薄芝糖肽亲和层析纯化技术

目的研究硼配基亲和层析技术纯化薄芝糖肽的新方法.方法用乙酸铵缓冲液考察不同pH条件下加入不同浓度NaCl对薄芝糖肽吸附解吸的影响,找出静态最佳吸附解吸条件;依据Chase模型求出最大静态吸附容量、吸附常数以及动态吸附糖及蛋白的容量.结果在pH8.2、NaCl浓度加至0.15mol/L条件下薄芝糖肽的吸附量达到最大,因此为最佳吸附解吸条件;在此条件下的最大静态吸附容量qm=55.57mg/g湿基,吸附常数Kd=5.312g/L;动态吸附多糖容量为43.1mg/g湿基,动态吸附蛋白容量为10.3mg/g湿基.结论该系统使用的亲和层析能有效地分离纯化薄芝糖肽.     

人凝血酶原复合物分离纯化工艺的研究进展

人凝血酶原复合物(PCC)为人血浆中微量蛋白组份,其浓缩制剂由凝血因子II、VII、IX、X组成,在临床上具有治疗乙型血友病等疾病的确切疗效。本文综述了近来PCC及FIX浓缩制剂分离纯化工艺的研究进展及结合蛋白新型分离纯化技术的发展情况,讨论了该产品制备新工艺的开发方向。     

云芝菌丝体多糖的分离纯化研究

利用热水抽提从云芝菌丝体中提取胞内多糖,初步纯化后,用DEAE-Sepharose CL-6B进行分离,从中分离出两个带电荷多糖组分即CVP-I和CVP-Ⅱ,对这两个组分分别用Sepharose CL-6B凝胶柱层析进行纯度鉴定,均出现单一峰,然后用紫外扫描发现这两个组分均出现蛋白多糖的特征吸收,从而可以判断这两个组分是蛋白结合多糖。     

人参糖肽PG-g的分离纯化与结构分析

本研究以人参根水提物为原料,通过超滤得超滤液,超滤液浓缩后进行活性炭柱分离纯化,分别以水、5%、30%、60%和95%乙醇洗脱。理化性质测定结果显示30%乙醇洗脱组份(PGO)含糖量最高,同时含有蛋白质。PGO通过Sephadex G-15及DEAE-Sephadex A-50纯化得到糖肽PG-g,其由Ara、GlcA和GalA组成。甲基化分析结果表明PG-g以GlcA与GalA为非还原末端,以(1→3)-连接的GalA和(1→6)-连接的GlcA为主链,分别在GlcA的C3位与GalA的C6位存在分支点,同时还存在(1→2,4)-连接的Ara。糖与肽之间通过Ara-Hyp糖苷键连接在一起。PG-g含有14种氨基酸,以Cys和Tyr含量最高。     

文蛤糖肽MGP0501的分离纯化及性质鉴定

文蛤粗提液经超滤、层析等纯化得到分子量为15.878×103、纯度为96.42%、糖和蛋白质含量各占约55.18%和44.82%的糖肽MGP0501。MTT法和流式细胞术检测证实MGP0501对A549细胞具有体外抗肿瘤活性,对小鼠移植瘤S180的体内抗肿瘤实验检测亦证实其对小鼠移植瘤S180具有体内抑制作用,表明MGP0501是一种具有抗肿瘤作用的糖肽。     

木聚糖酶分离纯化技术

木聚糖酶应用广泛,其分离纯化是进行酶学性质研究、分子研究的前提条件,是成功确定氨基酸序列和三维结构的基础。综述微生物木聚糖酶分离纯化的方法,分析了常用方法在其分离纯化中的优缺点;强调了特异性分离纯化技术是高效的分离纯化方法;并对其它方法进行了概括。     

酸奶中保加利亚乳杆菌分离条件的优化

为优化从酸奶中分离保加利亚乳杆菌的培养条件,初步建立一种较简单有效的分离方法。以成都市市售的主要酸奶－华西牌瓶装酸牛奶为来源,采用MRS、SL、LS、蕃茄酵母4种经典的乳酸菌选择性培养基,并分别进行有氧及烛缸厌氧分离培养测定其得率。采用X^2检验对不同组的分离得率进行统计学分析。结果表明MRS培养基为酸奶中保加利亚乳杆菌分离首选培养基,分离得率达66．67％;微氧环境优于有氧环境（PO＜0．05）。     

