卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法的建立

[目的]建立基于SYBR GreenⅠ染料法的卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法。[方法]选取卡他莫拉菌两个的基因(uspA1和copB)设计特异性引物;提取卡他莫拉菌、嗜肺军团菌等11种呼吸道病原体的DNA,通过常规PCR和实时荧光PCR对引物的特异性进行验证;以卡他莫拉菌DNA为模板进行实时荧光PCR,获取扩增曲线、标准曲线、熔解曲线和熔解峰图,并判断检测方法的灵敏度;进行重复性试验,评估检测方法的组内和组间重复性;通过模拟临床样本,对检测方法的灵敏度进行验证。[结果]共设计出3对引物,对嗜肺军团菌等10种呼吸道病原体具有特异性;对卡他莫拉菌的最低检出浓度为1.0×10^(3)cfu/mL;组内和组间最大变异系数分别为1.78%、1.89%;模拟的临床试验结果与预期相符。[结论]成功建立了卡他莫拉菌的实时荧光PCR检测方法,与10种常见的呼吸道病原体无交叉反应,且重复性变异系数小于2%,模拟临床试验灵敏度结果达到1.0×10^(3)cfu/mL。     

卡他莫拉菌的研究进展

卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis)首次发现于1896年, 当时称之为卡他微球菌(Micrococcus catarrhalis),尔后又称为卡他奈瑟菌(Neisseria catarrhalis)和卡他布兰汉菌(Branhamella catarhalis).过去一直认为卡他莫拉菌是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌,但是,近20多年的研究发现,该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染,而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌,是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌,仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌.笔者对近几年来卡他莫拉菌的生物学特性研究进展作一综述.     

呼吸道感染临床实验室检查标本的评价

急性呼吸道感染(RTIs)是临床常见多发病,其病原体对抗生素耐药率的增加对诊断微生物学构成了严峻的挑战。临床微生物室对感染病原体的检出率较低,一般只有50%,且不同部位感染所采集的标本,其结果差异很大。本研究将评述呼吸道感染实验室检查标本采集的影响因素和常见病原体肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、卡他莫拉菌、肺炎衣原体、嗜肺性军团病杆菌、呼吸道病毒、尿抗原试验的临床意义。     

人呼吸道卡他莫拉菌快速检测胶体金试纸的研制

旨在研制一种快速、简便检测呼吸道感染病人呼吸道中卡他莫拉菌的试纸,并建立其检测方法。经生物信息学分析找到UspA1胞外结构域单一线性表位UspA1Line,偶联血蓝蛋白KLH形成复合蛋白UspA1Line-KLH,并利用已构建的表达UspA1抗原的工程菌,表达纯化重组蛋白UspA1-His,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,取血清后利用Protein A亲和层析和多肽亲和层析两步纯化抗体,得到纯度高,特异性强的多克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备40 nm胶体金颗粒,与多克隆抗体结合,形成双抗体夹心,达到快速检测卡他莫拉菌的目的。结果显示,建立的检测方法可在10 min内完成对样本的检测,特异性检出样本中卡他莫拉菌,与其他常见的呼吸道病原菌无交叉反应,试纸条在24℃保存具有良好的重复性和稳定性。成功研制了可快速检测卡他莫拉菌的胶体金试纸条。     

呼吸道合胞病毒下呼吸道感染与患儿鼻咽部定植菌群的关系

目的 研究鼻咽部定植菌群与呼吸道合胞病毒（RSV）下呼吸道感染患儿病情特点的关系,从微生态角度寻找预防或治疗RSV下呼吸道感染的理论依据。方法 回顾性分析我院2020年8月1日到2021年10月31日收治的RSV下呼吸道感染患儿,根据鼻咽部分泌物培养结果分为阴性组、阳性组,对比两组患儿临床特点及潮气肺功能检测结果。结果 1 090例RSV下呼吸道感染患儿中培养阳性者290例（26.58%）,中位数年龄为8个月（3.24个月,14个月）。各年龄层患儿鼻咽部菌群定植率及定植菌群差异有统计学意义（均P>0.05）。各年龄层患儿鼻咽部定植菌均以肺炎链球菌为主。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及卡他莫拉菌定植的患儿发热率较低。与喘息相关定植菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及金黄色葡萄球菌。与重症相关的定植菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌。与大叶性肺炎发生相关的只有肺炎链球菌。肺炎链球菌及流感嗜血杆菌定植的达峰容积比（Z=-4.12, P<0.001; Z=-1.99,P=0.046）与达峰时间比（Z=-4.24,P<0.001;Z=-1.98,P=0.047）均低...     

