510.6nm激光照射对兔血管平滑肌细胞增殖的影响

本文用５１０．６ｎｍ 波长激光以功率密度１、５、１０ ｍ Ｗ／ｃｍ ２ 和能量密度２、４、６Ｊ／ｃｍ ２ 照射体外培养的兔血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）,通过３Ｈ－ ＴｄＲ掺入率和细胞生长曲线测定细胞增殖率。结果显示,上述激光照射量均能抑制细胞增殖率,其中以１０ｍ Ｗ／ｃｍ ２ 组的作用最为显著     

常用功率密度CO2激光治疗尖锐湿疣时烟尘中HPV DNA的检测

目的 :了解临床常用功率密度的 CO2 激光治疗尖锐湿疣术中烟尘是否含有 HPVDNA。方法 :选择皮损较多的尖锐湿疣 ,病程在 6个月以内的患者作为研究对象 ,分别用 5 W、1 0 W、1 5 W对应功率密度下的 CO2 激光汽化在体疣体组织 ,离光斑 5 cm或 5 0 cm处用吸尘器抽吸烟尘于 PBS中 ,经固定后观察烟尘的细胞形态学 ,并用 HPV通用型引物作 PCR检测烟尘是否含有 HPV-DNA。结果 :三种功率密度的烟尘主要由炭化颗粒组成 ,其中含有少量破碎的上皮细胞及形态完整和不完整的单个表皮细胞或细胞团 ;PCR检测 CO2 激光在 5 W、1 0 W、1 5 W对应功率密度下治疗时的烟尘 ,HPV DNA阳性数分别为 :1 /1 3、3 /9、3 /1 5例。结论 :CO2激光常用功率密度治疗尖锐湿疣时 ,烟尘中有 HPV DNA存在 ,为防其对人体造成的危害 ,需要及时抽排烟尘。     

宫颈癌病变组织人乳头瘤病毒感染率的免疫细胞化学与DNA杂交的比较观察

近年来人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）被认为与宫颈癌的发生有密切关系。该实验报道了用分子杂交技术（在严格条件下）检测了宫颈活检组织：慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤（ＣＩＮ）、宫颈癌和宫颈正常组织中１６型乳头瘤病毒（ＨＰＶ－１６）ＤＮＡ的阳性率,并将其与用免疫细胞化学方法（ＰＡＰ）所得结果进行了比较。结果显示１３％（２／１５）的慢性宫颈炎、１７％（２／１２）的ＣＩＮ、５６％（５１／９１）的宫颈癌含有ＨＰＶ－１６ＤＮＡ,而正常组织为阴性;ＨＰＶ属抗原仅见于３５％（６／１７）的ＣＩＮ,其他受检组织均为阴性。结果提示用ＰＡＰ法检查ＨＰＶ－１６的抗原,所得阳性率不及ＤＮＡ杂交所得阳性率高;但它作为一种简便、快速的方法用于福尔马林固定、石腊切片材料,显示ＨＰＶ属抗原,借以筛选多种不同型的ＨＰＶ对ＣＩＮ或其他组织中ＨＰＶ的增殖性感染有一定的价值。     

hBMP—2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达

研究了骨形态发生蛋白ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ在ＣＯＳ细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从ｐＳＰＳ６５ＢＭＰ－２质粒中回收ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ,删除５端的非翻译序列,插入ｐＳＶＬ载体中,构建了含有ＢＭＰ－２全长编码序列的重组表达质粒ｐＳＶＬＢＭＰ－２将表达质粒导入ＣＯＳ－７细胞中,细胞ＲＮＡ点杂交结果表明,转染ＢＭＰ－２基因的细胞内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ水平明显升高,细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ显示,转染ＢＭＰ－２ｃ     

