10株水痘带状疱疹病毒的分离鉴定与生物学特性

用ＶｅｒｏＥ６细胞从１２例水痘及带状疱疹病人水疱液中分离到１０株病毒,分离阳性率为８３．３％。１０株病毒均具有使感染细胞圆缩、融合、脱落等典型的ＶＺＶ局灶性细胞病变（ＣＰＥ）特点,ＣＰＥ随着传代次数增加而加快。用带状疱疹恢复期病人血清作间接免疫荧光染色镜检,可见典型的感染细胞核内荧光块。１０株病毒感染细胞制成的抗原片,检测５例带状疱疹病人急性期及恢复期血清,荧光抗体滴度均有４倍以上增高。ＶＺＶ对Ｖｅｒｏ细胞敏感;对沙鼠肾,胎兔肾,胎豚鼠肾、肺、脾原代单层细胞不敏感;对乳小白鼠不敏感。毒种在－２０℃保存一周内死亡;但在３０％脱脂牛奶、２０％小牛血清及１０％山梨醇Ｅａｇｌｅ’ｓ液中,液体或真空冷冻干燥－１００℃可保存二年以上。     

10株水痘带状疱疹病毒的分离鉴定与生物学特性

用Vero-E6细胞从12例水痘及带状疱疹病人水疱液中分离到10株病毒,分离阳性率为83.3%.10株病毒均具有使感染细胞圆缩、融合、脱落等典型的VZV局灶性细胞病变(CPE)特点,CPE随着传代次数增加而加快.用带状疱疹恢复期病人血清作间接免疫荧光染色镜检,可见典型的感染细胞核内荧光块.10株病毒感染细胞制成的抗原片,检测5例带状疱疹病人急性期及恢复期血清,荧光抗体滴度均有4倍以上增高.VZV对Vero细胞敏感;对沙鼠肾,胎兔肾,胎豚鼠肾、肺、脾原代单层细胞不敏感;对乳小白鼠不敏感.毒种在-20℃保存一周内死亡;但在30%脱脂牛奶、20%小牛血清及10%山梨醇Eagle's液中,液体或真空冷冻干燥-100℃可保存二年以上.     

水痘-带状疱疹病毒疫苗的评价与研究进展

水痘-带状疱疹病毒(VZV)属疱疹病毒α亚科,即人类疱疹病毒3型,为双链DNA病毒。原发感染可引起具有高度传染性的全球流行性疾病——水痘;潜伏病毒的再激活感染可引发典型的疼痛性皮肤病——带状疱疹及不典型的内脏器官感染。日本和美国分别自1987年和1995年开始实行给全体儿童预防接种水痘减毒活疫苗(vOka)后,两国儿童的水痘发病率和病死率显著降低。但VZV疫苗的不良反应,包括二次传播和突破感染等时有发生,因此有必要研发更为有效、安全的新型疫苗。本文就VZV相关疫苗的有效性、安全性及其新型疫苗的研究进展进行综述。     

疫苗株病毒引起1例成人水痘的病原分离与鉴定

本文旨在探讨1例由疫苗株病毒引起成人水痘的病例,以提高对水痘疫苗二次传播的认识。从1名23岁女性水痘患者皮肤水疱中采集水疱液,接种至人胚胎成纤维细胞,3d后观察到细胞发生病变效应。用水痘-带状疱疹病毒gE`糖蛋白单克隆抗体间接免疫荧光法鉴定,结果阳性。测序分析显示,分离到的毒株其疫苗相关的单核苷酸多态性位点与Oka疫苗株一致,为疫苗株病毒。回顾性调查显示,患者没有水痘史和疫苗接种史,病毒可能来自1名与患者直接接触的接种疫苗后发生带状疱疹的儿童。     

