精子冷冻保存技术及研究进展

精子冷冻是辅助生殖技术的基础,能够有效的保存有价值的基因资源。文章回顾了近些年来国内外精子冷冻保存的重要研究成果,分析了精子的来源、冷冻预处理、冷冻和解冻方法、防冻剂的选择及其加入去除方式的选择等因素对精子冷冻效果的影响。文章还总结了精子冷冻效果的评价方法,展望精子冷冻技术的发展方向和应用前景。     

四种渗透性防冻剂在猕猴精子低温冷冻保存中对精子功能状态的影响

以冷冻精子的复苏运动度、荧光染料Hoechst 3 3 2 5 8检测的细胞膜完整率、异硫氰酸荧光素标记的花生凝集素 (FITC PNA)检测的顶体完整率作为精子功能状态的指标 ,对甘油、二甲亚砜、乙二醇和丙二醇 4种常用渗透性防冻剂在猕猴精子冷冻保存过程中的作用进行了比较。结果表明 :冷冻保存精子的复苏运动度 ,甘油 ( 4 7 3± 5 7% )和乙二醇 ( 4 4 8± 6 7% ) >二甲亚砜 ( 2 2 9± 0 9% ) >丙二醇 ( 0± 0 % ) ;细胞膜完整率 ,甘油 ( 5 4 8± 3 2 % )和乙二醇 ( 5 4 0± 6 7% ) >二甲亚砜 ( 3 7 5± 7 0 % ) >丙二醇 ( 2 8 3± 6 5 % ) ;顶体完整率 ,甘油 ( 82 2± 2 4 % )和乙二醇 ( 82 4± 2 4 % ) >二甲亚砜 ( 6 8 7± 5 7% )和丙二醇 ( 72 3±3 5 % ) (P <0 0 5 )。结果提示 :二甲亚砜和丙二醇 ,尤其是丙二醇并不适合猕猴精子的冷冻保存 ;而乙二醇具有和甘油相似的保护作用 ,是一种极具潜力的猕猴精子冷冻保存的渗透性防冻剂。     

金黄仓鼠卵子冷冻及在人精子受精能力检测中的应用

通过对比试验,筛选出含３．０％牛血清白蛋白的ＢＷＷ培养基和２·０ｍｏｌ／Ｌ最终浓度的二甲基 亚砜（ＤＭＳＯ）冷冻保护剂配制成冷冻液,将金黄仓鼠卵以０．３－１·０℃／ｍｉｎ的冷冻速率分别降温至 －４０℃和－８０℃,再浸入液氮中冷冻保存（３～３１天）。结果表明：冷冻降温速率以０·３℃－０·５℃／ｍｉｎ 为宜,降温到一８０℃浸入液氮的冻卵存活率（６３％）比－４０℃（４６％）的高。将解冻后存活卵去除 透明带,与人获能精子进行体外穿透试验,穿卵率达３４． ４％,与新鲜卵对照组（５０％）相比,无统 计学差异（Ｐ＞０·０５）;扫描电镜观察结果与压片光镜观察相吻合。     

糖在猕猴精子低温冷冻保存过程中的作用

TTE或TEST防冻液在冻存猕猴精子时产生不同结果,其主要不同在于防冻液中糖成分的不同。本实验利用透射电镜技术检测这2种防冻液冻存的猕猴精子冷冻前后超微结构的变化,以说明糖在低温冻存过程中的作用。结果表明,冷冻复苏过程对精子结构产生了影响。TTE法低浊保存的猕猴精子的头部的质膜出现少许皱褶或泡化现象,但精子的顶体、核或是精子尾部的结构与鲜精的结构基本相似。猕猴精子经TEST法低温保存后,大部分精子结构则发生了明显的变化。精子膜、顶体和精子核明显泡化、损伤或破裂,精子尾部不能分辨出正常的超微结构。这提示,可能由于TTE防冻液中复杂的糖成分在降温／复苏过程对精子起到了较好的协同冷冻保护作用;而TEST防冻液中单一的糖成分不能完全保护精子避免低温损伤,低温保存过程破坏了精子的结构,并影响了复苏后精子体外存活能力与受精能力。     

不同促排卵药物用于宫腔内人工授精的疗效观察

夫精宫腔内人工授精(IUI)是可作为解决轻度精液异常、宫颈因素以及不明原因不孕的首选助孕方式。不孕患者可以通过促排卵治疗提高IUI的临床妊娠率。医院使用的常用各种促排卵药物均有其优缺点。     