家蚕病毒的表面增强拉曼光谱研究

得到并分析了家蚕核型多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉＮｏｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ缩写为ＢｍＮＰＶ）和质型多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ缩写为ＢｍＣＰＶ）包涵体（即核型多角体ＢｍＮＰＢ和质型多角体ＢｍＣＰＢ）在银胶溶液中的表面增强拉曼散射（ＳＥＲＳ）光谱。ＢｍＮＰＢ和ＢｍＣＰＢ通过氨基酸残基侧链的Ｓ原子、ＣＯＯ－（ＣＯＯＨ）和ＮＨ２（ＮＨ）基团以及蛋白质分子的Ｎ－末端与银表面相作用。Ｔｒｐ残基金部或大部处于疏水环境中。ＢｍＮＰＢ中蛋氨酸残基侧链的Ｓ－ＣＨ２和ＣＨ２－ＣＨ２链分别为扭曲和扭曲式构型。ＢｍＣＰＢ中的Ｓ－ＣＨ２和ＣＨ２－ＣＨ２链则分别属于反式和扭曲构型;Ｃ－Ｃ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｃ链为反式－扭曲－反式结构。     

hBMP－2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达

研究了骨形态发生蛋白ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ在ＣＯＳ细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从ｐＳＰＳ６５ＢＭＰ－２质粒中回收ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ,删除５＇端的非翻译序列,插入ｐＳＶＬ载体中,构建了含有ＢＭＰ－２全长编码序列的重组表达质粒ｐＳＶＬＢＭＰ－２。将表达质粒导入ＣＯＳ－７细胞中,细胞ＲＮＡ点杂交结果表明,转染ＢＭＰ－２基因的细胞内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ水平明显升高;细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ显示,转染ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ后,细胞分泌产生的ＢＭＰ－２显著增加。小鼠实验发现,在肌肉内用注射法导入ＢＭＰ－２重组质粒后,局部组织内ＢＭＰ－２的ｍＲＮＡ转录水平也明显提高。     

弱激光对脂质体介导的血管平滑肌细胞基因转染的影响

本研究采用阳离子脂质体介导外源基因转染体外培养的兔血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）,在基因转染过程中给予激光照射,用细胞化学染色方法测定基因转染阳性率。结果显示：用５１０．６ｎｍ激光于基因转染前,以功率密度１ｍｗ／ｃｍ２,能量密度２、４、６Ｊ／ｃｍ２和５ｍＷ／ｃｍ２,４、６Ｊ／ｃｍ２;及１０ｍＷ／ｃｍ２,２Ｊ／ｃｍ２进行照射均能显著提高基因转染率（ｐ＜０．０５）;于基因转染后即刻以功率密度１ｍＷ／ｃｍ２、能量密度２Ｊ／ｃｍ２和５ｍＷ／ｃｍ２、６Ｊ／ｃｍ２照射也能提高基因转染率（ｐ＜０．０５）。而用６２７．８ｎｍ激光照射对基因转染率无显著影响     

大连地区尖锐湿疣中HPV感染的调查

大连地区尖锐湿疣中ＨＰＶ感染的调查大连医科大学附属二院大连１１６０２３聂大平范治璐韩锐尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染所致。本文用ＰＣＲ技术检测４４例尖锐湿疣组织中ＨＰＶＤＮＡ,报告如下：１材料与方法标本来源于经临床或病理诊断为尖锐湿疣的患者,...     

电击法锈导的欧白英原生质体转化和转化植株再生

本研究使用电击法成功地将带有标记基因ＮＰＴⅡ的质粒ｐＣａＭＶＮＥＯ转入欧白英的原生质体,并获得了再生转化植株。通过用ｐＤＷ２质粒进行的ＣＡＴ基因短暂表达研究,确定了欧白英原生质体转化的电击条件为：电容３０ｎＦ、电场强度１５００Ｖ／ｃｍ、时间衰变常数５９．４微秒;质粒ＤＮＡ浓度为２０μｇ／２×１０＾６原生质体。在以上条件下,欧白英原生质体的相对转化率为１２．４％,绝对转化率为２．４×１０－４。在大多     

人乳头瘤病毒6b型晚期蛋白L_2免疫反应表位的确定

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）含有２个晚期开放读码框（ＯＲＦ）,Ｌ＿２ＯＲＦ编码的蛋白具有型特异性。本研究用能表达产生完整ＨＰＶ６ｂＬ＿２蛋白的质粒ｐ６ｂＬ＿２ＮＸ,采取核酸外切酶Ⅲ定向连续次级克隆的方法,制备了一系列一端逐渐删切的ＤＮＡ片段,诱生一组从Ｃ端至Ｎ瑞依次减少的Ｌ＿２蛋白与相应血清作免疫印迹实验,最小的仍保持阳性反应的多肽即含有抗原表位,实验结果ＨＰＶ６ｂＬ＿２蛋白的核酸编码区位于５４８１－５５０６之间,其相应氨基酸序列是ＥＰＧＩＮＰＴＱ。     

