634例疑似需氧菌阴道炎患者阴道分泌物检测分析

目的 探讨预成酶分析技术诊断需氧菌阴道炎的临床价值.方法 分别采用预成酶分析法和Donders湿片镜检法对634例疑似AV患者阴道分泌物进行筛查.结果 预成酶分析法检出阳性患者569例,Donders湿片镜检法检出阳性患者571例,两种方法的符合率为97.48％,二者呈高度一致性(Kappa=0.834,P＞0.05).结论 预成酶分析法对需氧菌阴道炎的诊断具有很高的灵敏度和特异度,且该方法操作方便、反应快速,适宜基层医疗机构、社区医院推广使用.     

抗MRSA-PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立

制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a( MRSA- PBP2a)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立检测MRSA的乳胶凝集方法.采用体外诱导的方法制备PBP2a蛋白,胸部肌肉多点注射方式免疫6只海蓝蛋鸡,水稀释法提取IgY,BCA法测定蛋白含量,Western blotting进行特异性分析,用提取的IgY抗体致敏聚苯乙烯乳胶,建立检测PBP2a的乳胶凝集方法.成功诱导并制备获得纯化的PBP2a蛋白,首次免疫后1月每枚鸡蛋提纯后可获得约48 mg IgY抗体,Western blotting结果显示IgY抗体能有效识别纯化的PBP2a蛋白;成功建立检测PBP2a的乳胶凝集法,敏感性达1 mg/L.抗MRSA- PBP2a鸡卵黄抗体具有较高的敏感性和特异性,基于其建立的乳胶凝集检测方法具有较好的灵敏性.     

鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价

目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。     

联合法对5种常见下生殖道感染的鉴别诊断

目的摘要：目的对比分析白带常规镜检法、细菌预成酶谱分析法及联合法对5种常见下生殖道感染鉴别诊断的有效率。方法分别采用白带常规镜检法、细菌预成酶谱分析法对来我院就诊的3420例患者的阴道分泌物进行检测。结果采用白带常规镜检检出阴道感染患者1636例,其中BV患者543例、VVC患者820例、TV患者225例、CV患者48例;采用细菌预成酶谱分析法检出阴道感染患者1078例,其中AV患者461例、BV患者617例;采用联合法检出阴道感染患者2171例,其中AV患者461例、BV患者617例、CV患者48例、TV患者225例、VVC患者820例。结论联合法集白带常规镜检法和细菌预成酶谱分析法的优点与一体,能够鉴别诊断5种常见下生殖道感染。     

PBP2a多克隆抗体制备及其乳胶凝集检测法的建立

目的制备兔抗青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)抗体,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。方法以重组PBP2a转肽酶区蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测所制备的抗血清效价和特异性,用纯化的多抗建立乳胶凝集法。结果纯化的重组蛋白免疫家兔能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达1∶25 600,Western blot显示该抗体能有效识别原核表达及MRSA临床分离株中的PBP2a,建立了乳胶凝集法,敏感性及特异性良好。结论成功制备了抗PBP2a抗体血清,初步建立了检测PBP2a的乳胶凝集法,为有效制备高特异的单克隆抗体进而研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。     

荧光酶标免疫分析在食品微生物检测中的应用

荧光酶标免疫分析是一种新型的快速检测微生物的方法,具有方便、快速、灵敏、准确等优点,已越来越多地被用于进出口食品中致病菌的检测。本文介绍了荧光酶标免疫分析法的原理、特点以及在食品微生物检测中的应用和未来发展方向。     

抗金黄色葡萄球菌IgY的酶解稳定性及活性研究

目的:考察抗金黄色葡萄球菌特异性IgY的酶解稳定性和酶解产物的活性。方法:以灭活的金黄色葡萄球菌免疫产蛋母鸡,抗体经水稀释及盐析分离纯化。抗体在不同条件下经胃蛋白酶或胰蛋白酶消化。抗体及酶解产物的特异性和活性分别用ELISA法和凝集法检测,酶解产物用SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。结果:免疫产生的抗体具有特异性,能与金黄色葡萄球菌凝集而抑制其生长。分离纯化后抗体纯度与标准IgY相近。IgY在pH<4时完全酶解;pH等于4时部分酶解生成Fab片断,具有特异性和凝集活性;pH>4时,抗体稳定,不发生酶解。结论:抗金黄色葡萄球菌特异性IgY及其酶解生成的Fab片断,具有特异性和抑菌活性,有望代替抗生素用于细菌感染性疾病的治疗。     

