鹅源腺病毒基因组DNA物理图谱的构建

将鹅源腺病毒Ｙ８１Ｇ４株全基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ酶切片段分别插入质粒ｐＵＣ１８,成功构建了全基因组ＤＮＡ文库。在此基础上,将重组质粒携带的插入片段切出、回收并分别用地高辛标记后作为探针,与经限制酶ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＥｃｏＲⅤ消化的病毒基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,杂交结果经比较综合后获得了该病毒基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、Ｅｃ     

中国对虾cDNA文库的构建

中国对虾ｃＤＮＡ文库的构建ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦｃＤＮＡＬＩＢＲＡＲＹＯＦＳＨＲＩＭＰＰＥＮＡＥＵＳＣＨＩＮＥＮＳＩＳ（ＣＲＵＳＴＡＣＥＡ,ＤＥＣＡＰＯＤＡ）关键词中国对虾ｃＤＮＡ文库构建ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ,ｃＤＮ...     

黑木耳电泳核型分析

采用等高锁状均质电场（ＣＨＥＦ）凝胶电泳技术,对黑木耳（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ ａｕｒｉｃｕｌａ）电泳核型进行分析,以酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）菌株ＹＰＨ７５５和粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）菌株ＡＳ２．２１４的染色体ＤＮＡ大小作为分子量标记,估计黑木耳基因组中至少包含９条ＤＮＡ分子量在８５０ｋｂ至５８００ｋｂ之间的染色体,     

曼氏血吸虫发育过程中的基因组DNA变异

曼氏血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｍａｎｓｏｎｉ）和日本血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）成虫和曼氏血吸虫尾蚴基因组ＤＡＮ经限制性内切酶ＢａｍＨＩ消化后,分别与＾３２ｐ－ｄＣＴＰ标记的来源于核糖体ＤＮＡ的ＰＳＭＨＣＲ５、ＰＳＭＨＣＲ４ＰＳＭ８８９探针杂交,曼我血吸虫尾蚴和成虫在ＰＳＭＨＣＲ４杂交带型的１．６－２．８ｋｂ之间,存在有明显不同的次杂带;而ＰＳＭＨＣＲ５和ＰＳＭ８８９的杂交带型,无明显差异     

应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10—A中的黑麦染 …

利用ＡＰＡＧＥ,荧光原位杂交技术和ＲＦＬＰ标记,对导入黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）多小穗等性状创制的小麦新种质１０－Ａ进行了分子标记检测,ＡＰＡＧＥ分析发现,１０－Ａ与其他１ＲＳ／１ＢＬ易位系一样,含有１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇｌｄ１Ｂ３。以黑麦基因组总ＤＮＡ作探针,用中国春（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｕｍｃｖ．ＣｈｉｎｅｓｅＳｐｒｉｎｇ）基因组ＤＮＡ作封阻,与１０－Ａ根尖细胞有丝分裂染     

黑木耳电泳核型分析

采用等高锁状均质电场（ＣＨＥＦ）凝胶电泳技术,对黑木耳（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａ）电泳核型进行分析,以酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｉｖｉｓｉａｅ）菌株ＹＰＨ７５５和祭酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ）菌株ＡＳ２．２１４的染色体ＤＮＡ大小作为分子量标记,估计黑木耳基因组中至少包含９条ＤＮＡ分子量在８５０ｋｂ至５８００ｋｂ之间的染色体,多数染色体ＤＮＡ分子量在１０００ｋｂ至３４００ｋｂ之间,基因组大小在２２Ｍｂ以上。     