柯萨奇B3病毒结构和非结构蛋白基因重组质粒的构建及其在体外真核细胞中的

制备ＣＶＢ３结构蛋白和非结构蛋白重组质粒ＤＮＡ疫苗时,采用ＲＴ－ＰＣＲ从ＣＶＢ感染的ＨｅＬａ细胞中扩增ＶＰ１、ＶＰ２、２Ａ和３Ｄ基因,重组入真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３中,构建ｐｃＤＮＡ３／ＶＰ２、ｐｃＤＮＡ３／ＶＰ１、ｐｃＤＮＡ３／２Ａ和ｐｃＤＮＡ３／３Ｄ重组质粒,经酶切和测下实扩增的序列并将各重组质粒体外转染真核细胞ＣＯＳ－７,用ＲＴ－ＰＣＲ检测ｍＲＮＡ的转录,用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测表达产物。结果４种重组质粒酶切出相应大小的目的片段,经测序证实为ＣＶＢ３相应序列,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实能够在体外真核细胞中表达。本文成功构建ＣＶＢ３结构与非结构蛋白的重组质粒ＤＮＡ疫苗,为进一步研究其免疫效果奠定了基础。     

含人IL—2基因的真核表达质粒的构建及其在真核细胞…

本工作用ＰＣＲ由人的外周血单个核细胞ｃＤＮＡ中获取了带有信号肽的ＩＬ－２全ｃＤＮＡ克隆,并构建了不同的表达质粒：带有ＳＶ４０启动子的以质粒为载体的ｐＳＶＫ３－ＩＬ２和以逆转录病毒为载体的ｐＬＮ－ＩＬ２系列?ｐＬＮＣＩＬ２,ｐＬＮＳＩＬ２,ｐＬＩＬ２ＳＮ,它们分别带有ＣＭＶ、ＳＶ４０和ＬＴＲ启动子。用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法、ＳＡ－脂质体法和电穿孔等方法分别将这些ＩＬ－２表达质粒转染入ＣＯＳ－７及     

6BA诱导的带正电荷的葡萄叶过氧化物酶

河岸葡萄叶的带正电荷过氧化物酶（ｃａｔｉｏｎｉｃ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ, ＣＰＯＤ） 可受６ＢＡ 诱导,但盐、Ｈ２Ｏ２ 或Ｆｅ２＋＋ Ｈ２Ｏ２ 均使叶片ＣＰＯＤ 活性明显下降,而高浓度的无机盐明显刺激纯ＣＰＯＤ 活性增加。在以愈创木酚为底物时ＣＰＯＤ 最适ｐＨ 为４ ．６０ ～５ ．７５ ,对Ｈ２Ｏ２ 的表观Ｖｍａｘ 和Ｋｍ 值分别为１１０ Ｕ／ｍｇ 蛋白和１ ．１５ｍ ｍｏｌ／Ｌ。     

转译优化对EPO基因在COS7细胞中表达的影响

利用ＣＯＳ７细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对ＥＰＯ－ｃＤＮＡ表达的影响。通过ＤＮＡ重组技术,构建了原ＥＰＯ－ｃＤＮＡ表达载体ｐＣＳＶ－ＥＰＯ（１）,其转译起始序列为５＇ＡＡＴＴＣＡＴＧＧ３＇。同时通过定点突变技术,将起始序列改变成５＇ＣＣＡＣＣＡＴＧＧ３＇,而构建了另一表达载体ＰＣＳＶ－ＥＰＯ（２）。后经序列分析证明无误后和前均通过ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞上清,测定结果为     

单克隆抗体ELISA测定UVB诱导的DNA损伤(英文)

本文采用单克隆抗体酶联免疫吸附分析法测定了ＵＶＢ诱导ＤＮＡ产生的ＣＰＤ和６４ＰＰ。经０．５ｍＷ／ｃｍ２ＵＶＢ处理１５ｍｉｎ的小牛胸腺和鲱鱼精ＤＮＡ,ＣＰＤ和６４ＰＰ含量显著增加,而未经ＵＶＢ处理的对照ＤＮＡ则没有二聚体形成。     