磁性微粒的制备方法和研究进展

磁性微粒作为一种新型的功能高分子材料,在生物学,细胞学,生物医学工程等领域得到广泛的应用。文中对磁性微粒的性质,制备以及在固定化酶,靶向药物,细胞分离及免疫分析中的应用,尤其是在免疫分析中的应用进行了介绍。     

应用协同凝集法鉴定沙门氏菌O抗原

<正>鉴定肠炎沙门氏菌菌体O抗原的玻片凝集法需要约40种吸收过的抗血清。这些抗血清的制备是困难而又麻烦的。将抗体与葡萄球菌A蛋白结合的协同凝集程序可以改进这种鉴定方法并增强抗血清活性。Edwards等报导了用协同凝集作沙门氏菌群的快速鉴定法,但试验中仅有少数异种菌株,所以并不能充分证明这些试验剂的特导性。需要进一步证明协同凝集法具有与玻片凝集有同样的特导性和敏感性。     

改良的放射免疫分析和协同凝集反应在流行性脑脊髓膜炎诊断中的应用

<正>对流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)双球菌夹膜多糖的检测,各种不同的免疫学方法其敏感性不同。免疫电泳检出的抗原量为0.7μg/ml;放射免疫分析法为2ng/ml。 作者采用了放射免疫定量分析法(NPMA)和协同凝集反应(PKA)两种方法同时对来自儿童患者的脑脊液标本进行平行试验。     

医学诊断中的酶免反应分析(续一)

<正> 以下标本酶免疫的结果,可以不同方式表示之。 (a).在严格的对照条件下,这是最容易而有效的方法,结果可用吸收值来表达。抗体的分析是以未感染的正常人群吸收值的范围为准来判定的。血清的吸收值若超过上述对照值则为阳性,低于此水平的为阴性。阳性值和阴性值之间有轻微交叉。例如关于巴西人锥虫病吸收值的分布(垂直柱)图4(略)。实际上病人值都在0.4以上。 (b).图5(略)的标准曲线,系用第ⅤⅢ因子(凝血因子)作为已知参考制品的双抗体试验酶免疫分析检出的抗原。远离座标的曲线为未知标本的曲线。 (c).所有滴定的血清均采用了连续稀释法,然后依血清稀释度产生的吸收值确定效价。 酶免疫分析的实例: 3种微量酶免疫分析法的细节见表1。现补充意见如下。我们发现这些方法对所有系统皆有效,括于表2。 使用化学药物和所有浴液见附件。     

凡纳滨对虾血蓝蛋白酶解多肽的凝集与抑菌活性

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象, 通过分子筛层析、Tricine-SDS-PAGE、Western-blotting、凝集实验、抑菌实验和Edman N端测序等方法探索血蓝蛋白酶解多肽的凝集和抑菌活性。结果发现, 血蓝蛋白经胰蛋白酶酶解后可产生分子量约为6—70 kD的7条多肽, 该酶解混合物对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)具有显著的凝集活性, 与未酶解的血蓝蛋白相比, 其凝集活性可提高4—16倍。在此基础之上, 进一步分离纯化该7条多肽, 发现多肽-3对副溶血弧菌表现出较强的抑菌活性, 且具有较好的浓度依赖性。在浓度为75 μg/mL时, 其抑菌率为(93.76±1.60)%, 与阴性对照组相比, 存在极显著性差异 (P<0.01)。进一步研究显示该多肽位于血蓝蛋白N端α-螺旋区域。由此推测, 凡纳滨对虾血蓝蛋白在体外经胰蛋白酶酶解后可产生具有凝集、抑菌等免疫活性的多肽, 这对研究血蓝蛋白的降解机制及其在先天免疫中的作用具有重要意义。     