蛋白质组学技术在精子蛋白研究中的应用

从蛋白质组学研究的技术手段、蛋白质组学在人类不育及精卵相互识别并结合的机理研究、免疫法开展男性避孕方法的研究及蛋白质组学研究方法在家畜繁殖环节中的应用等几个方面阐述了蛋白质组学在人类生殖及动物繁殖环节相关研究中的重要作用。说明蛋白质组学已经成为生命科学未来发展的主要分支之一,为揭示生命个体的蛋白质动态变化提供了技术手段和理论基础,并将在药物开发,生命活动机理研究等方面发挥巨大作用,也必将会在家畜繁殖学领域发挥其应有的作用。     

淫羊藿多糖对弱精症精子冷冻保存效果的影响

常用的冷冻保护剂对于弱精症精子冻融效果欠佳,本实验通过在人精子冷冻保护液中添加淫羊藿多糖(EPS),研究其对冻融过程中精子活力及精子功能的影响.选择弱精症精液15例,液化后的精液样本分别与甘油-卵黄-柠檬酸盐(GEYC)冷冻保护液或含有EPS冷冻保护液混匀冷冻.检测其精子的活力、存活率以及精子形态、丙二醛(MDA)以及...     

非人灵长类动物精子冻存技术的研究进展

随着生物医学技术的发展,应用非人灵长类动物模型进行基础科学研究日益广泛。与此同时,由于栖息地破坏、狩猎和基因隔离,许多非人灵长类动物濒临灭绝。因此,改进非人灵长类动物精子冻存技术对物种遗传资源的保藏具有重要的意义。本文概述了非人灵长类动物的精液特征,介绍了精液液化和冷冻精子质量评估的方法,分析了冷冻保护剂、冷冻稀释液及冷冻方法等因素对精子冻存效果的影响,总结了目前非人灵长类精子冷冻常用的冷冻保存液和冷冻方法,并对相关精子参数进行了比较,同时探讨了非人灵长类动物精子冻存研究面临的困境,并提出了可行的方案。总之,本文综述了近年来非人灵长类动物精子冻存的重要研究成果,对开发新的冷冻保护剂及改进冷冻技术具有一定的参考价值。     

冷冻保护剂及预冷时间对河蟹精子体外冷冻保存的影响

本文以甘油、二甲亚砜（DMSO）为冷冻保护剂,采用两步降温法,以精子存活率和DNA损伤程度为检验其冷冻效果的评价指标,研究了冷冻保护剂和预冷时间对河蟹Eriocheir sinensis精子冷冻保存效果的影响。胰蛋白酶消化法获得河蟹游离精子,液氮冷冻保存8h以上,精子保存密度为10^7个／mL,伊红染色法检测精子存活率,单细胞凝胶电泳（SCGE）检测精子DNA损伤。实验共设置10个组,分别为不同浓度的单一冷冻保护剂（每种保护剂的体积百分比分别为5％、10％、12．5％、15％）和两种保护剂组合（两种保护剂在同一实验组巾的体积百分比含量均为5％、10％）。结果显示,12．5％甘油的保存效果最佳,精子存活率达到62．60％。在此基础上,以10％甘油作为冷冻保护剂,设置5、10、20、30、40min5个时间梯度,研究了预冷时间对精子冷冻保存效果的影响。结果显示预冷时间的长短对精子冷冻保存效果的影响显著,当预冷时间低于20min时,精子大量死亡,且精子DNA严重损伤;当预玲时间超过30min时,精子存活率明显提高,精子DNA损伤明显减弱。     

射精球蛋白EBP在果蝇精子发生中的功能初探

射精球蛋白EBP主要由射精管释放,是果蝇精液的重要组成部分。但是,EBP的具体作用机制及其在果蝇其它生命活动中的功能仍不清楚。本文检测了果蝇Ebp和EbpII基因在不同发育阶段以及成虫精巢与卵巢中的表达水平。结果发现,Ebp和EbpII基因在成虫中的表达水平显著高于其它发育阶段的果蝇,且它们在精巢中的表达显著高于卵巢。生物信息学分析表明,EBP和EBPⅡ蛋白仅包含若干低复杂区域,不含特殊的结构域,且它们的理化性质存在差异。在精细胞中特异性敲降Ebp后,果蝇储精囊中缺乏成熟的精子,但敲降EbpII后精巢没有显著的表型变化。TUNEL实验结果显示,在精细胞和生殖干细胞中特异性敲降Ebp的表达均能引起精子束的异常凋亡。由此,推测Ebp基因参与果蝇精子发生过程,并在维持精细胞存活过程中起关键作用。     

Cryopreservation and Sperm DNA Integrity

Cryopreservation of sperm is an extremely important issue in the field of male infertility as freezing can have detrimental effects on a variety of sperm functions, some of them not accessible to the traditional semen quality analysis. In this study, chromatin structure variations in human spermatozoa in semen were studied with the sperm chromatin structure assay (SCSA), both before and after cryopreservation. Samples were divided into two aliquots: the first was analysed without further treatment, while the second was stored in liquid nitrogen at −196 °C using standard cryopreservation techniques. The fresh and thawed aliquots were also assessed by light and fluorescence microscopy (after Acridine Orange staining, AO), and computer-assisted semen analysis (CASA) of motility. Overall sperm quality was found to deteriorate after cryopreservation. When thawed spermatozoa were subjected to an extra swim-up round, a general improvement in nuclear maturity was seen in post-rise spermatozoa.     

