌根真菌的互作关系,本实验从油松菌根上分离得到36株在紫外灯下产荧光的细菌菌株,以荧光假单胞菌9702作为标准菌株,对分离菌株进行显微观察、生物学鉴定和16S rDNA序列分析,结果确定HDY-8、HDY-9、HDY-20、HDY-35共 4株菌株为荧光假单胞菌,并分别命名为P.fluorescens HDY-8、P.fluorescens HDY-9、P.fluorescens HDY-20、P.fluorescens HDY-35.用这4株细菌菌株分别与外生菌根真菌(ECMF)粘盖牛肝菌(Suillus bovinus)、褐环粘盖牛肝菌(Suillus luteus)和褐黄牛肝菌(Boletus luridus)进行纯培养互作研究.结果表明,只有P.fluorescens HDY-20对3种外生菌根真菌有不同程度的促生作用,并对S.luteus促进效果最好,S.bovinus次之,B.luridus最差;P.fluorescens HDY-20促进S.bovinus、S.luteus和B.luridus菌丝生长的最佳浓度分别为2.4×109 cfu/mL、0.8×109～2.4×109 cfu/mL和0.8×109 cfu/mL,与对照相比S.bovinus和S.luteus的生物量达到极显著差异(P<0.01),B.luridus的达到显著差异(P<0.05),且分别比对照增加6.5%、9.1%和4.3%.     

假单胞菌株JKD—2分泌铁载体抑制稻瘟病菌

利用铬奥醇（CAS）分析法测定了假单胞菌（Pseudomonassp．）JKD－2分泌铁载体的特征。在无铁环境下JKD-2菌能分泌高亲和力的铁载体;在低铁条件下,铁载体的分泌量减少;在富铁环境下,则不能分泌。结果还显示菌株JKD-2在无铁条件下分泌的铁载体,能在低铁条件下抑制稻瘟病菌（Piriculariaoryzae）的生长。     

高灵敏假单胞菌铁载体的平板检测方法

CAS蓝色检测平板是一种筛选、检测各类细菌铁载体的常用方法,而蔗糖-天冬酰氨培养基被用于假单胞菌产铁载体规律的研究。用天冬氨酸替代天冬酰氨,将CAS蓝色检测液与蔗糖-天冬氨酸培养基（MSA培养基）相结合,得到一种改进的MSA-CAS检测平板。通过对假单胞菌属7个种8个株进行荧光与非荧光铁载体检测方面的比较研究,结果表明MSA-CAS检测平板假单胞菌铁载体的检测灵敏度比通用CAS检测平板高,而且在检测荧光铁载体方面具有荧光背景低、荧光铁载体晕圈明显和晕圈与背景的对比度大的优点。     

铁对产铁载体的沼泽红假单胞菌光合色素与铁载体合成的影响

【目的】探求铁对1株能产生铁载体的不产氧光合细菌(Anoxygenic Phototrophic Bacteria,APB)光合色素和铁载体合成的影响。【方法】通用CAS法检测铁载体产生,Arnow、Csaky和Shenker法检测铁载体类型;吸收光谱法和HPLC法分析光合色素的组分和含量。【结果】Rhodopseudomonas palustris CQV97能够产生异羟肟酸型铁载体,未添加FeCl3时,铁载体含量最高,铁载体的产生与生长并非关联型。随FeCl3浓度升高,菌体生长潜伏期缩短,生长速率、最终生物量以及细菌叶绿素(Bacteriochlorophyll,BChl)a和类胡萝卜素(Carotenoid,Car)含量均提高,而检测到的游离铁载体含量降低;菌体积累的BChl a的组成和相对含量未见明显变化,但主要的Car组分由Spirilloxanthin转化为Rhodopin,菌体中积累Car组分的平均共轭体系降低,Car组成的改变与色素提取液的Car特征性光谱蓝移现象相吻合。【结论】首次报道APB能够产生铁载体,CQV97菌株能够产生异羟肟酸型铁载体。阐明了铁对CQV97生长、铁载体产生和光合色素合成的影响规律,这些研究结果为深入开展APB铁载体分离纯化以及生物功能研究奠定了基础。     

假单胞菌铁载体及色素研究

假单胞菌分布广泛,种类繁多,能够产生多种结构的铁载体及具有特定颜色的色素化合物,这使假单胞菌在生物病害防治、医学研究等领域应用潜力巨大.假单胞菌铁载体具有菌种和菌株特异性,可在一定程度上作为其分类依据.假单胞菌色素具有色调、结构、功能多样性,与其铁载体在功能上具有一定重叠性.假单胞菌铁载体及色素分离纯化方法相对比较简单,但它们的生物合成及转运代谢机制非常复杂.     