CD138免疫磁珠细胞分选的FISH技术在多发性骨髓瘤诊断中的应用

为了分析CD138免疫磁珠细胞分选的染色体荧光原位杂交(FISH)技术在提高多发性骨髓瘤(MM)细胞遗传学异常检测敏感性的作用。本研究选取我院收治的30例确诊MM的患者为研究对象,分离骨髓单个核细胞,应用探针组合,同时采用2种方法进行细胞遗传学检测:实验组采用CD138免疫磁珠分选浆细胞后行荧光原位杂交技术(MACS-FISH)检测;对照组直接荧光原位杂交技术(D-FISH)检测。结果:30例MM患者,实验组采用CD138 MACS-FISH检出率为83.3%,对照组D-FISH法细胞遗传异常检出率为46.7%,两组差异具有统计学意义(p<0.05)。研究结果表明:分析不同类型的细胞遗传异常,MACS-FISH法1q21检出率为46.7%,RB1检出率为50.0%,Ig H检出率为70.0%,P53检出率为20.0%;D-FISH法检出率分别为23.3%,30.0%、36.7%、10.0%。通过细胞核型分析,30例MM患者中,发现5例患者为异常核型,仅为16.7%,其中1例患者为单一结构异常,复杂异常核型患者为4例。我们的研究结论表明:进行CD138免疫磁珠分选浆细胞的FISH技术在多发性骨髓瘤诊断应用中可显著提高细胞遗传学异常检测敏感性,具有临床推广应用的价值。     

从霍乱样腹泻患者分离出一株霍乱弧菌不凝集变异株及其鉴定

本文报道从一霍乱样腹泻患者粪便中分离出一株不凝集弧菌。该分离菌株的形态及生化反应等均与霍乱弧菌流行株相似,但与霍乱弧菌“Ｏ”多价血清不凝集。采用限制性核酸内切酶谱分析发现其染色质ＤＮＡ酶切图谱与霍乱弧菌流行株很相似,呈高度同源,认为该不凝集株可能是由霍乱弧菌变异形成,这在震乱流行病学上具有重要的意义。     

联合标记物检测在重症感染中合并急性肾损伤的诊断价值

目的:探讨尿中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、尿肾损伤分子-1(kidneyinjury molecule-1,Kim-1)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acecyl-β-D-glucosaminidase,NAG)、尿微量白蛋白(mALB)在重症感染中合并急性肾损伤的敏感性及临床价值。方法:回顾分析60例在新疆自治区人民医院ICU住院的重症感染合并急性肾损伤(AKI)患者的尿NGAL、Kim-1、NAG及mALB的变化情况。健康体检者20例为对照组。尿NGAL、Kim-1、mALB测定采用酶联免疫法(ELISA)检测,尿NAG测定采用对硝基苯酚(PNP)比色法检测,并以ROC曲线分析其敏感性。结果:AKI组患者尿液中的NGAL、Kim-1、NAG、mALB的测定浓度明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.001),通过ROC曲线、诊断试验结果显示:尿NGAL、Kim-1曲线下面积分别为0.986、0.956,95%可信区间分别是0.968～1.004、0.910～1.001,较尿NAG、mALB更具有敏感性(P<0.001)。结论:尿NGAL、尿Kim-1的浓度检测对重症感染合并急性肾损伤的诊断更具有敏感性,与NAG、mALB联合检测有助于急性肾损伤的早期监测,对预防急性肾损伤的发生、发展具有重要的临床价值。     

