新型淀粉纳米囊人工红细胞有效性初步研究

目的:采用季铵盐阳离子淀粉为囊材包裹牛血红蛋白,制备成纳米级的新型季铵盐阳离子淀粉人工红细胞(Nanosized Cationic Amylose-encapsulated Hemoglobins,NCAHbs)并评价此新型人工红细胞的有效性.方法:应用大鼠重度失血性休克模型,将50只健康SD大鼠随机分成5组:休克对照组(Control组,n=10)、淀粉纳米囊人工红细胞组(NCAHbs组,n=10)、Ringer乳酸盐溶液组(Ringer's组,n=10)、羟乙基淀粉组(HES组,n=10)和全血组(Blood组,n=10);动态监测平均动脉血压(MAP),于休克前(T0)、休克末(T1)及复苏后1 h(T2)测定动脉血气指标,并记录24h内大鼠的存活情况.结果:Ringer's组、HES组复苏后大鼠MAP仍较低,NCAHbs组复苏后MAP接近Blood组,并能有效维持;复苏后1h,Blood组和NCAHbs组PCO2、PO2均得到改善,接近休克前基础水平;仅NCAHbs组及Blood组术后24h生存率为100％.结论:新型淀粉纳米囊人工红细胞能够有效的扩容、携氧,明显改善重度失血性休克时机体和组织的氧供,是较为理想的人工氧载体.     

复乳法制备红细胞代用品

以单甲氧基聚乙二醇聚乳酸共聚物 [methoxypoly(ethyleneglycol) poly DL lactide,PELA]为膜材 ,用W /O/W的复乳 溶剂扩散法制备了包埋牛血红蛋白 (bovinehemoglobin ,BHb)的微胶囊作为人造红细胞。研究发现复乳过程搅拌分散速率、有机溶剂种类和固化方法对BHb活性有明显影响。当搅拌分散速率小于 90 0 0r/min、以乙酸乙酯为有机相时 ,采用复乳 溶剂扩散法包埋BHb的过程对BHb活性无明显影响。当搅拌分散速率高于 12 0 0 0r/min时 ,BHb活性降低。复乳 溶剂扩散法制备微胶囊过程中固化液体积与微胶囊中BHb活性密切相关 ,通过增大固化液和复乳液的体积比可较好地保持BHb的活性。最后制得了粒径 10 μm左右、包埋率 93%、P50 和Hill系数均接近于天然BHb的微胶囊。     

牛血红蛋白PLGA纳米粒的制备及其体外功能的研究

目的:利用poly(lactide-co-glycolide)(PLGA)和poly(styrene-co-4-styrene-sulfonate)(PSS)制备带负电荷的牛血红蛋白纳米粒,并对其载氧性能和体外性能进行评价.方法:采用溶剂蒸发法制备出空白的PLGA-PSS的空白纳米粒,通过改变pH值,吸附牛血红蛋白,从而制备出牛血红蛋白PLGA纳米粒.通过TEM、粒径、Zeta电位、包裹率和载药量、体外释放及其携氧能力对该纳米粒进行了综合分析.结果:Hb-PLGA-PSS-NPsTEM电镜下呈类球形,平均粒径为226.8±23.4nm,Zeta电位为-68.62 mV,优化条件后最大包裹率约为99.3%,载药量约为28.6%,在37℃,pH7.4的PBS溶液中释放缓慢.通过对Hb结构的分析表明此工艺未对蛋白的结构造成影响,体外携氧实验测量了P50(29mmHg)和Hill系数(2.036),结果说明该Hb纳米微囊具有良好携氧功能.结论:成功制备了一种Hb-PLGA-PSS-NPs纳米粒,稳定性好,具有很好的携氧能力.     

辛二酸二琥珀酰亚胺酯交联血红蛋白制备红细胞代用品

探索了用辛二酸二琥珀酰亚胺酯(DSS)作为分子内交联剂交联血红蛋白的亚基, 以制备新型红细胞代用品. 采用多角度激光散射检测器(MALLS)与高效液相色谱(HPLC)连接进行检测, 辅之以变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析反应产物组成. 实验在局部百级的洁净室内进行, 低温4℃下反应1 h, 交联产物中83.8%为重均分子量(Mw)66.8 kD的分子内交联血红蛋白, 16.2%是Mw为146.6和306.4 kD的低聚血红蛋白. 通过流动相中添加1 mol/L MgCl₂的凝胶过滤色谱验证, 交联后的血红蛋白在生理环境下不会解聚. 联用反相高效液相色谱与质谱(RP-HPLC-MS)初步确定, 交联为非定点反应, 主要在a-a亚基间进行. 交联反应增强了血红蛋白亚基的疏水性, 影响了血红蛋白的载氧活性, P₅₀和Hill系数由交联前的21.8和2.22 mmHg分别降至14.3和1.41 mmHg, 仍具有一定的载氧能力. 等电聚焦(IEF)电泳表明, 制备的DSS交联血红蛋白的等电点降至4.6 ~ 5.2之间, 接近于不透过血管壁的血清白蛋白. 产品经小鼠异常毒性试验证实具有一定的生物安全性, 大鼠的换血试验表明DSS交联血红蛋白并未引起血压升高, 也未见其他明显的副作用. 还对DSS交联血红蛋白与文献已有的双阿司匹林交联血红蛋白的产物特性进行了比较.     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞乙酰胆碱酯酶的研究