荧光假单胞菌的条件致病性

作者从血、尿标本中分离出12株荧光假单胞菌,在研究生物学性状的基础上探讨了本菌的条件致病性问题,结果显示,凡能使机体免疫力下降的各种原因均可导致本菌感染。治疗本菌感染,必须进行药敏试验,选择有效的抗生素。     

鳜源致病性荧光假单菌的分离与鉴定

为确定导致鳜（Siniperca chuatsi）细菌性感染死亡的病原,从患病濒死的鳜肝中分离出一株优势菌B01,经人工回感实验确定其分离菌的致病性,并利用VITEK-2全自动微生物鉴定仪及16S rRNA序列分析对纯培养细菌进行鉴定。此外,对分离的菌株进行药敏实验。研究结果表明,菌株B01对鳜鱼具有致病性。经VITEK-2全自动微生物鉴定仪鉴定菌株B01为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）（表1）,并在紫外灯可以产生荧光（图1）。进一步的16S rRNA基因序列和系统发育树分析表明,该菌与荧光假单胞菌同源性达到了97%以上,并和（图2）。药物敏感性实验结果显示,该分离株对恩诺沙星、诺氟沙星、链霉素和四环素药物等6种药物高度敏感（表2）。     

Exocellular phosphatidylethanolamine production and multiple-metal tolerance in Pseudomonas fluorescens

Abstract Pseudomonas fluorescens appeared to circumvent the challenge imposed by millimolar amounts of metals (5 mM Al³⁺, 5 mM Fe³⁺, 2 mM Ca²⁺, 1 mM Ga³⁺ and 3 mM Zn²⁺) by the formation of phosphatidylethanolamine. This lipid moiety constituted an important organic component of an insoluble gelatinous residue in which most of the test metals were immobilized at stationary phase of growth. Ultracentrifugation and dialysis experiments showed that the metals were associated with phosphatidylethanolamine from early stages of growth. Transmission electron microscopy revealed metal rich bodies in the cytoplasm prior to their secretion in the spent fluid. These results demonstrate a role of phosphatidylethanolamine in multiple-metal homeostasis.     

Isolation and Characterization of a Stilbene-degrading Strain of Pseudomonas fluorescens,and Production of Antioxidant Compounds by Stilbene Metabolism

In this study, we consider the use of hydrocarbon-degrading bacteria that degrade trans-stilbene as a novel approach for synthesizing potentially bioactive hydroxylated stilbenes. A trans-stilbene-degrading bacterium, MN2, was isolated from activated sludge through enrichment culture, and identified as Pseudomonas fluorescens using conventional techniques. Degradation of trans-stilbene by this strain yielded two metabolites that had significant antioxidant activity.     

Spectroscopic characterization and identification of Pseudomonas fluorescens mediated metabolic products of Acid Yellow-9

Pseudomonas flourescens NCIM 2100 was obtained from NCL, Pune, India, that was adapted to growth on 4 amino 1-1 azo benzene 3,4-Disulfonic acid. This strains was tested by UV, ¹H NMR, and IR spectroscopy for its ability to degrade the dye which resulted in to sulfonated analogs namely p-amino benzene sulfonic acid sodium salt and 2,4 diamino benzene sulfonic acid sodium salt. These compound further changed to either 2,4 dihydroxy benzene sulfonic acid sodium salt or 2 amino 4 hydroxy benzene sulfonic acid sodium salt, or 4 amino 2 hydroxy benzene sulfonic acid sodium salt. These breakdown compounds were non toxic in nature.     

Ethylbenzene degradation by Pseudomonas fluorescens strain CA-4

Abstract Pseudomonas fluorescens strain CA-4 is a bioreactor isolate capable of ethylbenzene degradation. Transposon mutagenesis and enzyme assays have been performed which allow us to propose the ethylbenzene degradative pathway in operation in this strain. Ethylbenzene is initially converted to 2-phenylethanol. This is degraded to phenylacetaldehyde and then to phenylacetic acid. The major inducer of the pathway is ethylbenzene itself. The pathway is regulated by the presence of non-aromatic carbon sources. Oxidation of ethylbenzene is repressed by glutamate, but not by citrate or glucose. A clone from a chromosomal library has been found to complement a mutant deficient in the ability to convert ethylbenzene to 2-phenylethanol.     

荧光假单胞菌生防机理的研究进展

荧光假单胞菌是植物根际促生细菌(Plant Growth Promoting Rhizobacteria,PGPR)具有分布广、数量多、营养需要简单、繁殖快、竞争定殖力强的特点。它们能通过产生多种次生代谢物及有效的根际定殖防治植物病害,成为植物生防控制的重要研究对象。主要论述了荧光假单胞菌对植物病害生物防治机理的研究进展。     

一株荧光假单胞杆菌的分离鉴定与反硝化特性

【目的】从污水厂的活性污泥中获得一株高效反硝化细菌。【方法】采用低温驯化,进行初筛、复筛选取一株反硝化活性最高的菌株,命名为L2,通过形态学、生理生化特征及16S r RNA基因序列分析研究其分类地位,系统研究理化因素对该菌株反硝化性能的影响。【结果】菌株在低温条件下能够稳定高效地进行反硝化,鉴定该菌株为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens),其反硝化最适接种量为10%,温度为20°C,p H为7.0,盐浓度为0.5%,碳源为葡萄糖,C/N为5.0,能够耐受较高初始硝态氮浓度。【结论】菌株L2是一株耐低温、耐高浓度初始硝态氮、耐低C/N、兼性厌氧、高效反硝化的荧光假单胞杆菌。     

Optimization of the hide powder azure assay for quantitating the protease of Pseudomonas fluorescens

The extracellular protease of Pseudomonas fluorescens NC 3 was optimally active at 40°C in a reaction mixture containing: 50 mM HEPES (N-2-hydroxyethylpiperazine-N′-2-ethanesulfonic acid) buffer (pH 6.6), 0.5 mM CaCl₂, and 25 mg hide powder azure in 5 ml total volume. Divalent cation chelators, i.e., EDTA, o-phenanthroline, citrate or phosphate, inhibited the enzyme. Protease production by P. fluorescens NC 3 was initiated during late-logarithmic-growth phase in a sodium caseinate medium and reached its maximum at the onset of the stationary phase.