直投式酸奶发酵剂中双歧杆菌的分离

介绍一种简便可行的从直投式酸奶发酵荆中分离双歧杆菌的方法。发酵剂在液体培养基中活化后,在不同选择培养基上划线分离,根据菌落及菌体形态确定双歧杆菌。然后进行初步鉴定。     

MNP-SH复合物一步法快速分离和纯化mRNA的新方法

本文建立了一种快速分离和纯化mRNA的新方法.为避免RT-PCR实验中mRNA降解问题,我们使用磁性纳米粒子,快速儋有效的从培养的细胞、组织以及脐带血中分离出带有ploy(A) 结尾的mRNA用于实验.研究结果表明,磁性纳米粒子经过修饰连接Oligo(dT)16可直接分离mRNA,其方法操作简单,快捷、省时,可有效地用于基因表达的研究.     

红酵母RY-4中虾青素的分离纯化研究

本文主要研究了红酵母RY-4菌株中天然虾青素的提取和纯化工艺。通过各种破壁提取方法的比较分析,得出了酸热法破壁丙酮提取为较经济理想的粗色素提取方法,提取的粗色素油中虾青素含量达51.7%。通过对各种柱层析条件的摸索研究,得出了以硅胶为吸附剂,Ⅴ(石油醚)∶Ⅴ(乙酸乙酯)混和液为洗脱剂梯度洗脱从粗色素油中分离纯化虾青素的方法,所得虾青素纯度达到97%。     

提取纯化大黄素的工艺研究

目的:为虎杖中大黄素的提取纯化工艺提供实验依据。方法:以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数等条件为因素,分别设计了三个水平,对大黄素的提取工艺进行正交试验。结果:大黄素的最佳提取工艺为虎杖药材加85%的乙醇回流提取3次,每次8倍量的溶剂提取1.5 h。结论:应用该提取工艺得到的大黄素的质量分数不低于10%     

葛根素的提取及纯化技术

葛根素是葛根的主要活性成分 ,因其对许多疾病有良好的治疗作用而日益受到广泛的关注。本文主要论述了从葛根中提取纯化葛根素的工艺方法     

条斑紫菜R-藻红蛋白提纯工艺研究

对条斑紫菜叶状体R-藻红蛋白提纯方法进行了研究和分析。首先分别采用冻融法、化学试剂法、溶胀法等单一及组合细胞破碎方法对条斑紫菜细胞进行破碎,结果表明溶胀 组织捣碎法效果最佳。其次用25%～60%饱和度范围内的硫酸铵沉淀法粗提藻红蛋白,发现25%～45%硫酸铵分步沉淀法效果最好,再经结晶法盐析纯度(D565nm/D280nm)达到2.088。盐析液用SephadexG-25层析柱脱盐,再经羟基磷灰石(HA)柱层析,纯度可达到4.98。R-藻红蛋白的最大吸收峰在565nm,其室温荧光发射峰为578nm。SDS-PAGE结果显示,R-藻红蛋白可分为α、β两个亚基,Mr分别为17.0×103和19.0×103。     

十字花科植物线粒体DNA的提取和纯化

以十字花科植物芸芥 Eruca sativa 、白菜型油菜 Brassica rapa 和甘蓝型油菜 Brassica napus :武39- 1、武4 3- 1、武5 0 - 2为试材,在蔗糖衬垫法分离纯化m t DNA方法优点的基础上,通过4组不同离心力配比,采用差速离心法、改变缓冲液A的成分以及增加缓冲液的用量,建立了一种简便提取十字花科植物mt DNA方法.研究结果表明:分离细胞破碎组织的离心力、分离线粒体的离心力以及纯化线粒体时的离心力分别为10 0 0 g、2 0 0 0 0 g、180 0 0 g时可分离到高产量的线粒体,且在缓冲液A 蔗糖0 .5 m ol·L- 1 ,Tris- Cl5 0 mm ol·L- 1 ,EDTA5 m mol·L- 1 ,BSA 0 .1% ,PVP 0 .5 % ,0 .1%β-巯基乙醇,p H=7.5 中加入0 .5 % PVP可提高mt DNA的产量,经DNA电泳检测、RAPD扩增证明此方法得到的mt DNA可完全达到RAPD标记和其它分子生物学研究的要求.     