疫苗

863291牛莫拉氏菌(Mara二ella bovfs)〔专,英」/Gerber,J.D.了European Pate-。t Appl.EP 0146523.Pub.26.06.s5.Ap-pl.US 560780,filed 12.12.83〔译自CBA,1985,(9),3049〕 用牛莫拉氏菌生产的蛋白酶,可用作抗牛莫拉氏菌感染的免疫预防剂。(邓永鸿)863292疫苗及其制备过程〔专,德〕/Frei-herr von Malsen一Poniekau,E.了Europ-ean Patent Appl.EP 0146144.Pub.26.06.85.Appl.DE 3345864,filed 19.12.83〔译自CBA,1985,(9),3052〕 仅翻译出题目。(邓永鸿)863293新的人干扰素多肤衍生物巨专,英〕/Itoh,S。…了European Patent…     

铜绿假单胞菌群体感应系统介导的呼吸道病原菌种间互作研究进展

细菌性慢性呼吸道感染是严重威胁人类健康和制约社会经济发展的常见疾病。呼吸道环境和结构的复杂性导致慢性感染病灶常常定植着多种病原菌,如铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、大肠埃希氏菌Escherichia coli、肺炎克雷伯氏菌Klebsiella pneumoniae、鲍曼不动杆菌Acinetobacter baumannii和白色念珠菌Candida albicans等。这些病原菌在慢性呼吸道感染的发展过程中进化出了合作、竞争、共生等复杂的种间关系,通过形成相对稳定的群落系统使多种病原菌成为一个整体来应对呼吸道各种苛刻的生存条件,从而导致呼吸道感染针对性治疗的失败或病情反复。目前国际上关于病原菌种间互作关系的研究正处于起步阶段,临床证据表明铜绿假单胞菌的定植与慢性呼吸道感染的发生、发展息息相关,并且该菌可以利用群体感应系统来主导与其他病原菌的互作与共存。因此,本文围绕群体感应系统综述了铜绿假单胞菌与其他常见呼吸道感染病原菌的种间关系和互作机理,可加深人们对病原菌种间互作与慢性呼吸道感染相关疾病关联性的认识,并为进一步临床治疗方案的改进、疾病控制和新型抗感染药物的研发提供新视角、新方向。     

环介导恒温扩增技术在呼吸道感染常见细菌临床检测中的应用评价

【背景】传统的细菌培养为下呼吸道感染诊断的金标准,但其检验周期长且敏感性低。环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术方法简单、检测快速,可应用于临床呼吸道感染常见细菌的快速检测。【目的】评估环介导恒温扩增技术对呼吸道感染常见7种细菌的检测能力。【方法】设计呼吸道感染常见的7种病原菌肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,HI)的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测7种病原菌的LAMP方法。通过梯度稀释的方法检测敏感性,交叉反应实验检测特异性。回顾性分析2019年11月–2021年3月北京大学人民医院的2...     

儿童呼吸道菌群的调查

目的了解儿童呼吸道菌群的分布特征。方法对重庆医科大学附属儿童医院的呼吸内科住院部500例小儿下呼吸道负压吸引法痰标本做分离培养;105例门诊未使用抗生素有咽部体征的上呼吸道患儿咽拭子标本做分离培养;同时对150例健康儿童上呼吸道咽拭子标本做分离培养,对他们的生长菌群进行分类鉴定和药敏试验,并对结果作对比分析讨论。结果草绿色链球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、流感嗜血杆菌检出率差异无显著性（P〉0.05）;而儿童下呼吸道痰标本结果和105例门诊上呼吸道患儿咽拭子标本结果比较大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、肺炎链球菌、副流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、真菌差异无显著性（P〉0.05）,与150例健康儿童上呼吸道咽拭子标本结果比较差异有显著性（P〈0.05）。革兰阴性杆菌对亚胺硫霉素（IMP）耐药率最低,对哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、阿米卡星（AK）、环丙沙星（CIP）耐药率〈30%;革兰阳性球菌未发现耐万古霉素（VA）菌株,对利福平（RD）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）耐药率相对较低;流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌对CIP、IMP耐药率〈10%;肺炎链球菌无VA耐药菌株,对氧氟沙星（OFX）、RD耐药率〈10%;草绿色链球菌也无耐VA菌株;对RD、复方磺胺（SXT）、四环素（TE）耐药率〈30%。结论儿童正常菌群的分布特征以草绿色链球菌为主。从病原菌来看,下呼吸道住院患儿痰标本分离的致病菌大于门诊上呼吸道感染患儿咽拭子分离的致病菌大于健康儿童咽拭子标本携带的致病菌。     

