猪卵母细胞玻璃化冷冻后细胞骨架的变化

为研究玻璃化冷冻后猪卵母细胞纺锤体、染色体和微丝的变化,从屠宰猪卵巢表面直径2—5mm卵泡中采集未成熟(GV)期卵母细胞,由GV期卵母细胞经成熟培养获得体外成熟(MⅡ)期卵母细胞。GV期和MⅡ期卵母细胞各分为3组对照组、冷冻保护剂处理组和玻璃化冷冻组。MⅡ期卵母细胞经分组处理后直接用于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察样本;而GV期卵母细胞处理后先经44h成熟培养,再用作LSCM观察样本。供试卵母细胞经固定、免疫荧光染色后,于LSCM下观察。结果表明,冷冻保护剂处理组GV期卵母细胞经成熟培养后,其纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为42.9%、89.6%和28.6%;玻璃化冷冻组此3项指标的正常率分别为10.1%、36.4%和16.9%,两组间差异显著(P<0.05);除冷冻保护剂处理组染色体正常率与对照组无较大差异外,两试验组的其他指标均明显低于对照组(分别为79.5%、93.1%和72.3%,P<0.05)。MⅡ期卵母细胞冷冻保护剂处理组的纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为34.4%、61.3%和47.9%,而冷冻组分别为12.9%、56.7%和37.2%,两组均显著低于对照组(分别为78.3%、90.1%和72.8%,P<0.05)。结果表明,猪GV期和MⅡ期卵母细胞经冷冻保护剂处理或玻璃化冷冻保存后,均造成了纺锤体、染色体和微丝不可逆的损伤,这可能是影响卵母细胞成熟、受精与发育的重要原因。     

猪卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展

配子冷冻保存技术在动物繁殖育种中具有重要的意义,但猪卵母细胞的冷冻保存目前还很困难,主要表现为冻后继续发育能力低。这与影响卵母细胞玻璃化冷冻效果因素众多有关,如脂滴的存在使猪卵母细胞对冷冻非常敏感。冷冻保护剂的使用同时也产生了毒性作用。针对猪卵母细胞冷冻保存的特点,研究人员已研究出了一些新的方法来提高冷冻效果,如细胞骨架稳定剂的使用减少了冷冻对猪卵母细胞造成的损伤,通过改进冷冻载体提高了冷冻速率,从而提高了冷冻效果。     

玻璃化冷冻对猪体外成熟卵母细胞染色体与纺锤体的影响

以冷冻环为载体,探讨玻璃化冷冻对猪体外成熟卵母细胞染色体与纺锤体影响。单用40%乙二醇(ethyleneglycol,EG)或20%EG与20%二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)联合作冷冻保护剂,用直投液氮或使用玻璃化冷冻仪法制冷冷冻猪体外成熟卵母细胞;解冻2h后固定并免疫荧光法染色纺锤体及染色体;挑选各试验组形态正常卵母细胞进行体外受精实验。结果表明,与单用EG以及EG和DMSO联合直投液氮方案比较,EG和DMSO联合应用并采用玻璃化冷冻仪制冷方案卵母细胞染色体正常率为30.1%,纺锤体正常率为37.2%,可明显降低卵母细胞染色体及纺锤体结构损伤(P<0.05),并明显提高卵母细胞的激活效果(P<0.05)。采用联合冷冻保护剂及玻璃化冷冻仪高速冷冻可较好维持猪卵母细胞染色体与纺锤体形态,但玻璃化冷冻明显影响猪卵母细胞体外受精后的发育能力。     

猪科的系统发育与系统地理分化

猪科动物是最为昌盛的哺乳动物之一，但它们的分类及系统发育关系却尚待解决。为此， 用PCR直接测序法测定了一个红河猪(Potamochoerus porcus)、一个马来西亚野猪(Sus barbatus)以及数头欧亚野猪(Sus scorfa)线粒体细胞色素b全序列1 140 bp。结合从GenBank中获得的其他猪科物种胞色素b序列，用邻接法和最大简约法构建了猪科物种的系统发育关系，其结果显示苏拉威西鹿猪与其他猪科物种为姐妹群的关系。非洲物种疣猪和河猪聚为一枝，而欧亚猪属物种聚为另一支。各物种在系统发育关系中的位置与它们的地理分布对应。猪属物种可以被划分为3个种组：分布于菲律宾群岛、苏拉威西岛及其邻近岛屿的猪属物种形成一个种组，包括苏拉威西岛疣猪、菲律宾疣猪和印度尼西亚疣猪；欧亚野猪种组，包括欧亚野猪和姬猪；须猪和爪哇疣猪形成一个种组。     