Sperm Cryopreservation in Male Infertility Due to Genetic Disorders

Certain chromosomal and genetic anomalies, such as Klinefelter syndrome (47,XXY) and Y chromosome microdeletions, have been reported as potential causes of a progressive impairment of spermatogenesis. In these cases cryoconservation of ejaculated or testicular sperm represent a valuable tool for the preservation of fertility. However, dealing with genetic disorders, the transmission of genetic anomalies has to be taken into consideration. It is therefore important to be aware about the clinical importance and the related genetic risks of these anomalies. In this article we describe the clinical significance of these diseases.     

早泄的诊疗进展

早泄是男性常见的一种性功能障碍性疾病,属于射精障碍,在男性病中有着相对较高的发病率。早泄严重的影响着患者的生活质量和性生活质量,渐渐的引起患者自信心的缺失,还在一定程度上影响患者的夫妻感情和关系,最终导致患者出现焦虑、紧张、恐慌等症状。这些不良的精神状态最终影响着患者的家庭生活和工作质量等。针对早泄的发病原因,其治疗方法也是多种多样的,治疗效果也不统一,有着很大的差异,新的治疗方法也越来越多。因此对于早泄的治疗有着重要的意义。本文对早泄的治疗进行综述。     

黑鲷精子的超低温冻存及DNA损伤的SCGE检测

以0.5 mL的麦细管为冻存管和DMSO为抗冻剂进行超低温冷冻黑鲷精子,对冻精核DNA的损伤情况进行单细胞凝胶电泳（SCGE）检测,其结果表明,以Cortland溶液为稀释液,5%、10%、15%及20%DMSO为抗冻剂的超低温冻存的黑鲷精子活力、受精率与鲜精无显著差异。其中以10%DMSO为抗冻剂的冻存效果最佳,冻精的激活率、运动时间、寿命及受精率分别达（92.91±1.25）%、（39.90±2.70）min、（53.82±2.84）min及（89.35±1.99）%;而以25%及30%DMSO为抗冻剂时,冻精活力及受精率显著下降。SCGE检测结果显示,DMSO浓度为5%、10%、15%及20%时,黑鲷冻精与鲜精的彗星率及损伤系数差异不显著;DMSO浓度为25%及30%时,冻精与鲜精的彗星率及损伤系数差异显著;冻精的彗星率与抗冻剂DMSO浓度成正相关。黑鲷鲜精及冻精核的DNA损伤主要为轻度和中度损伤,重度损伤比例较低,完全损伤仅存在于25%及30%DMSO为抗冻剂的冻精中,且比例低。分析认为,较高浓度的DMSO是引起冻精核DNA损伤的主要原因。     

宫内节育器与宫腔支撑球囊联合应用治疗中重度宫腔粘连中的临床效果

摘要 目的：探讨宫内节育器与宫腔支撑球囊联合应用治疗中重度宫腔粘连的临床效果。方法：选择2016年12月至2019年8月于西安交通大学第一附属医院宫腔镜诊疗中心接受宫腔镜下中重度宫腔粘连分解术的患者共96例,采用随机对照表法将其分为两组。对照组48例,术后宫腔内放置宫内节育器(intrauterine contraceptive device,IUD);研究组48例,术后放置宫腔支撑球囊(intrauterine support balloon,ISB),3~5 d后更换为宫内节育器。两组术后均给予为期3月的人工周期治疗。术后1月,复查宫腔镜了解宫腔有无再粘连并取出宫内节育器,以此评估手术效果是否有效,术后3月时随访其月经来潮情况。统计比较两组术后5 d内阴道出血量、C反应蛋白水平、发热、下腹痛以及节育器或支持球囊有无脱落等情况,术后1月手术效果及术后3月月经恢复情况。结果：研究组的手术有效率及月经改善比例均显著高于对照组(P<0.05),术后5 d内阴道出血量显著少于对照组(P<0.05);下腹痛及球囊脱落事件发生率显著低于对照组(P<0.05)。两组在C反应蛋白水平、发热发生率对比无统计学差异(P>0.05)。结论：与单独使用宫内节育器相比,联合使用宫腔支撑球囊能提高中重度宫腔粘连分解手术有效率,改善月经,减少术后出血,不增加感染风险,但球囊易于脱落且会增加患者下腹疼痛。     