THINOPYRUM BESSARABICUM和THINOPYRUM ELONGATUM的基 …

对２个八倍体Ｃ．Ｓ－Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍ ｂｅｓｓａｒａｂｉｃｕｍ（ＡＡＢＢＤＤＪＪ,２ｎ＝８ｘ＝５６）和Ｇｏｓｈａｗｋ（ＧＨＫ）－Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍ ｅｌｏｎｇａｔｕｍ（ＡＡＢＢＤＤＥＥ,２ｎ＝８ｘ＝５６）的根尖细胞染色体进行Ｃ－分带,从中分检出Ｔｈ．ｂｅｓｓａｒａｂｉｃｕｍ和Ｔｈ．ｅｌｏｎｇａｔｕｍ的各自染色体进行核型分析,结果表明：Ｔｈ．ｂｅｓｓａｒａｂｉｃｕｍ和Ｔｈ．ｅｌｏｎｇａｔｕｍ的     

普通小麦基因组最可能的4个供体的ITS1和ITS2序列及其亲缘关系

对普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）基因组（ＡＡＢＢＤＤ）最可能的供体－Ｔ．ｕｒａｔｒｔｕＴｈｕｍ．（ＡＡ）、Ｔ．ｍｏｎｏｃｃｕｍｖａｒ．ｂｏｅｏｔｉｃｕｍ（Ｂｏｉｓｓ．）ＭＫ（ＡＡ）、ＡｅｇｉｌｏｐｓｓｐｅｌｔｏｉｄｅｓＴａｕｓｃｈ．和Ａｅ．ｔａｕｓｃｈｉｉ（Ｃｏｓｓ．（ＤＤ）的核糖体ＲＮＡ基因ＩＴＳ区进行了ＰＣＲ扩增和克隆,并测定了ＩＴＳ１和ＩＴＳ２的ＤＮＡ序列,讨论和纠正了前人     

应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10-A中的黑麦染色质

利用ＡＰＡＧＥ、荧光原位杂交技术和ＲＦＬＰ标记,对导入黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）多小穗等性状创制的小麦新种质１０＿Ａ进行了分子标记检测。ＡＰＡＧＥ分析发现,１０＿Ａ与其他１ＲＳ／１ＢＬ易位系一样,含有１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇｌｄ１Ｂ３。以黑麦基因组总ＤＮＡ作探针,用中国春（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍｃｖ．ＣｈｉｎｅｓｅＳｐｒｉｎｇ）基因组ＤＮＡ作封阻,与１０＿Ａ根尖细胞有丝分裂染色体进行荧光原位杂交。结果表明,黑麦的１ＲＳ易位到１０＿Ａ中。用２５个ＲＦＬＰ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析,进一步发现１０＿Ａ的１ＢＳ特异限制性片段发生丢失,代之以黑麦１ＲＳ的特异限制性片段,而位于其他染色体上的特异限制性片段未发生缺失。据此认为,多小穗小麦新种质１０＿Ａ属于１ＲＳ／１ＢＬ易位系。同时还讨论了１０＿Ａ在小麦遗传改良中的利用情况。     

牛病毒性腹泻病毒基因组cDNA文库的构建

以牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）┥ｎＬ株的基因组ＲＮＡ为模板,经逆向转录酶作用,合成第一链ｃＤＮＡ,再以ＲＮａｄｓｅ／Ｈ与ＤＮＡ聚合酶Ｉ联合作用合成ｄｓｃＤＮＡ,并以ｄＣ同聚物尾化。ｐＵＣ８ＤＮＡ在Ｐｓｔ Ｉ酶解后,以ｄＧ同聚物尾化,两者退火构成重组质粒,转化到Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０１受体菌中,另以γ－＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＢＶＤＶ ＲＮＡ制备探针,通过菌落原位杂交筛选重组子。酶切分配表明重组质粒插入     