体外培养小鼠卵母细胞及其生长分化因子-9基因表达

体外培养小鼠的窦前卵泡以得到第二次减数分裂中期(MⅡ)卵母细胞，比较体外发育卵母细胞与体内生长的卵母细胞生长分化因子-9(GDF-9)的基因表达量，探讨GDF-9的表达对卵母细胞体外发育成熟的影响。选择体外培养第2天(D2)、D4、D6、D8、D10、D12卵母细胞作为体外发育组；同窝雌性小鼠出生后D12、D14、D16、D18、D20、D22卵母细胞作为体内发育组；半定量逆转录多聚酶链反应技术分别检测两组MⅠ卵母细胞GDF-9基因表达量。结果体外培养小鼠窦前卵泡可以得到MⅡ期卵母细胞，卵泡成活率、窦腔形成率、卵母细胞成熟率分别达到89.5%、51.8%和56.6%。小鼠卵母细胞GDF-9基因表达量随发育时间的改变而发生变化，而体外发育D8—12卵母细胞GDF-9表达量显著低于同期体内发育卵母细胞(P<0.05)。体外发育D8—12卵母细胞GDF-9基因表达量低于同期体内发育的卵母细胞的原因之一可能是其发育潜能较低。     

“两步法”体外培养山羊卵母细胞的超微结构观察

有假说认为,卵母细胞在体外培养过程中,如果延长GV期,可促进卵母细胞进一步成熟,因而提高发育潜能。采用山羊半卵泡和卵母细胞共培养,抑制卵母细胞GVBD发生,从而延长GV期。比较了共培养前后和恢复成熟培养后卵母细胞的超微结构变化,其目的从亚细胞水平寻找卵母细胞进一步成熟的证据。研究发现,常规成熟培养：有卵周隙存在,但不贯通,局部区域卵膜与透明带结合紧密;部分皮质区尚有细胞器存在;微绒毛大部分从透明带中撤出,倒伏于质膜表面,数量较多,形态较为粗大;皮层颗粒质膜下部分单层分布,部分散布于皮质区;线粒体均匀散布于卵质中央区。共培养前：卵母细胞的卵周隙尚未形成,微绒毛没有从透明带中撤出;线粒体等细胞器分布于皮质区,皮层颗粒成簇状分布,皮质区富含细胞器。共培养后：局部形成卵周隙,微绒毛已自透明带中撤出,数量较多,垂直或倒伏于卵膜表面;线粒体以簇状分批开始内移,皮层颗粒已部分单层分布于质膜下,部分皮质区缺乏细胞器。恢复成熟培养后：卵周隙进一步扩大并且贯通,微绒毛数量减少并且绝大多数垂直于卵膜;线粒体在卵质中央区均匀分布,皮层颗粒卵膜下单层分布,大部分皮质区无细胞器存在。利用“两步法”培养得到的卵母细胞与体外常规成熟培养的卵母细胞相比,更有利于皮层颗粒的质膜下单层分布,卵母细胞卵周隙的形成与贯通,微绒毛数量减少和垂直于卵膜表面,无细胞器皮层区的进一步形成。因此,更有利于卵母细胞胞质的进一步成熟。     

一种安全有效的卵母细胞封闭式玻璃化冷冻载体

目的探讨封闭式玻璃化冷冻载体冻存小鼠卵母细胞的可行性。方法以小鼠MII期卵母细胞为模型,以开放式玻璃微细管法（GMP）为对照组,比较两种玻璃化冷冻载体对小鼠卵母细胞冷冻后的存活率、受精率、卵裂率及囊胚率的影响。结果卵母细胞经冻融后,封闭式冷冻载体组和GMP组的存活率、受精率、卵裂率和囊胚率均没有明显差异（92.80%vs93.11%,49.80%vs51.67%,36.73%vs35.83%,12.65%vs14.17%%;P〉0.05）。结论封闭式冷冻载体能安全、有效的冷冻保存小鼠卵母细胞。     