HIV感染早期病毒p24蛋白的检测

目的:建立敏感、特异的检测血清中HIV-p24蛋白的方法,作为HIV感染早期即窗口期的监测手段。方法:用纯化的p24蛋白免疫小鼠及家兔,获得单克隆及多克隆抗体,经DEAE-52阴离子交换柱纯化后,标记辣根过氧化物酶,建立ELISA双抗体夹心及间接双抗体夹心方法,检测HIV-p24蛋白。结果:包被单抗、标记多抗或包被多抗、标记单抗,均能特异地检出系列稀释的p24蛋白,包被混合单抗较包被多抗更敏感;经标记的抗种属抗体放大可明显提高检测的敏感性。结论:建立了敏感、特异的检测p24蛋白的双抗体夹心法,间接放大方法可检出50pg/mL的HIV-p24蛋白,检测敏感性与国际同类产品相似。     

大肠杆菌变种的两种分子生物学检测方法分析

目的:对大肠杆菌的一种重要的变种--肠出血性大肠杆菌O157-H7的几种检测方法进行比较研究.方法:以自动免疫磁珠收集系统(AIMS)、自动酶标免疫测试系统(VIDAS)与传统常规的分离方法进行对比分析.结果:运用自动免疫磁珠收集系统(AIMS)方法对80份可能含有肠出血性大肠杆菌O157-H7的实样进行检测,检出份数为6份,检出率为7.5％,而且在一周之内可以全部对上述检出实样进行鉴定.AIMS法能够检出浓度在10cfu/mL模拟实样之中的肠出血性大肠杆菌O157-H7,然后将此法与CHROMagar 0157琼脂板相结合,其效果则更为明显.而自动酶标免疫测试系统(VIDAS)与传统与的分离方法则检测的效果不佳,检出率为0.自动免疫磁珠收集系统(AIMS)检测方法与自动酶标免疫测试系统(VIDAS)、传统与的分离方法在检出率方面存在显著的统计学差异,P＜0.01.结论:运用自动免疫磁珠收集系统(AIMS)结合CHROMagar 0157琼脂板对出血性大肠杆菌O157-H7进行检测,检出率较高、灵敏度较高且快速便捷,可以用于O157-H7外环境检测与食品污染源的实际调查之中,应该对其加以广泛地推广并应用.     

β\|葡萄糖醛酸苷酶+凝固酶检测技术诊断需氧菌阴道炎的临床价值

目的讨论β-葡萄糖醛酸苷酶＋凝固酶检测技术诊断需氧菌阴道炎（AV）的临床价值。方法分别采用镜检法和β-葡萄糖醛酸苷酶＋凝固酶检测技术对250例疑似AV患者进行检测。结果在250例疑似AV患者中,镜检法检出阳性患者235例,β-葡萄糖醛酸苷酶＋凝固酶检测法检出阳性患者228例。以镜检法为诊断标准,β-葡萄糖醛酸苷酶＋凝固酶检测技术的敏感性为91．2％。结论β-葡萄糖醛酸苷酶＋凝固酶检测技术诊断AV具有很高的敏感度和特异度,与目前临床使用的常规镜检法符合率高,且该方法操作简便、快速,值得临床推广使用。     

检测人巨细胞病毒的免疫PCR技术的建立

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一种广泛传播的病毒,初次感染后,病毒潜伏存在于体内,但可被激活出现复发感染。诊断HCMV近期活动性感染,主要依靠实验室检测。传统的病毒分离、血清中抗CMV-IgM及CMV抗原等的检测,敏感性差,易漏诊;核酸杂交、PCR等方法虽然敏感性高,但既可检出复制的病毒DNA,也可检出潜伏、整合     

免疫酶技术鉴定 El Tor 型霍乱弧菌稳定 L 型

细菌稳定 L 型的形态、培养特性以及生化反应常与原菌不同,其菌落在盐水中不能乳化,故不能通过玻片凝集测定其抗原。对于这种一时不能回复为原菌的 L 型很难进行鉴定。本文采用免疫酶技术对由鳝鱼和鲫鱼胆汁诱导的 El Tor 型霍乱弧菌稳定 L 型进行了鉴定。实验证明 L 型的细胞壁可有不同程度的缺失,稳定 L 型仍可能有少量“O”抗原存在。PAP 法比较敏感,即使少量抗原亦可以检出。