用PCR扩增和克隆鸡传染性贫血病毒全基因组DNA

根据已发表的序列,分别在鸡贫血病毒（ＣＡＶ）环形基因组ＤＮＡ（全长２．３ｋｂ）的ＥｃｏＲＩ位点和ＢａｍＨＩ位点的两侧选择适当序列合成两对引物,用ＰＣＲ技术,从斑点杂交检测到病毒核酸的ＣＡＶ感染的ＭＤＣＣＲＰ１细胞基因组ＤＮＡ中,分别扩增出包含ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ分割开的病毒基因组两部分（１．５ｋｂ和０．８ｋｂ）约１．５ｋｂ和约１．２５ｋｂ的两个片段。再将其中相应序列拼接克隆进ｐＵＣ１８载体,获得包含ＣＡＶ全基因组序列ＤＮＡ片段的克隆质粒ｐＣＡＶ２．４。酶切分析表明,该质粒具有预期的ＢａｍＨＩ位点、ＰｓｔＩ位点、ＨｉｎｄⅢ位点,而预期的ＥｃｏＲＩ位点消失。重组质粒插入ＤＮＡ片段的两端序列分析表明,质粒ｐＣＡＶ２．４是包含ＣＡＶ全基因组序列的重组质粒,插入ＤＮＡ片段序列中的ＥｃｏＲＩ位点序列发生了一个碱基突变。     

GENUS ANTROPHYUM KAULF.FROM CHINA AND NEIGHBORING REGIONS

ＧＥＮＵＳＡＮＴＲＯＰＨＹＵＭＫＡＵＬＦ．ＦＲＯＭＣＨＩＮＡＡＮＤＮＥＩＧＨＢＯＲＩＮＧＲＥＧＩＯＮＳＸ．Ｃ．ＺＨＡＮＧ（Ｔｈｅｈｅｒｂａｒｉｕｍ（ＰＥ）,ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ,Ｂｅｉ...     

绿色木霉纤维素酶CBHII基因的分子克隆

本文以噬菌体ｌａｍｂｄａ ＥＭＢＬ３ ＤＮＡ为载体,通过克隆绿色木酶（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉ－ｒｉｄｅ）高分子量基因组ＤＮＡ的部分酶解片段,并将重组分子进行体外包装后侵染Ｅｓｃｈｅｒｉ－ｃｈｉａ．ｃｏｌｉＫ８０２,由此构建了绿色木霉基因文库。以李氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）纤维素酶ＣＢＨＩＩ基因的末端片段为探针,用轮回噬菌斑原位杂交从文库中筛选出ＣＢＨＩＩ基因的阳性克隆５个     

麦迪霉素4″—O—丙酰基转移酶（mpt）基因结构的研究

对含有麦迪霉素４″－Ｏ－丙酰基转移酶（ｍｐｔ）基因的ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ的ＤＮＡ片段进行限制性酶切分析,绘制出了含有２１个酶切位点的限制性酶切图谱。以含有碳霉素异戊酰基转移酶基因（ＣａｒＥ）的２．４ｋｂ ＤＮＡ片段为探针,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交,将ｍｐｔ定位于一个ＥｃｏＲＩ－ＥｃｏＲＩ－ＰｓｔＩ３．０ｋｂ的ＤＮＡ片段上,将该片段克隆至大肠杆菌／链霉菌穿梭质粒载体ｐＷＨＭ３     

栽培稻—药用野生稻杂种F1及回交后代的基因组原位杂交鉴定

以ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的药用野生稻总ＤＮＡ作探针,未标记的栽培稻总ＤＮＡ封阻,地栽培稻－药用野姓稻Ｆ１及回交皇代材料根尖体细胞染色体制片进行基因组原位杂交,鉴定出３个双单体异源附加系和４个单体异附加系。当标记探针用ａｎｔｉ－ｃｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ＰＯＤ和ＤＡＢ检测时,药用生稻染色体显棕色,栽培稻染色体则因Ｇｉｅｍｓａ.地染而显浅蓝色;标记探针用ａｎｔｉ－ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ＦＩＴＣ检     

TWO NEW SPECIES FROM TRICHOSANTHES（CUCURBITACEAE）

ＴＷＯＮＥＷＳＰＥＣＩＥＳＦＲＯＭＴＲＩＣＨＯＳＡＮＴＨＥＳ（ＣＵＣＵＲＢＩＴＡＣＥＡＥ）ＹｕｅｈＣｈｕｎ－ｈｓｉＨｕａｎｇＬｕ－ｑｉＣｈｅｎｇＣｈｉｎｇ－ｙｕｎｇ〔ＡＢＴＲＡＣＴ〕ＴｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓｒｅｆｅｒａｃｔａＹｕｅｈｅｔＬ．Ｑ．Ｈ...     