中国灵长类文献纵览

把1870—2001年来自美国“现代灵长类文献题录数据库”、“维普中文数据库”及“中国灵长类研究文献题录”的资料按4个时期（I：1870—1949；II：1950—1965；III：1966—1977；IV：1978—2001）分类整理。此外，使用了“科学引文数据库（扩展版）”。结果如下：（1）1870—2001年共有2 052篇文献，2个文献数量高峰分别出现于1950—1965和1978—2001年；科研部门所发表的论文占54.2%，并随时间而增加；而国外部门则随之减少。（2）2 052篇文献中，超过9%的文献为SCI所收录，其中1966—1977年被SCI收录的文献百分比最高；在全部被SCI收录的文献中又以科研部门的占优势（59.1%）；但国外部门则以其30.1%的文献被SCI收录而领先。（3）统计了灵长类研究9个领域文献百分比及其变化，其中1978—2001间生态学和行为、神经生物学、繁殖和饲养快速发展；化石灵长类、形态学和解剖学减少；分类及分布、细胞及分子进化显得不甚突出；在第II时期和第 IV时期疾病防治研究相当多；保护生物学得到越来越多的关注。第IV时期作者数量最多，但每个作者的文献平均数却不如第I时期。一般地说，在SCI收录的作者中以中国作者居多，但在第I时期唯一被SCI收录的作者则是一名外国学者；在第III时期外国作者占被收录作者数的60%。     

三疣梭子蟹的第二次卵巢发育规律

2005年3—5月，在室内养殖条件下对第二次卵巢发育的三疣梭子蟹进行连续采样，系统研究了其第二次卵巢发育期间的卵巢指数（GSI）、肝胰腺指数（HSI）、卵巢外部特征、卵巢发育分期及其组织学变化。结果表明：① 三疣梭子蟹第二次卵巢发育过程可以分为4期,Ⅰ期卵巢为乳白色或者淡黄色细带状,卵巢中主要为卵黄合成期的卵母细胞和内源性卵黄合成前卵母细胞；Ⅱ期为淡黄色或橘黄色，主要为外源性卵黄合成期的卵母细胞；Ⅲ期卵巢为橘红色，主要为外源性卵黄合成期的卵母细胞和近成熟期的卵母细胞；Ⅳ期卵巢发育基本成熟，肉眼可见卵粒，主要为成熟期的卵母细胞；② 三疣梭子蟹第二次卵巢发育期间，GSI显著增加，HSI变化不显著，GSI和发育天数呈显著正相关性，HSI和GSI的变化没有显著的相关性。     

广州地区犬蝠的食性

2004年5月—2006年4月采用拾遗法、粪便内容物分析法及实地观察对广州地区常见的食果蝙蝠¬—犬蝠(Cynopterus sphinx)进行了食性研究。对26份食物残留物和粪便样品的分析结果表明：犬蝠的食物包含13科21种的植物果实,3科3种的植物叶片,如：蒲桃（Syzygium jambos）、蒲葵（Livistona subglobosa）及龙眼（Dimocarous longan）的果实。其食性随果实的成熟季节而出现明显的季节性变化,夏秋两季大量食用各种水果,而在食物欠缺的春冬两季则主要食用棕榈科蒲葵的种子。广州地区犬蝠的繁殖期在每年的5—10月。     

鱼类特异的基因组复制

辐鳍鱼类是脊椎动物中种类最多、分布最广的类群，其基因组大小不等。过去的观点认为，在脊椎动物进化历程中曾发生了两次基因组复制。近期的系统基因组学研究资料进一步提出，在大约350百万年，辐鳍鱼还发生了第三次基因组复制，即鱼类特异的基因组复制(fishspecific genome duplication，FSGD)，且发生的时间正处在“物种极度丰富”的硬骨鱼谱系(真骨总目)和“物种贫乏”的谱系(辐鳍鱼纲基部的类群)出现分歧的时间点，表明FSGD与硬骨鱼物种和生物多样性的增加有关。进一步开展鱼类比较基因组学和功能基因组学研究将进一步验证FSGD这一假说。     

