香菇活性成分提取工艺研究及药理学研究进展

香菇是一种具有丰富的营养价值同时兼有良好的药用价值的真菌,可食药两用。追溯到我国古代,就已有相关记载提示其有增强脑细胞功能的作用:服食饵菌类可以"增智慧""益智开心"(《神农本草》)。香菇作为亚洲传统医药,含有多种活性成分,如香菇多糖、香菇嘌呤、香菇蛋白等。这使得其在医学领域得到越来越多的应用,尤其在抗肿瘤、调节免疫力、抗氧化、抗病毒及降血脂等方面都具有较好的治疗效果。本文就香菇主要活性成分的提取方法、化学结构及药理作用作一综述。     

基于Solexa高通量测序的香菇C_(91-3)功能基因的挖掘和开发

香菇是全球人工种植最为普遍的食用菌,近年来,国内外的研究者对香菇进行了深入的研究,发现香菇在预防、治疗恶性肿瘤方面都具有重要的药用价值。尤其是香菇多糖制剂现已正式作为辅助化疗药物应用于临床。但是对香菇中蛋白质生物学活性的研究以及从蛋白质水平去发掘其抗肿瘤活性的功能基因却鲜有报道。本文拟就香菇的基因组、转录组及功能基因挖掘和开发现状进行简要论述。     

香菇不同发育阶段子实体多糖的理化性质及体外免疫活性研究

香菇多糖是从香菇菌丝体或子实体中提取纯化得到的高分子葡聚糖,作为香菇主要的生物活性物质,具有提高免疫力、抗病毒、抗氧化和抗真菌等生物活性。本研究对幼菇期、菌褶期、采收期、成熟期和开伞期5个不同发育阶段香菇粗多糖含量、理化性质和体外免疫活性进行比较分析。结果表明,其粗多糖含量、理化性质和体外免疫活性具有明显差异。粗多糖得率呈现先增加后降低的趋势,菌褶期得率最高;粗多糖含量也呈现先增加后降低的趋势,成熟期含量最高;多糖的分子量因发育期不同而有较大差异,发育后期所得粗多糖分子量千万级以上组分的比例增加,分子量百万级和十万级的多糖组分比例降低;不同发育阶段香菇子实体多糖的单糖组成均包含果糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖4种单糖,且都以葡萄糖为主;5个阶段的多糖组分均有较好的体外免疫活性,其中幼菇期粗多糖在浓度500μg/mL时表现出最高的体外免疫活性。本研究探讨了香菇不同发育阶段子实体多糖的理化性质及体外免疫活性,为香菇采收期的确定及香菇多糖的制备与利用提供理论依据。     

香菇多糖的生物活性

香菇多糖 (ｌｅｎｔｉｎａｎ ,ＬＮＴ)是从伞菌科真菌香菇(ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ)的子实体中分离到的一种 β 1,3 葡聚糖 ,2 0世纪 6 0年代日本科学家首先证明其具有显著的免疫调节活性和抗肿瘤活性 ,经临床验证 ,已在国际市场上推广应用。1.香菇多糖免疫调节活性香菇多糖的免疫调节活性是其生物活性的重要基础。香菇多糖是典型的Ｔ细胞激活剂 ,体内外均能促进细胞毒Ｔ淋巴细胞 (ＣＴＬ)的产生 ,提高ＣＴＬ的杀伤活力 ,增强正常或免疫功能低下小鼠的迟发型超敏反应 (ＤＴＨ) ,提高抗体依赖性细胞毒细胞(ＡＤＤＣ)活性。香菇多糖在体…     

外源茉莉酸甲酯诱导对香菇多糖代谢及关键酶基因表达的影响

香菇多糖是重要的生物活性成分,其药用价值高,茉莉酸甲酯有助于提高食用菌多糖含量,但关于其对香菇多糖合成的影响尚不清楚。本研究以香菇新808为实验材料,对不同浓度茉莉酸甲酯（MeJA）诱导下香菇菌丝生物量和生长速率、香菇多糖代谢关键酶活性及基因相对表达量、香菇多糖含量进行比较分析。结果表明：10μmol/L的茉莉酸甲酯可显著促进香菇菌丝生长并提高菌丝体生物量,分别是对照的1.14倍、1.2倍;与香菇多糖代谢相关的UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UGPase）、葡萄糖磷酸异构酶（PGI）、α-葡萄糖磷酸变位酶（α-PGM）活性增加,为对照组的1.58、1.13、3.21倍;其基因相对表达量较对照组也显著上调,为对照组的5.73、1.4、1.77倍;香菇多糖合成量显著增加,为对照组1.58倍。10μmol/L的MeJA处理后,香菇多糖代谢关键酶活性及基因相对表达量与多糖含量间存在显著的正相关关系,表明添加适宜浓度的茉莉酸甲酯会影响香菇菌丝的生长及多糖合成。     