反复呼吸道感染患儿的微生态研究

反复呼吸道感染（ＲＲＩ）在幼儿中较为常见。本文对４０例ＲＲＩ患儿口咽部菌群进行了定性、定量、定位检测。结果表明,需氧菌细菌群密度为２．１６３５±０．５０４７。３２例分离出两种以上需氧菌、以奈瑟氏菌和肺炎链球菌为多见,共检出９种需氧菌,７０株,６种厌氧菌,３９株。药敏试验表明,几种致病菌对青霉素等抗生素较敏感,而对红霉素、庆大霉素敏感率较低。     

香辛植物精油对常见呼吸道致病菌气相抗菌作用的研究

采用气相熏蒸法研究了13种香辛植物精油对6种常见呼吸道致病菌的气相抗菌作用。实验结果表明,金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌3种革兰氏阳性呼吸道致病菌对13种植物精油均敏感,特别是芳樟油、薄荷油(亚洲)、山苍籽油抗菌活性很高,MIC和MBC仅为250μL/L;与革兰氏阳性呼吸道致病菌比较,大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌3种革兰氏阴性呼吸道致病菌明显对13种植物精油不太敏感,特别是铜绿假单胞菌需要较高的浓度才能被抑制或杀灭,迷迭香油对3种革兰氏阴性呼吸道致病菌抗菌活性较高,MIC和MBC为1000μL/L。可见,香辛植物精油通过气相熏蒸对常见的革兰氏阳性呼吸道致病菌表现出较好的抗菌活性。     

小儿下呼吸道感染的常见病原体及发病机制

引起小儿下呼吸道感染的常见病原体有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌,卡他莫拉菌和肺炎支原体等。了解各种病原体的病原学特点及发病机制,并及时、正确的治疗,对临床防治下呼吸道感染具有重要意义。     

儿科住院患儿下呼吸道感染的病原菌分布及耐药性分析

目的:分析我院儿科患儿医院下呼吸道感染的病原菌分布情况和耐药性情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:本文以我院儿科近年来(2015年8月至2016年8月期间)临床收治的下呼吸道感染患儿566例为研究对象,针对患儿的病原菌分布情况和耐药性情况进行了调查研究。结果:本次研究的566例患儿共检出病原菌126株,病原菌检出率为22.26%。其中肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌,构成比分别为23.80%、17.56%、10.32%和7.14%;肺炎克雷伯菌对氨苄西林、头抱曲松、复方新诺明、氨曲南的耐药率分别为76.67%、73.33%、36.67%和26.67%;大肠埃希氏菌对氨苄西林、复方新诺明、头抱曲松、哌拉西林、头孢吡肟、头孢他啶的耐药率分别为72.73%、72.73%、68.18%、45.46%、27.27%、22.72%;金黄色葡萄球菌对氨苄西林、红霉素、阿奇霉素、克林霉素、复方新诺明、庆大霉素的耐药率分别为100.00%、84.6%、84.6%、69.23%、53.85%和38.46%。结论:儿科医院呼吸道感染的病原菌以肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌为主,且多重耐药菌感染增多,临床抗菌药选择的应根据药敏试验结果进行针对性的选择用药以提高临床治疗的有效性及合理性,减少耐药菌株产生。     

冬季肺炎和哮喘急性加重患儿呼吸道微生物多样性

目的研究冬季肺炎和哮喘患儿呼吸道微生物的多样性。方法选择2017年11月至2018年1月在我院急诊科治疗的确诊为肺炎和哮喘急性加重的患儿159例,其中肺炎患儿102例,哮喘急性加重患儿57例。选择同时期在本院就诊的无呼吸道疾病患儿88例,设为对照组。检测患儿呼吸道微生物分布情况。结果肺炎和哮喘患儿呼吸道微生物多样性增加。肺炎患儿菌群丰度前3位的菌属分别是链球菌属、不动杆菌属、克雷伯菌属。哮喘患儿菌群丰度前3位的分别是嗜血杆菌属、莫拉氏菌属、葡萄球菌属。呼吸道病毒检测结果显示,肺炎患儿检出率前3位的病毒分别是肺炎支原体、呼吸道合胞病毒和副流感病毒3型。哮喘患儿病毒检出率前3位的是柯萨奇病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原体。肺炎患儿肺炎支原体检出率明显高于哮喘患儿,柯萨奇病毒检出率明显低于哮喘患儿。结论冬季肺炎和哮喘患儿的临床表现和体征较为相似,但是病原微生物检出情况有所不同。病原微生物检出的差异性有助于正确诊断和鉴别儿童肺炎和哮喘。     