不同防冻剂对兔胚胎干细胞慢速冷冻保存的影响

干细胞冷冻保存是干细胞研究和临床应用中的必需技术。为提高兔胚胎干细胞在慢速冻存过程中的保存效果，比较了二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(ethylene glycol，EG)对兔胚胎干细胞冷冻保护效果。对冷冻复苏后的细胞进行台盼蓝染色，并研究其胚胎干细胞分子特性，结果表明DMSO比EG具有更好的冷冻保护效果。再在以10% DMSO为基础的防冻液中添加膜稳定剂海藻糖(trehalose)或谷氨酰胺(glutamine)，细胞冷冻复苏后结果显示，谷氨酰胺对兔胚胎干细胞有明显的冷冻保护作用，使细胞存活率从71%提高到83.7%。当谷氨酰胺浓度为0、5、10、20、40 mmol/L分别加入防冻液中后，20 mmol/L的谷氨酰胺具有最佳的冷冻保护效果。以上结果得出兔胚胎干细胞慢速冷冻的防冻液改进配方为：在胚胎干细胞培养液中添加10% DMSO＋20 mmol/L谷氨酰胺。     

贺兰山马鹿冬季食性分析

2003年11月—2004年2月在宁夏贺兰山国家级自然保护区和内蒙古贺兰山国家级自然保护区，利用粪便显微组织学分析技术结合野外啃食调查对马鹿阿拉善亚种（Cervus elaphus alxaicus）冬季食性进行了研究。从7个沟系中一共收集了219堆马鹿粪便中捡拾粪粒，组成14个复合样本进行分析，其结果表明，灰榆（27.37%）、山杨（11.75%）、蒙古扁桃（9.83%）、金露梅（8.12%）、锦鸡儿（6.52%）等植物的当年枝和落叶以及禾本科草本植物（7.51%）是马鹿冬季主要食物，其中灰榆为大宗食物，针叶树种（杜松、油松、青海云杉）和其他草本植物所占比例均较小。马鹿对灰榆、山杨、蒙古扁桃、金露梅、锦鸡儿和杜松有正选择性；而对禾本科草本植物、油松和青海云杉有负选择性。马鹿对它们选择性的强弱顺序为：山杨＞杜松＞锦鸡儿＞蒙古扁桃＞金露梅＞灰榆＞禾本科草本植物＞油松＞青海云杉。马鹿取食乔木36.8%、灌木44.7%、禾本科草本植物8.0%和非禾本科草本植物10.5%，这4类植物的利用性与可利用性存在极显著差异，乔木和灌木的利用性高于可利用性；禾本科草本植物和非禾本科草本植物的利用性低于可利用性，说明马鹿的食物以木本植物为主，草本植物为辅。Spearman相关分析得出马鹿对食物的选择性与水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维和无氮浸出物之间无明显的相关关系。被啃食植物中粗蛋白含量较高，蛋白质不是越冬马鹿的限制因子，而能量可能是影响冬季马鹿采食较为关键的因子。马鹿冬季采食策略主要是以最小的能量消耗获取最大的能量收益。     

车轮虫分类与系统发育研究进展

车轮虫属一大类寄生性纤毛虫原生动物，可不同程度地给宿主造成危害，故对其研究既具有理论意义，又具有经济价值。文中简单回顾了车轮虫的分类研究和系统发育研究的历史。在分类学研究领域方面，全面介绍了目前车轮虫科已发现属的寄生部位和地理分布等；而系统发育研究领域方面，则介绍了车轮虫研究在萌芽期、探索期和发展期这三个时期的进展，包括形态学和分子生物学两方面的研究内容。并对该领域今后应进行的研究提出了建议。     

栖息地选择的理论与模型

栖息地选择理论和模型的发展经历了两个主要阶段：理想自由分布模型和空间直观的栖息地选择模型。随着对理论模型假设的放宽，近年来产生了越来越多的新模型。通过对栖息地选择过程的分析，提出了栖息地选择的几个关键环节：栖息地偏好、信息获取、行为决策及选择行为。在建立栖息地选择模型的各个关键环节上均存在大量有待解决的问题。目前对栖息地偏好的研究主要为相关分析，栖息地信息获取的过程仍然是一黑箱；对动物在栖息地选择过程中的行为决策以及对其生理状态的影响尚不了解，而解决这些问题需要生态学、生态学及认知学等多个领域的研究结果支持，也有待新的理论及方法加以充实，甚至还需要其他学科的介入。     