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白N的单克隆抗体制备及初步研究

水痘-带状疱疹病毒(VZV)是水痘和带状疱疹的共同致病原,其糖蛋白N(gN)在子代病毒的组装、成熟和出胞过程中发挥重要作用。但是目前关于VZV gN的研究还很少,其蛋白性质和具体分子功能仍不清楚。本研究目的是制备抗VZV gN的单克隆抗体,对该蛋白在VZV感染细胞和人皮肤组织内的表达和分布情况进行初步探究。本研究选择抗原性和亲水性较强的gN区段基因,构建rGST-gN融合蛋白的原核表达质粒,将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌后用IPTG诱导融合蛋白表达,经亲和层析柱纯化rGST-gN融合蛋白后使用PSP酶切除GST标签,将获得的重组蛋白rgN免疫BALB/c小鼠,使用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;共获得24株稳定分泌抗VZV gN单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株性能最优的12E10进行单克隆抗体生产纯化和抗体鉴定;单克隆抗体12E10为IgG2a亚型,其ELISA效价达到1∶10 000;通过Western blot、免疫荧光及免疫组织化学染色方法鉴定,该抗体能够特异性识别细胞和组织中表达的VZV gN;本研究应用该抗体首次确定了gN在VZV感染细胞中的反式高尔基体定位,并且确定了gN在VZV感染人皮肤组织中的表达。以上工作为今后深入研究VZV gN功能奠定了基础。     

水痘-带状疱疹病毒对系统性红斑狼疮患者体液免疫功能的影响

目的:观察水痘患者、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者和系统性红斑狼疮合并水痘患者体液免疫指标的变化,探讨水痘-带状疱疹病毒对系统性红斑狼疮患者体液免疫功能的影响。方法:选择在我院诊断治疗的水痘患者、系统性红斑狼疮患者和系统性红斑狼疮合并水痘患者共66例,同时设21例正常对照组;利用血液细胞分析仪检测各组血液中白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)以及血红蛋白含量(HGB);采用免疫比浊法检测各组血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)以及补体C3、C4的水平。结果:与正常对照组比较,水痘组、SLE组以及SLE合并水痘组WBC、PLT和HGB含量下降,其中SLE组和SLE合并水痘组WBC、PLT降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);水痘组血清中IgG、IgA和IgM含量下降,SLE组和SLE合并水痘组血清中IgG、IgA和IgM含量上升,其中水痘组血清中IgA含量减少有统计学意义(P<0.05),SLE组和SLE合并水痘组血清中IgG、IgA含量增加有统计学意义(P<0.05或P<0.01);水痘组血清中补体C3、C4含量增加,SLE组和SLE合并水痘组血清中补体C3、C4含量减少,其中SLE合并水痘组减少且差异有统计学意义(P<0.05)。与SLE组比较,SLE合并水痘组WBC明显增加(P<0.05),血清中IgG、IgA和补体C3、C4降低且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:水痘-带状疱疹病毒可引起系统性红斑狼疮患者免疫系统相关指标的改变并对其产生影响。     

7例水痘患者水痘带状疱疹病毒的分离与鉴定分析

目的对7例临床水痘患者的疱疹液样本,进行水痘带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)的分离及鉴定分析。方法对7例临床水痘患者的疱疹液,用2BS细胞进行病毒分离及病毒滴度检测;用特异性引物分别对病毒分离株及疫苗株(Oka株)的ORF68、ORF54、ORF38进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增及测序,用DNAMAN软件对病毒分离株的ORF68序列与Dumas株序列进行比对鉴定,并对病毒分离株和Oka株的ORF54、ORF38进行限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析。结果从7例临床水痘患者的疱疹液样本中,分离到4株VZV病毒株;病毒分离株的细胞病变(cytopathic effect,CPE)及病毒滴度随传代次数的增加而增强;4株病毒分离株的ORF68序列与Dumas株完全一致;ORF54、ORF38的RFLP结果显示,4株病毒分离株均为BglⅠ+PstⅠ+型,Oka株为BglⅠ+PstⅠ-型。结论成功分离的4株病毒分离株均为VZV野生毒株。     

水痘—带状疱疹病毒分离株核衣壳的形态特征

本文用超萍切片电镜技术对水痘－带状疱疹病毒（VZV）分离株J1的核衣壳进行了形态学研究。结果表明,在病毒感染后5小时即可观察到细胞核内大量的病毒核心相关颗粒和少量核衣壳。在细胞核内和细胞浆内均可见到病毒基质或毒浆结构。VZVJ1株具有三种类型的核衣壳,命名为A型、B型、C型核衣壳。A型具有电子致密核心,B型的核心呈颗粒状,C型具有电子透明核心。三种核衣壳大小一致,直径75－100nm,核心为35－55nm。将VZV的核衣壳与疱疹病毒科其它成员作了比较分析,并对各种核衣壳在病毒成熟过程中的作用进行了探讨。     