Cryopreservation and transplantation of amputated finger

Every year tens of millions reconstruction surgeries were performed to repair tissue defects caused by trauma or malignant tumor. As the composite tissues are very difficult to be preserved for a long time in vitro, “organ bank” was proposed. In addition to immune rejection, tissue cryopreservation is the key step of the “Organ Bank”. In this study, two severed fingers were cryopreserved because the patients’ conditions were not allowed to undergo the replantation immediately. The fingers were perfused with the cryopreservation solution through the digital artery at a speed of 1 ml/min, they were frozen following a control rate freezing procedure and stored in the liquid nitrogen. One finger was cryopreserved for 10 days and the other for 30 days. Both fingers were successfully replanted when the patient get better. After 1 year follow-up, the replanted fingers achieved satisfactory appearance and function. Our result demonstrate small composite tissues such as severed fingers can be cryopreserved and replanted successfully, which will help the patients who cannot receive the replantation immediately. This method will have important application value in cryobiology and clinical medicine.     

螺旋藻的超低温保存法

【目的】建立螺旋藻藻种的超低温保存法,并探究该方法对不同种类螺旋藻藻种保存的适用性。【方法】采用碘量法筛选出耐低温螺旋藻藻株,通过单因素和正交试验设计对耐低温螺旋藻超低温保存法进行条件优化,并以优化后的超低温保存法对8株不同种类的螺旋藻进行保藏实验。【结果】FACHB-351为筛选出的耐低温螺旋藻藻株;优化后的超低温保存方案为:以10%蔗糖溶液做冷冻保护剂,将藻丝体密度为1.0×107 CFU/m L的藻悬液于4°C驯化72 h,再将藻液和保护剂分别在0°C预冷30 min后混匀,混匀后于0°C停留3 h,然后投入液氮保存。保藏实验结果表明,保藏6个月时除了耐低温性较差的FACHB-350、FACHB-1070、FACHB-902螺旋藻存活率为0,不能恢复生长繁殖,其它5种耐低温性较好的螺旋藻均能在一定时间内恢复正常的生长繁殖,其中FACHB-351的存活率最高,为39.33%。【结论】建立的超低温冷冻保存法可用于耐低温性较好的螺旋藻藻种的长期保存。     

单纯治疗慢性前列腺炎对其合并早泄的影响

目的:探讨单纯治疗慢性前列腺炎对其合并早泄的影响。方法:选择372例前列腺炎继发早泄的患者进行单纯针对前列腺炎的治疗,评价前列腺炎的治疗效果(包括前列腺炎症状评分(NIH-CPSI)、前列腺液常规等)及早泄的治疗效果(包括患者性生活满意度评分、配偶性生活满意度评分及阴道内射精潜伏期等)。结果:慢性前列腺炎经综合治疗后,患者的NIH-CPSI评分及前列腺液白细胞计数均显著降低(P0.05)。前列腺炎治愈或好转后,大多数患者的早泄情况得到明显改善,患者性生活满意度、配偶性生活满意度均较治疗前显著提高,阴道内射精潜伏期亦较治疗前明显延长,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:单纯治疗慢性前列腺炎继可使大部分患者并发的早泄明显改善,而对少数前列腺炎好转后早泄症状改善不明显者,可联合应用SSRIs等药物治疗。     

mTOR和PLGF在胎儿宫内生长受限中的作用机制

胎儿宫内生长受限(IUGR)是一种常见孕期疾病,有报道称其与滋养细胞的侵袭能力减弱有关,而mTOR和PLGF对滋养细胞侵袭有重要作用。为了探究m TOR和PLGF对滋养细胞侵袭力的影响,明确两者在IUGR发生和发展过程中的作用机制,本研究以孕早期人滋养细胞Swan 71为对象,利用雷帕霉素抑制mTOR的活化,通过小室侵袭实验、基因沉默和蛋白印迹法(Western blotting)观察了滋养细胞侵袭力和相关基因表达的变化,以及外源PLGF的添加对其结果有无影响。结果表明m TOR磷酸化受到抑制会导致滋养细胞的侵袭能力减弱,而PLGF能改善这种减弱现象,改善机制与增强p70、ERK和AKT磷酸化有关。然而,当mTOR基因被沉默后,PLGF就不能再改善或逆转因m TOR磷酸化缺失带来的细胞侵袭力的减弱。此外,本研究还发现mTOR磷酸化能调控PLGF和sflt-1的表达,后两者在IUGR发展中,常因为滋养细胞侵袭力的减弱而受到影响。