铜藻岩藻黄素提取及纯化工艺研究

为了对岩藻黄素的提取、纯化进行系统研究,进而为高纯度岩藻黄素的工业化生产提供研究基础,筛选了适用于提取铜藻（Sargassum horneri）鲜藻中岩藻黄素的有机溶剂,并通过单因素实验和正交实验确定了最佳的提取溶剂浓度、提取温度、提取时间、料液比等工艺参数。随后采用硅胶柱层析法进行纯化,并通过单因素实验确定了最佳的硅胶柱床高度、上样量和洗脱流速。最后采用制备液相法对经层析纯化的岩藻黄素进一步纯化。结果表明,有机溶剂萃取的最佳工艺条件为：甲醇浓度90%,提取温度50 ℃,提取时间1 h,料液比1∶10,此条件下岩藻黄素提取率达到(0.258 9±0.003 6) mg·g-1鲜重（FW）［(1.078 8±0.015 0) mg·g-1干重（DW）］。硅胶柱层析的最佳工艺条件为：硅胶柱床高度10 cm,上样量6 g,洗脱流速10 mL·min-1,此条件下岩藻黄素得率为0.176 5 mg·g-1FW（0.735 3 mg·g-1 DW）,纯度为87.01%±0.88%。经制备液相进一步纯化后,岩藻黄素得率为0.127 1 mg·g-1 FW（0.529 4 mg·g-1 DW）,纯度为99.27%±0.22%。研究所用工艺简单,岩藻黄素得率高,为高纯度岩藻黄素的制备提供了实验基础。     

蚂蚁黑色素的提取、纯化及抗氧化活性研究

对黑蚂蚁采用盐酸水解、氢氧化钠溶液提取、盐酸沉淀,以及多种有机溶剂洗涤等工艺手段提取分离、纯化得到黑蚂蚁黑色素。研究发现黑蚂蚁黑色素溶于碱性溶液,不溶于水、酸及有机溶剂;其紫外吸收光谱与红外光谱具有吲哚型黑色素典型光谱性质。利用分光光度法测定了黑蚂蚁黑色素的总抗氧化能力、羟基自由基清除能力及还原力,试验结果表明:黑蚂蚁黑色素有一定的抗氧化能力,但在试验范围内其抗氧化能力比维生素C低。     

黄鳝骨硫酸软骨素提取纯化的初步研究

在稀碱-酶解提取基础上,辅以超声波破碎从黄鳝（Monopterus albus）骨中提取硫酸软骨素（Chondroitin Sulfate,CHS）。比较了三氯乙酸（TCA）法、Sevag法和等电点法除蛋白的效果,并进行了多糖的乙醇分级沉淀实验;粗品经离子交换树脂（CM22）和透析膜（3500Da）透析进一步分离纯化。研究结果表明酶解后用TCA法除蛋白效果好,再加入除蛋白液2倍体积95％乙醇可使大部分CHS沉淀析出;精制品经鉴定含有硫酸基,CHS含量达92．31％;琼脂糖凝胶电泳和红外吸收光谱结果显示精制品与标准CHS相似,初步确定提取物为CHS类多糖。     

猪乳中一高分子量蛋白质的分离纯化和鉴定

对猪乳中一高分子量蛋白(HMWP)进行了分离纯化,并对其某些生化性质进行了鉴定。猪乳通过去脂得到脱脂乳,再去除酪蛋白得到乳清。对乳清进行硫酸铵分级盐析,猪乳中HMWP在40％饱和度硫酸铵盐析下有最大沉淀。收集40％饱和度硫酸铵盐析沉淀,经过溶解、透析得到HMWP的粗品。通过Mono Q离子交换柱,对其粗品进行两次层析提纯,得到了HMWP纯品,其纯度和得率分别为97．85％和12．31％。多种植物凝集素的Western blotting鉴定表明,HMWP是一个糖基种类较少的糖蛋白,含有Man和GlcNAc。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得HMWP的分子量为114．8kD和115．0kD。通过等电点测定,HMWP的pI为5．10。HMWP的氨基酸组分分析得知,其富含Asp、Glu、Gly和Cys,疏水性氨基酸较低,仅占15．59％摩尔分数。这些结果说明HMWP是一个易溶于水的、酸性的分泌性单体球蛋白。N端氨基酸序列测定结果为Ala-Leu-Val—Gln-Ser-Gty-Leu-Ash-Leu-Val,通过从网络Genbank检索没有发现其同源蛋白的序列,说明其可能是一个新蛋白。     

现代提取分离技术在食药用菌多糖分离纯化中的应用

详细综述了超声波法,酶解法,超滤法,透析法,色谱法等现代提取分离技术在食药用菌多糖分离纯化中的应用,简单阐述了各种技术的优缺点,并对其应用前景作了简要探讨。