水痘-带状疱疹病毒潜伏感染的研究现状

水痘-带状疱疹病毒潜伏感染后的再活化可引起带状疱疹,其潜伏感染与再活化的机制还不完全清楚。本文综述了该病毒潜伏感染和再活化的实验模型新进展,并概述了从这些实验模型中所获得的最新知识。     

从一名国内感染的艾滋病人分离人免疫缺陷病毒（HIV）

从一名国内感染的艾滋病人采血,分离其外周血单核细胞（ＰＭＣｓ）。首先与正常的ＰＭＣｓ共培养,４周后检测其ＨＩＶ－１ｐ２４抗原（ＥＬＩＳＡ）达到峰值。用此时的细胞及其上清分别感染Ｊｕｒｋａｔ－ｔａｔ、ＣＥＭ、ＭＴ４细胞,可很快地在这三株细胞中检测到ＨＩＶ生长,ＨＩＶ在Ｊｕｒｋａｔ－ｔａｔ细胞中生长情况最好,同时用病人血清直接感染Ｊｕｒｋａｔ－ｔａｔ和ＭＴ４细胞,４周后检测其细胞上清ＨＩＶ－１ｐ２４抗原（ＥＬＩＳＡ法）为阳性,但ＯＤ值很低（约为ＰＭＣ共培养组的一半）。用病人的少量全血与正常ＰＭＣｓ共培养,得到的结果与分离病人ＰＭＣｓ法相近。应用间接免疫荧光法（ＩＦＡ）、免疫酶法（ＩＥＡ）、蛋白印迹法及ＨＩＶ－１ＰＯｌ基因和Ｅｎｖ基因特异引物的聚合酶链反应（ＰＣＲ）等证实为ＨＩＶ－１病毒。分离的ＨＩＶ在Ｊｕｒｋａｔ－ｔａｔ细胞中连续传代,细胞被感染后２－３天即出现以大量融合细胞为主的细胞病变,感染后７－１０天细胞几乎全部死亡。病毒在连续传代过程中的生长特征及致细胞病变特征不变。此病毒命名为ＣＡ－２毒株。     

利用大肠杆菌质粒检测与分离痘苗病毒的启动子

本文发现,痘苗病毒DNA一些巳知的启动子序列和一些功能尚不清楚的DNA片段,可以在大肠杆菌中起始氯霉素乙酰基转移酶(Chloramphenicol Acetyltrsnsferase,简称CAT)基因的转录和表达,使转化细菌呈现氯霉素抗性表型,这一结果证明,痘苗病毒的启动子可以被大肠杆菌的RNA多聚酶所识别并有效工作。同时发现不同启动子具有不同的强度,利用大肠杆菌质粒分离和检测痘苗病毒的启动子序列,不仅可以研究痘苗病毒基因组的表达调节特点,而且也为组建痘苗病毒表达载体提供了一个快速、简便可靠的方法。     

马立克氏病病毒Rispens株B抗原基因的克隆及其重组鸡痘病毒的构建

马立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＭＤＶ）是马立克氏病（ＭＤ）的病原,是第一个能用实验证明具有致肿瘤作用的疱疹病毒,也是研究病毒性肿瘤特别是疱疹病毒肿瘤的理想的实验模型。ＭＤ还是第一个广泛使用疫苗预防的肿瘤性病毒病。应用免疫扩散...     

侵染莜麦的大麦黄矮病毒的分离及提纯

用液氮或低温冷冻染病组织及差速离心和葡聚糖凝胶过滤的方法,提纯了自然侵染莜麦的大麦黄矮病毒(BYDV)。电镜照片中病毒呈多面体结构,大小均一,平均直径为23.66±1.2nm,且聚集较多。将提纯的病毒以三种无毒蚜为介体,经薄膜饲毒法回接到华北二号莜麦上,表明提纯的病毒能引起类似田间病株的症状。     

猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定

本文调查了猫科动物一种以倦怠、厌食、呕吐、下痢、血便、体温升高和白细胞数减少为特征的烈性传染病的发病规律和流行情况。利用猫肾细胞培养,从自然病例中分离出我国第一株猫泛白细胞减少症病毒——FNF8毒株。从而证实了我国有猫泛白细胞减少症的存在。