呼吸道与非呼吸道标本主要非发酵菌分离株的耐药性比较

目的对2 229份住院患者标本进行分离培养,并对非发酵菌分离株进行药敏试验,了解呼吸道与非呼吸道主要分离株的耐药率差异,以便指导临床合理使用抗菌药物。方法收集2008年8月至2010年10月分离自患者呼吸道、非呼吸道标本的革兰阴性非发酵菌,采用VITEK-32全自动微生物鉴定药敏仪进行细菌鉴定,药敏测定采用K-B法,并比较呼吸道与非呼吸道标本所检出的主要革兰阴性非发酵菌对抗菌药物的耐药率差异。结果共检出非发酵菌556株,其中呼吸道标本366株,非呼吸道标本190株,前3位非发酵菌分离株分别为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。非发酵菌菌株ESBLs、AmpC、MBL、同产ESBLs+AmpC和同产ESBLs+MBL检出率分别为17.62%、13.67%、14.39、12.23%和6.12%,其中呼吸道标本分离株铜绿假单胞菌的ESBLs、AmpC检出率明显高于非呼吸道标本(均P<0.05),鲍曼不动杆菌的ESBLs、AmpC检出率明显低于非呼吸道标本(均P<0.05);呼吸道、非呼吸道标本的铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌分离株对多种抗生素的耐药率不同,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论呼吸道与非呼吸道标本分离的主要非发酵菌分离株对同一抗菌药物耐药率不同,治疗不同部位非发酵菌引起的感染,要考虑由于感染部位不同而产生的耐药性以及药物有效浓度的差异,根据药敏结果合理使用抗菌药物。     

冬季急性下呼吸道感染住院儿童病原学分析及临床流行病学特点

目的了解冬季儿童急性下呼吸道感染病原谱及临床流行病学特征,为临床抗感染及病原检测提供依据。方法对我院2006年12月～2007年2月急性下呼吸道感染住院患儿采用一次性无菌吸痰管经鼻腔插入7～8cm,达到咽部以下负压吸取1～2ml深部鼻咽分泌液送细菌培养,并对呼吸道合胞病毒(RSV),腺病毒(ADV),A、B型流感病毒(IFV),1、2及3型副流感病毒(PIV)等7种常见呼吸道病毒抗原进行检测及运用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测标本中支原体和衣原体DNA。结果①381份下呼吸道感染儿童痰标本中细菌培养阳性81份,病毒检测阳性133份,支原体和衣原体阳性分别12份与6份,混合感染标本44份,总标本病原学检出率为50.66%(193/381)。②RSV阳性标本112份,为最重要的感染病原,连续3个月RSV检出率均在30%左右,6月龄以下儿童占61.61%,2岁以下儿童占86.61%,阳性标本中78.57%的患儿有喘息表现。③大肠埃希菌(16株)、肺炎链球菌(14株)、肺炎克雷伯菌及金黄色葡萄球菌(各10株)、卡他莫拉菌布兰汉亚种(8株)、流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌(各6株)表现为主要的致病菌。结论RSV感然仍为儿童冬季急性下呼吸道感染最主要的病原,尤其在2岁以下儿童,且易表现为喘息发作。仍有40%以上感染病原未明,儿童急性下呼吸道感染病原谱需进一步完善。     

反复呼吸道感染患者的微生态学分析

冬季是呼吸道反复感染的多发季节。我们对反复发生呼吸道感染病人口咽粘膜菌群的定植进行了分析。结果表明,正常组需氧菌群密度为４．１１３５±０．０８８４,厌氧菌群密度为４．４１０１±０．３５８６１;患者需氧菌群密度为４．５２９０±０．００８６,厌氧菌群密度为４．８７１８±０．３４２４。反复呼吸道感染患者需氧菌和厌氧菌的含量均不于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。１８例病人分离出两种以上需氧菌,奈瑟氏菌和肺炎链球菌检出率较高,分别为３８．７％和２２．６％;厌氧菌以韦荣氏球菌和消化链球菌为多见,检出率分别为３２．２％和５８．１％。有７例病人分离出白色念珠菌。４例病人分离出绿脓杆菌,明显表现出微生态失调。药敏结果表明,不同菌株对抗生素均有一定的耐药性存在。     

革兰氏阴性不发酵杆菌的鉴定及其对抗生素的敏感性

本文报道从临床病人和医院内环境分离的165株革兰氏阴性不发酵杆菌的鉴定,以及这些菌对常用抗生素敏感性试验的结果。165株菌归属为五个菌属：假单胞菌属、不动杆菌属、莫拉氏菌属、无色杆菌属和产碱菌属。绝大部分菌株对于常用抗生素耐药。讨论了细菌鉴定方法和程序。提出这些菌与临床感染具有密切关系,耐药菌株对于感染症治疗和医院内感染带来的问题。