日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ,ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术,以表达Ｓｊ２６ＧＳＴ的Ｅ．ｃｏｌｉｐＧＥＸ衍生质粒为模板,经ＰＣＲ得到编码Ｓｊ２６ＧＳＴ的全长ｃＤＮＡ片段．将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）７０的启动子下游,再将ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因一起亚克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中,得到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达质粒ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６．ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６电转化入ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓｍｃ２１５５中表达Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原,所表达的天然重组Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带．其表达量分别占ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ菌体总蛋白的１５％和１０％．可见,Ｓｊ２６ＧＳＴ基因能在ＢＣＧ中高效表达．     

山羊草属五个基本基因组系统发育的RAPD分析

利用ＲＡＰＤ技术,从ＯＰＥ、ＯＰＦ、ＯＰＧ、ＯＰＵ、ＯＰＸ、ＯＰＹ和ＯＰＺ共７组随机引物中筛选出２８个能产生基因组特异带的稳定引物,对山羊草属（ＡｅｇｉｌｏｐｓＬ．）的５个基本基因组及普通小麦“中国春”的ＤＮＡ进行随机扩增,根据扩增的４８８条ＤＮＡ片段绘制出系统发育图。普通小麦ＡＢＤ基因组与Ｓ基因组亲缘关系最近,Ｃ与Ｕ基因组具有比较近的亲缘关系,Ｄ基因组与其它基因组的亲缘关系比较远     

基因组原位杂交鉴定栽培稻与广西药用野生稻杂交后代染色体构成

广西药用野生稻（Ｏｒｙｚａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）具有多种优良特性,是水稻遗传育种的重要种质资源之一。本实验以ｂｉｏｔｉｎ标记的的药用野生稻总ＤＮＡ作探针,未标记的载培稻（Ｏｒｙｚａｘａｔｉｖａ）总ＤＮＡ作封阻,以ＨＰ－ＤＡＢ系统进行信号检测,对栽培稻与广西药用野生稻的杂种Ｆ１植株的根尖染色体制片进行了基因组原位杂交。采用封阻比例１：２０～３０时,杂交效果较９为理想,药用野生稻的１２条染色体显深     

大赖草及近缘物种原位杂交和Southern杂交的分析

用Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍｂｅｓａｒａｂｉｃｕｍ（Ｓａｖｕｌ．＆Ｒａｙｓ）Ａ．Ｌｖｅ的基因组ＤＮＡ作探针,分别与大赖草Ｌｅｙｍｕｓｒａｃｅｍｏｓｕｓ（Ｌａｍ．）Ｔｚｖｅｌ．和脆轴偃麦草Ｔｈ．ｊｕｎｃｅｕｍ（Ｓａｖｕｌ．＆Ｒａｙｓ）Ａ．Ｌｖｅ的体细胞杂交,大赖草的１４对染色体均出现杂交信号,脆轴偃麦草只有７对染色体有杂交信号。在用重复ＤＮＡ序列ＰＨｖ６２作探针的原位杂交中,Ｔｈ．ｂｅｓａｒａｂｉｃｕｍ有４对染色体有杂交信号,大赖草有１３对染色体显示杂交信号,新麦草Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｎｅｖｓｋｉ和脆轴偃麦草无杂交信号。用ＰＨｖ６２作探针的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果与原位杂交相似。在被检测的１２个普通小麦大赖草异源染色体系中,除二体附加系中５Ｌｒ＃１和双二体附加系１Ｌｒ＃１＋５Ｌｒ＃１没有杂交信号外,其余的异染色体系与ＰＨｖ６２都有特异杂交信号。据此推测Ｔｈ．ｂｅｓａｒａｂｉｃｕｍ有可能参予了赖草属物种的形成过程。但是,大赖草的染色体组在进化过程中显然已发生过变异。