用化学方法测定了乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）活性,阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞远低于正常红细胞。为了进一步研究ＰＮＨ ＡｃｈＥ（一）的红细胞,采用Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＭＢ结合ＡｃｈＥ单抗亲和层析法分离出ＰＮＨＡｃｈＥ（一）的红细胞。同间接免疫荧光流式细胞术检测,ＰＮＨ细胞ＡｃｈＥ低于正常,而ＰＮＨ ＡｃｈＥ（一）红细胞未能检出ＡｃｈＥ。＾３Ｈ－肌醇标记实验证明,正常     

活体红细胞内血红蛋白的电泳释放

当今的蛋白质组学研究,都是先裂解细胞放出蛋白质,然后对蛋白质溶液进行各种分析.对于红细胞来说,它的裂解产物也称＂溶血液＂,其中主要成分有血红蛋白A1,A2,A3和碳酸酐酶（CA）等.本实验室用未裂解的完整的活体红细胞直接进行电泳,观察其释放出来的血红蛋白（hemoglobin,Hb）,建立了淀粉-琼脂糖混合凝胶中红细胞的电泳释放实验.电泳释放可分为＂初释放＂（一次通电完成电泳,此时有Hb释放出来）和＂再释放＂（电泳过程中断电-再通电,又有Hb释放出来）.本实验室在＂初释放＂实验中发现了＂HbA2现象＂,并通过Hb交叉电泳发现了HbA2与HbA1的相互作用;利用初释放型双向对角线电泳发现红细胞内HbA2与HbA1结合存在;对电泳释放出来的＂HbA2现象＂成分做SDS-PAGE及质谱分析,发现Prx-2（Peroxiredoxin-2）可能参与＂HbA2现象＂的形成;在研究＂再释放＂实验中发现了＂Hb多带再释放现象＂,在此基础上创建等渗再释放、低渗再释放、等低渗全程再释放及再释放型双向对角线电泳;两种红细胞（全血中的红细胞和由它分离出来的游离红细胞）再释放的比较研究;血浆成分对红细胞再释放的影响等.以上研究方法的建立为活体细胞内蛋白质存在状态的研究提供了基础,并开辟了新的研究途径和领域.     

人工血液前瞻性研究

本文以国内外前人对人工血液的研究为基础，通过概述人工血液研究的进展，和几代制品的发展情况，重点从人工血液的最新研究热点－脂质体微囊包埋技术和基因工程的前沿科研角度，围绕人造血红蛋白的稳定性，制备工艺，临床毒副作用进行了综述。     

复合四倍体异育银鲫的血红蛋白和红细胞的同工酶分析

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,分析了银鲫、复合四倍体异育银鲫和红鲁的血红蛋白及红细胞中的４种不同的同工酶。结果表明复合四倍体异育银鲫的一些座位,除了银鲫的基因表达外还观察到红鲤基因的表达,出现了银鲫原来所没有的区带或原有的区带受到抑制等现象,显示出复合四倍体异育银鲫具有类似于杂种的遗传性状,另一方面从４种不同的 同工酶表型分析,表明复合四倍体异育银鲫的同工酶基因表达较接近银鲫。     

木薯淀粉对人工胚乳性能及对人工种子发芽率的影响

研究了四种高聚化合物对人工胚乳性能及对人工种子发芽率的影响。结果表明,l％的木薯淀粉与1．5％的海藻酸钠制作的复台胚乳改善了单一海藻酸钠制作的人工种子胚乳的暖水性．从而提高了人工种子的发芽率     

绵羊红细胞分离猪的T细胞方法

参照人的T细胞分离方法用于猪T细胞分离,经二次绵羊红细胞分离的T细胞,用PHA从功能上鉴定获得纯度很高的T细胞,能进一步用于有关T细胞方面研究。     

聚乙二醇诱导鸡红细胞融合条件的优化

目的:探讨聚乙二醇诱导鸡红细胞融合最适条件.方法:以鸡红细胞为材料,聚乙二醇为诱导剂,从细胞密度、融合温度、聚乙二醇浓度及反应时间进行单因素实验,并设计3因素3水平的正交实验计算细胞融合率.结果:鸡红细胞融合的最佳条件是:细胞密度为2×106个/ml,聚乙二醇浓度为35%,反应温度为35℃,反应时间40min.结论:在该条件下,细胞融合率最高达33.06%.     

