气管插管法接种H5N1病毒感染恒河猴及系统组织病毒检测

目的测试气管插管法接种高致病性禽流感病毒H5N1感染恒河猴的优势效果及疾病分析,为有效感染恒河猴、制备H5N1疾病模型提供实验依据。方法使用人源H5N1病毒液经气管插管滴入恒河猴上呼吸道进行感染,观察感染恒河猴的临床表现,每天采集咽拭子、鼻灌洗液,在感染前2d感染后第3、5、7天采血,感染后第3和7天分别解剖1只恒河猴,取支气管淋巴结、肠淋巴结、鼻甲、心、肝、脾、肺、肾、肠、气管、脑及血液进行病毒分离、核酸载量检测和血常规测定。结果感染后第2天恒河猴出现食欲下降,活动减少,并伴有一过性体温升高,白细胞数和淋巴细胞数下降。咽拭子、鼻灌洗液、肺、心、气管、脑、肝、肾、肠和血液中都能分离到H5N1病毒。结论气管插管法接种H5N1病毒能有效感染恒河猴,并在猴体内多组织中分离、检测到病毒,为制备完善的H5N1模型和检测指标确定、进一步研究H5N1病毒的致病机制等奠定了基础。     

SARS冠状病毒感染恒河猴的病毒、血清学检测研究

[目的]对感染SARS-CoV的恒河猴进行病毒、血清学等指标检测及研究,确定模型动物成功感染,并为SARS发病机制,疫苗评价,药物筛选确定参考指标。[方法]SARSCo-V经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定。[结果]用巢式RT-PCR在感染后每天提取的咽拭子标本中检测SARS-CoV的RNA,以细胞培养冠状病毒为阳性对照,以正常恒河猴咽拭子为阴性对照,在8只动物病毒接种第5天开始可检测到大小为797bp的目的条带,阳性检出最长可持续到第15天。进一步用病毒分离实验对PCR结果进行确证,8只动物中的5只恒河猴接种5天的咽拭子标本中,经Vero细胞培养,细胞产生了典型细胞病变(CPE),提示SARS冠状病毒能感染恒河猴并有病毒的复制和排毒。IFA方法证实为SRAS-CoV抗原存在。SARS-CoV感染恒河猴后,可以检测出免疫反应。在SARS冠状病毒接种前和接种后第5、8、11、15、19、23、26、30、34、每隔4-7天以及安乐死时采血,制备血清测定抗体,8只恒河猴接种病毒前均血清中SARS冠状病毒特异性抗体IgG为阴性,10天后安乐处死的5只感染猴在11-15天开始,至安乐死时,均为阳性。IgG阳性的5只恒河猴均有一定的中和抗体产生,且对SARS病毒感染细胞有一定的保护性。感染SARS病毒猴后与正常猴比较,其细胞杀伤效应明显增强。感染SARS-CoV的恒河猴不仅出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,也在一定时期内排毒,出现特异免疫反应,这些指标均可作为药物筛选、疫苗评价等方面的重要参数。     

实验猴主要细菌性感染疾病的病理特点分析

目的通过对实验猴细菌性感染疾病脏器病理改变的观察和分析,完善实验猴病理检测资料,为实验动物病理检测标准的制定提供依据。方法选取86例实验猴按5种必检细菌性感染疾病（沙门菌病;志贺菌病;结核杆菌病;小肠结肠炎耶尔森菌病;空肠弯曲菌病）病原种类分组,对脏器标本进行病理剖检,HE染色观察记录病变,建立实验猴必检细菌性疾病病理检测资料。结果病理检测结果显示：沙门菌病表现为伤寒肉芽肿,结核杆菌病表现为结核肉芽肿,小肠结肠炎耶尔森菌病表现为纵行溃疡、急性炎及化脓性肉芽肿;志贺菌病、空肠弯曲菌病表现为急性炎和表浅溃疡。结论感染5种必检细菌的实验猴分别表现出不同的病理变化,病理检测对疾病的分析诊断有重要价值,检测结果补充了实验猴细菌性疾病病理检测资料,为制定实验动物病理检测指南提供了相关依据。     

戊型肝炎病毒实验感染恒河猴的研究

报道了用戊型肝炎(Hepatitis E, HE)病人粪便悬液感染恒河猴后的组织病理学、血液生化与免疫学以及病毒学分子生物学检测的结果.三只实验猴在感染后第3～4周均出现ALT异常;粪便以及肝脏与胆囊组织超薄切片中电镜观察到27～34nm大小的病毒样颗粒;病理组织切片观察表明,肝脏组织有典型的急性炎症病灶;粪便与血清经RT-nPCR扩增到戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus, HEV)特异性片段,粪便排毒从感染后第7天持续至第50天左右,病毒血症迟于粪便排毒,出现于感染后两周左右,维持1～2周;ELISA检测发现,实验猴血清中HEV IgG抗体水平在感染后3～4周阳转,4～5个月后转阴.这些实验结果提示,恒河猴作为HEV感染实验动物模型是理想的,建立系统的恒河猴实验模型对探讨HEV感染发病机理、机体免疫应答以及临床诊断与疫苗研制具有重要意义.     