香菇基因组中L-半胱氨酸亚砜裂解酶同源蛋白的生物信息学分析

L-半胱氨酸亚砜裂解酶（L-cysteine sulfoxide lyase,C-S lyase）是香菇中含硫风味物质生物合成途径的关键酶之一。本文基于6个不同香菇菌株的全基因组测序数据,挖掘了24个潜在的香菇L-半胱氨酸亚砜裂解酶（Lentinula edodes C-S lyase,Lecsl）同源基因,对其编码蛋白的生理生化特性、信号肽、跨膜结构域、转录活性、分子进化、保守基序和蛋白三级结构等方面进行了分析。结果发现,这24个香菇Lecsl同源蛋白含有相同的蛋白结构域（IPR015424和IPR000192）,都属于L-半胱氨酸脱巯基酶家族（PTHR43092:SF2）,都不含信号肽和跨膜结构,但它们的蛋白稳定性有所不同。对24个Lecsl同源蛋白进行聚类分析发现,其中的11个组成了新的进化分支,这一分支的Lecsl同源蛋白在香菇的菌丝体或子实体中有转录活性,且含有蒜酶和L-半胱氨酸脱硫酶的保守基序19,推测这一分支的Lecsl同源蛋白在香菇中具有催化产生含硫风味物质和内源性甲醛的活性。进一步分析发现,这一分支又分为两个亚支,其中一支包含已发现的Lecsl/LE01_CSL1,并且在香菇的菌丝体和子实体阶段都有转录活性;另一个亚支上的C-S lyase同源蛋白仅在菌丝体中有转录活性,推测这两个亚支的L-半胱氨酸亚砜裂解酶分别在香菇生长发育的不同阶段发挥催化作用。通过三维结构的解析,阐明了Lecsl中保守基序19亦是使蒜酶产生催化活性的关键结构域,并且利用分子动力学模拟的方法,预测保守基序19中的Asn3、Gln5和Ser6是香菇C-S lyase产生催化活性的关键氨基酸残基。     

复合酶解法提取香菇多糖蛋白的研究

存在于香菇中的多糖物质,具有增强人体非特异性免疫功能的作用。本文报道采用复合酶解和热水浸提法分离纯化香菇中多糖蛋白的综合程序。与单纯热水浸提法等其它方法相比,本法能显著提高香菇有效成分的浸提效果,总氨基酸与必需氨基酸百分比含量均提高２倍以上,香菇多糖含量提高了４倍,一些特殊成分及较高分子量的葡聚糖物质含量也明显提高。     

硫酸化分级香菇多糖抗氧化活性研究

提取香菇子实体多糖,用浓硫酸法进行结构修饰,经不同分子量超滤膜超滤分离得到6种不同组份的硫酸化香菇多糖,检测这6种组份抗氧化活性。结果表明,硫酸化香菇多糖具有抗氧化活性,在1-10mg/mL的浓度范围内呈量效关系,且不同分子量组份活性有差异。     

玄参多糖成分抗疲劳活性的研究

研究了玄参（Scrophularia ningpoensis Hemsl．）多糖类成分对小鼠抗疲劳的药理作用。取雄性（♂）昆明种小鼠,体重22—27g,随机分为空白对照组、香菇多糖阳性对照组、玄参多糖（低、中、高）剂量3组,经灌胃分别给予小鼠生理盐水、香菇多糖及玄参多糖类成分100、200、400mg·kg^-1·d^-1,连续灌胃21d。分别观察小鼠的体重变化情况,负重游泳力竭时间,血清尿素氮、肝糖原和血乳酸的含量。结果表明,玄参多糖类成分可降低运动后小鼠血清尿素氮、血乳酸含量,增加小鼠肝糖原含量,具有抗疲劳的活性作用。     