单克隆抗体ELISA测定UVB诱导的DNA损伤

本文采用单克隆抗体酶联免疫吸附分析法测定了ＵＶ－Ｂ诱导ＤＮＡ产生的ＣＰＤ和６－４ＰＰ。经０．５ｍＷ／ｃｍ＾２ＵＶ－Ｂ处理１５ｍｉｎ的小牛胸物鲱鱼精ＤＮＡ,ＣＰＤ和６－４ＰＰ含量显著增加,而未经ＵＶ－Ｂ处理的对照ＤＮＡ则没有二聚体形成。     

IL—2重组杆状病毒载体的构建及表达

将人白细胞介素２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ插入苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮ－ＰＶ）的转移载体ｐＶＬ１３９２中。经限制性酶切和ＤＮＡ杂交筛选、鉴定出重组转移载体ｐＶＬ１３９２－ＩＬ２。重组载体通过在昆虫细胞内共转染将ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移到野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ中。经３２Ｐ标记探针鉴定出重组病毒Ａｃ１３９２－ＩＬ２。用重组病毒感染昆虫细胞,结果表达产物有明显刺激ＣＴＬＬ细胞生长,［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法检测ＩＬ－２活性为１５００ＩＵ／ｍ１。     

家蚕NPV SOD基因序列和在大肠杆菌中表达

通过ＰＣＲ 克隆了家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ） ＳＯＤ基因, 并在大肠杆菌中进行表达, 证明了Ｂｍ ＮＰＶＳＯＤ基因产物确有ＳＯＤ活性, 其活力单位约为５７６ ｕ／ｍＬ 培养液。ＤＮＡ 测序结果表明Ｂｍ ＮＰＶ ＳＯＤ 基因编码１５１ 个氨基酸, 与人的ＳＯＤ１ 基因的核苷酸同源性为５６ ％ , 与ＡｃＮＰＶ 拟为的ＳＯＤ基因同源性为９７ ．２％ 。     

用PCR扩增和克隆鸡传染性贫血病毒全基因组DNA

根据已发表的序列,分别在鸡贫血病毒（ＣＡＶ）环形基因组ＤＮＡ（全长２．３ｋｂ）的ＥｃｏＲＩ位点和ＢａｍＨＩ位点的两侧选择适当序列合成两对引物,用ＰＣＲ技术,从斑点杂交检测到病毒核酸的ＣＡＶ感染的ＭＤＣＣＲＰ１细胞基因组ＤＮＡ中,分别扩增出包含ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ分割开的病毒基因组两部分（１．５ｋｂ和０．８ｋｂ）约１．５ｋｂ和约１．２５ｋｂ的两个片段。再将其中相应序列拼接克隆进ｐＵＣ１８载体,获得包含ＣＡＶ全基因组序列ＤＮＡ片段的克隆质粒ｐＣＡＶ２．４。酶切分析表明,该质粒具有预期的ＢａｍＨＩ位点、ＰｓｔＩ位点、ＨｉｎｄⅢ位点,而预期的ＥｃｏＲＩ位点消失。重组质粒插入ＤＮＡ片段的两端序列分析表明,质粒ｐＣＡＶ２．４是包含ＣＡＶ全基因组序列的重组质粒,插入ＤＮＡ片段序列中的ＥｃｏＲＩ位点序列发生了一个碱基突变。     

黄瓜花叶病毒山东株(CMV-SD)RNA2全长cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶＳＤＲＮＡ２的５’和３’末端序列,在此基础上,利用ＲＴＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２３,并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２Ｆ。通过对ｐＣ２５和ｐＣ２３进行序列测定,得到了ＲＮＡ２的全序列。序列分析结果表明ＣＭＶＳＤＲＮＡ２由３０４８ｎｔ组成,其中存在２个部分重叠的阅读框ＯＲＦ１（７９～２６５２ｎｔ）和ＯＲＦ２（２４１４～２７４６ｎｔ）,分别编码８５８ａａ的２ａ蛋白和１１１ａａ的２ｂ蛋白,并在２ａ蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系ＲＮＡ２核苷酸序列与分属ＣＭＶＩ亚组的Ｆｎｙ株系和ＩＩ亚组的Ｑ株系ＲＮＡ２的核苷酸序列同源性分别为９１７％和７５６％;２ａ蛋白的氨基酸序列同源性分别为９３８％和６７７％,２ｂ蛋白的氨基酸序列同源性分别为８３０％和５１３％。同源性比较的结果表明ＳＤ株系属于ＣＭＶＩ亚组。