实验动物质量检测中不同采血方法的比较

在进行实验动物质量检测时,通常要采集血液样本进行微生物、寄生虫检测。动物实验结束后,也要采集血液、体液、脏器等进行评价分析。大、小鼠的采血方法有：尾尖采血、眼眶后静脉丛采血、眼球摘除采血、股动脉采血、心脏采血、断头采血等。     

食蟹猴肺上皮细胞株MFLE-001的建立及生物学特性研究

该研究建立了食蟹猴肺上皮细胞株并鉴定其生物学特性。以食蟹猴肺部组织进行原代培养,用差速贴壁法纯化细胞株,并通过倒置显微镜、透射电镜、扫描电镜观察,绘制生长曲线,进行核型分析以及肺上皮标志物检测等方法研究其生物学特性。结果显示,体外培养细胞生长均一、稳定,细胞倍增时间为4.8天,免疫组化CK(+)、CK-7(+)、波形蛋白(+),染色体分析表明,具有正常2倍染色体数目(2n=42),符合食蟹猴肺上皮细胞株特性。该研究成功建立第一株食蟹猴肺上皮细胞株,命名为MFLE-001,为肺部疾病研究和药物筛选提供了理想的体外实验模型。     

2003-2008年我国实验猴BV抗体检测结果及抗体水平变化规律的分析

目的对近年来我国实验猴BV（猴疱疹病毒Ⅰ型）抗体检测结果进行比较分析,以了解我国实验猴BV感染情况及其抗体水平变化规律,为我国实验猴质量控制及标准化提供依据。方法根据国标中ELISA方法 ,对2003～2008年我国11个单位送检的2个品种猴血清进行BV抗体检测,并对检测结果进行统计分析。结果检测的4612份猴血清中,有1843份BV抗体呈阳性,阳性率为39.96%;6年中检测猴群BV抗体阳性率基本在30%～50%。幼年（≤2岁）、青年（2.1～4.0岁）、成年（4.1～6.5岁）、老年（≥6.5岁）4个不同年龄段猴BV感染率分别为26.28%、31.53%、53.74%、87.27%。不同年龄感染率差异显著（P〈0.01）。雌猴BV感染率（35.91%）高于雄猴（34.93%）,但两者差异不显著（P〉0.05）。结论不同年龄猴BV感染率不同,随着年龄的增长BV感染率升高。     

恒河猴离乳幼猴B病毒动态监测

目的调查恒河猴离乳幼猴BV感染的动态变化,探讨早期控制的可能。方法采用BV全病毒为抗原的ELISA试剂盒,对两批离乳后群养的54只恒河猴幼猴每月采血检测BV感染情况,连续检测13个月。结果随月龄的增加,BV感染率上升,其中12月、1月、2月、3月、4月BV阳性猴数量相对增加较明显。结论幼猴性成熟期之前BV感染率超过70％且呈现出一定的变化规律,春、冬季BV的感染率相对较高,应早期加强BV的有效预防控制,降低BV的感染,提高猴群质量。     

戊型肝炎病毒实验感染恒河猴的研究

报道了用戊型肝炎（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＥ,ＨＥ）病人粪便悬液感染恒河猴后的组织病理学、血液生化与免疫学以及病毒学分子生物学检测的结果。三只实验猴在感染后第３～４周均出现ＡＬＴ异常;粪便以及肝脏与胆囊组织超薄切片中电镜观察到２７～３４ｎｍ大小的病毒样颗粒;病理组织切片观察表明,肝脏组织有典型的急性炎症病灶;粪便与血清经ＲＴｎＰＣＲ扩增到戊型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＥＶｉｒｕｓ,ＨＥＶ）特异性片段,粪便排毒从感染后第７天持续至第５０天左右,病毒血症迟于粪便排毒,出现于感染后两周左右,维持１～２周;ＥＬＩＳＡ检测发现,实验猴血清中ＨＥＶＩｇＧ抗体水平在感染后３～４周阳转,４～５个月后转阴。这些实验结果提示,恒河猴作为ＨＥＶ感染实验动物模型是理想的,建立系统的恒河猴实验模型对探讨ＨＥＶ感染发病机理、机体免疫应答以及临床诊断与疫苗研制具有重要意义。     

人工饲养条件下死亡实验恒河猴肠道病理改变特点分析

目的观察人工饲养条件下实验恒河猴肠道病理改变,探讨实验猴肠道疾病分布规律和病理改变特点,丰富实验猴自发病变基本研究资料。方法对1998-2008年云南地区饲养的自然死亡的155只恒河猴（年龄2-20岁）的肠道进行病理检查,按年龄分为幼年组、成年组、老年组,并对观察结果进行统计学分析。结果155例恒河猴中58例检出肠道病变,有慢性肠炎、急性肠炎、黏膜充血水肿、出血、糜烂、溃疡、穿孔、寄生虫共8种主要病变,出现率最高的为急性肠炎（20．00％）。实验猴不同年龄组肠道病变类型分布基本相同,肠道病变率随年龄增长而增高,不同年龄组间统计学分析差异无显著性。结论人工饲养条件下死亡实验猴肠道病变检出率较高,急性肠炎是实验猴的主要致死原因之一,实验猴肠道病理改变随年龄增长而病变加重。对实验猴饲养和研究时,应重视肠道病变因素,尤其是急性肠炎。死亡实验猴肠道病变研究对实验猴的质量控制和相关动物实验有重要指导价值。