鸡红细胞融合最适条件的探讨

目的：探讨快速、有效的细胞融合条件.方法：用鸡红细胞为材料,聚乙二醇（Mw=4000）为诱导剂,诱导鸡红细胞融合.结果：鸡红细胞融合的最适温度为39℃,最适时间为15min.结论：在该条件下,同时用Giemsa染液对融合细胞染色,实验观察效果明显.     

鸡红细胞融合最适条件的探讨

目的:探讨快速、有效的细胞融合条件。方法:用鸡红细胞为材料,聚乙二醇(Mw=4000)为诱导剂,诱导鸡红细胞融合。结果:鸡红细胞融合的最适温度为39℃,最适时间为15min。结论:在该条件下,同时用Giemsa染液对融合细胞染色,实验观察效果明显。     

Selenocysteine Is Selectively Taken Up by Red Blood Cells

Both organic and inorganic forms of selenium are utilized in the biosynthesis of selenoproteins. Selenite is taken up by red blood cells and then returned to the plasma after reduction, but little is known about the metabolic fate of selenocysteine. We found that selenocysteine was taken up into red blood cells without decomposition into selenide.     

海藻糖载入红细胞及其冷冻干燥的实验研究

冷冻干燥保存是长期保存人体红细胞的理想方案之一。冻干保护剂海藻糖渗入细胞内后,对细胞膜和细胞内物质有保护作用,其中的一个作用是增加细胞质的浓度,使冻干过程容易形成稳定的玻璃态。应用高渗法处理红细胞,通过考察胞内海藻糖含量、红细胞冻干后的存活率、腺苷三磷酸酶(ATPase)、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及细胞形态变化,研究胞内海藻糖含量对红细胞冻干后活性的影响。结果显示:海藻糖对红细胞冻干具有明显的保护作用,随胞内海藻糖浓度升高,其保护性能逐渐增强;43.8mmol/L的胞内海藻糖浓度对红细胞保护最好,细胞存活率达到53.6%,形态保持良好,ATP和SOD活力均在正常的范围内。     

糖尿病病人的红细胞能量代谢

糖尿病病人内环境的改变影响了其体内红细胞的葡萄糖摄取率、胞内糖酵解酶活性、能量代谢中间产物含量以及ATP的储存与利用。这些因素共同作用于红细胞能量代谢的整个过程,使病人红细胞能量代谢发生改变,从而影响红细胞自身的结构、性质以及功能,引起机体组织微循环紊乱、供氧不足等,促进糖尿病并发症的产生。本文对糖尿病病人红细胞能量代谢的相关研究及分子机制进行总结,这些有助于了解糖尿病病人红细胞能量代谢发生的改变,并为糖尿病病人微血管病变的预防、诊断及治疗提供新的思路。     

蟾蜍红细胞融合条件的正交设计优化

目的：用聚乙二醇法探讨蟾蜍红细胞融合的最佳条件。方法：采用3因素3水平的正交实验法,以蟾蜍红细胞为材料,从聚乙二醇浓度、反应时间、反应温度三方面计算细胞融合率,探讨和比较蟾蜍红细胞融合的最适条件及影响因素。结果：蟾蜍红细胞融合的最佳条件是：选用50%的聚乙二醇,反应温度为37℃,反应时间为15min。     

透析式洗涤冰冻红细胞去除白细胞和血小板的方法

目的：用低速离心的方法减少悬浮红细胞中自细胞和血小板的数量,使透析式洗涤机洗涤的冰冻红细胞中白细胞和血小板的残留量小于1％。方法：分别选用低速离心（700和500r／min）和常规离心（3800r／min）全血制备悬浮红细胞,计算白细胞和血小板的清除率;甘油低温冰冻保存,透析式冰冻红细胞洗涤机洗涤冰冻红细胞,对洗涤后的红细胞进行质量检测。结果：500r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为53.82±6.83和85.23±4.21;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.843±0.058和0.903±0.035。700r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为23.38±2.36和62.61±3.82;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.983±0.024和1.021±0.045。3800r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为9.82±4.12和6.39±3.26;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为3.839±2.896和3.528±2.689。结论：用500r／min离心全血制备的悬浮红细胞,经甘油低温冻存,透析式洗涤机洗涤后,血小板和白细胞的残留量等各项指标均符合国家标准。