复合酶解法提取香菇多糖蛋白的研究

存在于香菇中的多糖物质,具有增强人体非特异性免疫功能的作用。本文报道采用复合酶解和热水浸提法分离纯化香菇中多糖蛋白的综合程序。与单纯热水浸提法等其它方法相比,本法能显著提高香菇有效成分的浸提效果,总氨基酸与必需氨基酸百分比含量均提高２倍以上,香菇多糖含量提高了４倍,一些特殊成分及较高分子量的葡聚糖物质含量也明显提高。     

海藻糖对香菇多糖代谢及关键酶基因表达的影响

香菇多糖是从香菇中纯化提取出来,具有药用价值的一种高分子葡聚糖。本研究以香菇新808为研究对象,探究不同浓度外源海藻糖处理下的香菇菌丝生长速率、生物量、多糖含量、菌丝胞内外酶的活性及多糖合成关键酶基因表达量的差异。本研究发现在2.5mg/mL浓度海藻糖处理下,香菇菌丝生物量和多糖含量相较于对照组显著提高,菌丝生长速率与对照组间没有显著差异;参与调控菌丝多糖合成的胞外酶(木质素过氧化物酶、漆酶、纤维素酶、锰过氧化物酶和半纤维素酶)及胞内酶(葡萄糖激酶、磷酸葡萄糖变位酶、磷酸葡萄糖异构酶)的活性与对照相比均显著升高;多糖合成关键酶基因LENED＿003770、 LENED＿004424、 LENED＿005589、 LENED＿010922和LENED＿012941的表达量相对于对照组均显著上调,而LENED＿009143基因表达量则明显下调。表明适宜浓度的外源海藻糖能有效提高香菇菌丝多糖合成量,有利于香菇多糖合成积累。     

蘑菇凝集素及其研究进展

凝集素是非酶、非抗体,可凝集细胞的蛋白质或糖蛋白。作为药用真菌重要的药理成分,蘑菇凝集素已成为继研究蘑菇多糖之外的另一活性物质。基于其众多生物学性质,其研究越来越深入,在生命科学各个研究领域中用途也越来越广。就蘑菇凝集素的分布、结构、性质、作用与功能、提取方法和应用作简要综述。主要涵盖凝集性质及其影响因子、抑制肿瘤及抗癌抗增生活性、促有丝分裂活性及免疫调节活性、毒性作用、抗植物病毒及杀虫剂活性、促菌丝分化及识别活性等。     

海金沙的化学成分和药理活性研究进展

海金沙是海金沙科海金沙属多年生蕨类植物,在我国广东、海南、江苏、浙江等地广泛分布。海金沙含有黄酮类化合物、酚酸及其糖苷类化合物及三萜类化合物等多种生物活性成分,具有利胆、防治结石、抗氧化、抗茵等多种药理活性。对海金沙的化学成分和药理活性做了综述,以便更好地对其进行开发利用。     

基于转录组分析香菇不同漆酶活性单核菌丝体基因表达

漆酶是香菇生长发育过程中一种重要的木质素降解酶,其活性高低对于香菇木质素降解能力和香菇品质形成具有重要作用。为探讨香菇不同漆酶活性的单核菌丝体基因表达变化,对漆酶活性存在差异的单核菌丝体进行转录组测序分析,共获得15 522个注释基因。GO（gene ontology）分析表明差异基因在氧化还原酶活性节点大量富集,包括参与木质素降解的酶类及55个细胞色素P450基因;KEGG（Kyoto encyclopedia of genes and genomes）分析发现淀粉和蔗糖代谢、戊糖和葡萄糖醛酸相互转化途径中糖苷水解酶、UDPG脱氢酶等基因上调表达。通过搜索转录因子数据筛选到172个差异表达的转录因子,预测了可能与漆酶结合的bZIP、C₂H₂、C₄转录因子家族。由此推测,在漆酶高产单核菌株中木质素降解和碳水化合物代谢的相关基因的表达发生变化,及糖醛酸和磷酸戊糖途径相关基因上调表达,促进了木质素降解产物高效转化成糖、核酸等生物大分子,有助于香菇菌丝体的生长,转录因子在漆酶活性调控中起了重要作用。本研究为深入理解香菇漆酶高产菌株的生理代谢机制提供了重要的基因数据资源。     