昆明滇蛙的取食策略

目前国内研究两栖类食性选择或偏好多未考虑蛙胃内不同食物的丰盈程度与栖境不同食物资源是否存在相关性。在分析了采自昆明白龙寺和昆明石林西街口的494只滇蛙(Rana pleuraden)的食性的同时，分析了采自对应栖境中的食物资源组成。结果表明，滇蛙的食物成份与食物资源相具有稳定性，主要类群均为直翅目、同翅目、半翅目、鞘翅目、双翅目、鳞翅目、膜翅目和蛛形纲等8类。但又存在变异性，不同产地、不同年份和不同月份之间的蛙标本胃内的食物成分各类群的比例均不相同。主要食物成份与食物资源相的差异显著性分析、相关性分析和选择性分析等方面的结果均支持或证明：滇蛙对食物具有选择性或取食偏好。栖境的食物资源相与蛙胃内的食物成分不存在相关性 (白龙寺：r=0.077, P=0.575; 西街口：r=-0.086, P=0.500)。直翅目(Ei<-0.35)和同翅目(Ei<-0.37)昆虫是滇蛙取食时回避的食物，而对鞘翅目、鳞翅目、膜翅目和蛛形纲等4个类群(Ei>0.45)具有明显偏好。     

在中国云南发现狒狒化石

现存狒狒类(Papionin)生活于非洲(如Papio和Theropithoan)、 亚洲(如Macaca)和北非(M. sylvanas)。 在上新世和更新世，Theropithecus经历了从非洲到亚洲的扩散过程， 在印度发现了类似化石。 这次在云南中甸金沙江附近发现的下更新世狒狒化石(Papio)证明， 如同亚洲猕猴和现代人类祖先一样， 非洲狒狒类(Papio和Theropithecus)在同一时期从非洲扩散到亚洲。 所不同的是它们没有像猕猴和人类一样生存下来。 这次化石的发现对于研究以下生物学问题提供了重要依据： 1) 探讨旧大陆猴类在上新—更新世从非洲到亚洲的扩散过程； 2) 研究不同旧大陆猴类的进化和环境适应性； 3) 为现代人类祖先在非洲—亚大陆的扩散研究提供证据； 4) 由于化石产地包括有人类祖先和其他动物的化石， 因此， 狒狒在亚洲的生态适应研究将为探讨人类在同一时期的生态适应提供证据。     

黄腹角雉人工种群生存力初步分析

黄腹角雉（Tragopan caboti）为我国特有珍稀雉类。目前，其野生种群仅分布于湖南东南部、浙江南部和西南部、江西、福建、广东北部和广西东北部，估计数量约为4000只。湖南省雉类繁殖基地自1997年通过对执法检查中获得的黄腹角雉个体进行收容、救护以及驯养繁殖工作以来，该人工种群已经成功繁殖4年，至2004年年底种群数量为131只。本文利用8年的驯养繁殖过程中获得的种群生态学参数，借助漩涡模型（Vortex9.51）对该种群100年内的动态进行了模拟。结果显示，按照过去8年的生存情况，该种群在100年灭绝的概率为97%。成年雌性的高死亡率和频繁的灾害是影响种群长期存活的两个关键因素。如果成年雌性的死亡率降低到饲养后3年（2002—2004年）时的水平，种群的灭绝概率降低至5%，如果同时控制灾害的发生，其灭绝概率降至0。增加环境容纳量没有降低种群的灭绝概率和增加其增长速度，但增加环境容纳量对100年后的种群数量和基因杂合度有明显的影响。在降低成年雌性死亡率和杜绝灾害发生的情况下，可以考虑对种群进行收获（用作向野外放养），每次收获的数量应该控制在5只成年雄性和5只成年雌，开始收获时间为种群连续繁殖10年以后。降低成年雌性的死亡率、杜绝食物中毒和火灾等灾害的发生以及增加环境容纳量是该人工饲养种群长期存活和发展壮大的重要管理手段。     

牛卵母细胞玻璃化冷冻对基因mRNA表达量的影响

目的 将处于生发泡期(GV期)和体外成熟期(IVM)的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻.解冻,对其卵裂率和囊胚率以及一些与发育相关基因的mRNA表达量进行评价.方法 玻璃化冷冻GV期(n=224)和IVM期(n=235)牛卵母细胞,解冻后对其进行体外培养并采用quantitative real time-PCR技术对冷冻.解冻...