香菇C91-3转录本Unigene1245基因的克隆表达 及其抗肿瘤活性研究

摘要：目的克隆香菇C91-3转录本中Unigene1245基因并进行生物信息学分析,研究其编码蛋白的抗肿瘤活性。方法提取香菇C91-3菌丝体总RNA,反转录合成cDNA,经RACE技术获得Unigene1245基因编码序列,通过NCBI对其进行生物信息学分析。设计特异性引物进行PCR扩增,将其克隆到载体pET-32a(+)上,将重组表达质粒热转化至E.coli Rosetta-gami(DE3)中,进行目的蛋白的诱导表达、纯化及复性,通过CCK-8法检测其抗肿瘤活性。结果香菇C91-3转录本Unigene1245基因为YjgF/YER057c/UK114家族成员,成功诱导表达其编码蛋白,CCK-8法结果显示该蛋白对人肝癌HepG2细胞的增殖具有一定抑制作用,且具有一定的时间及浓度依赖性。结论成功克隆并诱导表达Unigene1245基因,并鉴定其具有抑制HepG2细胞增殖的能力,为后续探究抗肿瘤机制奠定了基础。     

古尼拟青霉表型多样性及其与活性成分的关系

目的研究表型多样性与活性成分之间的联系。方法研究10株古尼拟青霉菌株的培养特性,观察菌落形态,测定其产孢量和粗蛋白、多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷等主要活性成分含量。结果A类菌株菌落背面褶皱不平,中央为棕色环状,周边为淡黄色,是生长性状优良、活性成分含量高,适于大规模工业化生产的优质菌株。结论不同菌株具有不同的形态特征,且形态特征与其产孢量及主要活性成分存在一定内在联系。     

高乌甲素药理活性的研究进展

高乌甲素是从毛茛科植物高乌头中提取的一种二萜类生物碱,是高乌头的主要药理活性成分之一。高乌甲素作为国内首创的非成瘾性药物,具有镇痛活性好、维持时间久、不良反应少的优势,临床上广泛应用于术后痛和癌症痛等轻中度疼痛的治疗。除此以外,高乌甲素的抗心律失常、抗炎、抗肿瘤及抗癫痫等药理活性也有相关研究。该文就高乌甲素药理活性及机制研究的进展予以综述。     

耐高温香菇新品种的选育

正香菇(Lentinula edodes)是产于北半球温带与亚热带地区的一种腐生真菌,不仅营养丰富,而且具有较高的保健价值,自古以来深受人们的喜爱[1]。但香菇属中低温型变温结实性菇类,在福建、浙江等香菇主产区,因夏季温度较高,能够高温出菇的香菇品种少,导致夏季鲜香菇供应不足。目前可用于夏季香菇栽培的方法主要有两种:一是在海拔500 m以上的高山上栽培;二是利用林下或山沟出菇、覆土栽培出菇等。但这两种栽培方法也有其局限性。因此,要从根本上解决香菇高温栽培的问     

烟草中主要生物活性成分的研究进展

烟草是我国一种特殊的经济作物,也是一味历史悠久的传统中药。烟草化学成分多种多样,其中许多都是具有一定应用价值的生物活性物质。本文根据国内外相关研究资料,总结了烟草中具有的主要活性成分,包括生物碱、萜类、挥发油、酚类、活性多糖等物质,并对其主要活性、用途及利用情况进行了综述和讨论。     

香菇C_(91-3)转录本Unigene14872基因Pkinase结构域的克隆表达及其生物信息学分析

旨在克隆香菇C91-3转录本Unigene 14872基因中的Pkinase结构域,并对其进行生物信息学分析。提取香菇C91-3菌丝体中总RNA,根据转录组测序结果,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得Unigene 14872基因全长。用NCBI对其进行生物信息学分析,预测其具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Pkinase)结构域。设计引物PCR扩增Pkinase结构域,然后克隆至pET32a(+)载体,再热转化至JM109中保存并进行质粒测序。重组质粒pET32a(+)-Pkinase构建成功,并成功诱导表达重组蛋白,初步鉴定该蛋白具有抗肿瘤活性,为进一步研究重组蛋白的活性及作用机制奠定基础。