pH和溶解氧浓度对重组酵母表达乙型肝炎表面抗原的影响

观察酵母基因工程菌生产目的基因表达产物——乙型肝炎表面抗原的发酵,细胞生长和乙型肝炎表面抗原表达是两个相互影响的过程,因此,存在着pH的调节序列。溶解氧浓度的控制对重组质粒稳定性以及目的基因的高表达具有较大影响,实验获得控制溶解氧浓度为70％饱和度的条件,可使重担质粒保持73％以上的稳定性,并且．乙型肝炎表面抗原达到98．6的相对浓度。     

不稳定的基因工程酵母生长动力学研究

应用数学模型方法描述重组质粒由于拷贝数的增加以及基因表达产物——乙型肝炎表面抗原在受体细胞内积累造成对Leu＋表型细胞生长的阻遏作用。模拟丢失重组质粒的细胞生长规律,给出其形成后可能的年龄-时间分布。根据这两类不同表型细胞同时生长的轨迹,得到重组质粒丢失频率与Leu^-表型细胞生长的关系。因此,可把发酵过程中基因工程酵母表现出重组质粒的不稳定归于两种作用：重要的是Leu⁺表型细胞分裂时具有不对称的质粒分配,其次是在丰富培养基中这两类不同表型细胞具有不同的生长速率。     

甲醇诱导条件和方式对乙肝表面抗原产率的影响

发酵条件是影响汉逊酵母表达乙肝表面抗原的重要因素,通过对甲醇诱导浓度、方式及诱导周期的调控,研究了不同发酵条件对汉逊酵母表达乙肝表面抗原的影响。结果表明：控制甲醇流加速率15ml／h、甲醇诱导周期40h有利于发酵过程中乙肝表面抗原产率的提高。在发酵末期,细胞浓度最高达410mg／ml,抗原水平达46mg/l。     

微载体培养分泌HBsAg的Bu3细胞生长动力学研究

本文研究微载体半连续悬浮培养表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的基因工程哺乳动物细胞(Bu3)的工艺过程,建立了细胞在微载体上的生长模型、葡萄糖消耗和乳酸生成模型。实验表明,微载体悬浮培养系统能使贴壁依赖性Bu3细胞达到高密度和产物高表达。     

三齿草藤(Vicia bungei Ohwi)凝集素的细胞表面受体研究

应用亲和层析法从三齿草藤(Vicia bungei Ohwi)种子中纯化的三齿草藤凝集素(VBL),可以凝集兔和豚鼠的红细胞,也可凝集人、牛和羊的精细胞,说明这些细胞表面存在有VBL的受体。用FITC和~(125)I进行标记,可得到FITC-VBL和~(125)I-VBL,其生物学活性不受影响。氯胺T法的标记率可达55％;应用FITC-VBL研究牛精细胞和兔红细胞膜上VBL受体的分布,发现二者由胞膜上受体分布据不一致。VBL与牛精细胞结合条件的正交试验表明细胞浓度的影响最大。用不同量的未标记的VBL对~(125)I-VBL与兔红细胞和人精细胞的结合实验,以Scatchard法作图,兔红细胞得一类似于双曲线的凹形曲线,提示该细胞膜上受体的性质有所不同,而人精细胞却有很大差异。若以兔红细胞膜上存在有高低亲和力两种受体进行计算,可求得结合常数和每个细胞上的受体数。应用几种单糖和外源凝集素影响~(125)I-VBL与兔红细胞的结合,当单糖(D-Man,D-Glc)浓度为0.01M时,相对结合率开始急剧下降,单糖浓度若增至0.1M时,其相对结合率仅为40％,而PHA-P和SML浓度为1mg/ml时,相对结合率开始下降,当浓度达10mg/ml时,相对结合率下降至30％左右。     

单相和两相发酵体系中Methylomonas Z201细胞的生长和环氧丙烷的合成

研究了单相和两相发酵体系中甲基单胞菌（Methylomonas）Z201细胞的生长和环氧丙烷的合成。在单相发酵体系中,底物丙烯和产物环氧丙烷抑制细胞生长,水相中环氧丙烷的浓度达到13mmol／L。在两相发酵体系中,十六烷作为生长底物甲烷以及反应底物丙烯和分子氧的“储器”,减小了丙烯对细胞生长的抑制作用,水相和十六烷相中环氧丙烷的浓度分别达到1．7mmol／L和2．6mmol／L。同休止细胞相比,单相和两相发酵体系中辅酶NADH的原位再生使生长细胞的操作稳定性显著提高,尤为两相体系为甚。     

二甲基亚砜作用下重组CHO细胞胞内乙型肝炎表面抗原的定位

在培养环境中添加二甲基亚砜 (DMSO) 能分别提高重组 CHO 细胞乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的产量和比生产速率70%和3.2倍以上, 但同时发现胞内HBsAg 的积累量是对照组的7.2倍。为了分析胞内HBsAg 积累的区域,采用电镜技术分析后发现,经DMSO处理后的CHO细胞胞内出现了很多的扩张区域,这些扩张区域分布整个胞浆,有的扩张区域已经侵蚀到细胞核上,而对照组未发现明显的扩张区域。进一步利用免疫电镜技术分析后发现,经DMSO处理后的细胞胞内大量积累的HBsAg主要分布在这些扩张区域中,同时发现在细胞核膜上也有分布,这可能是由于扩张区域侵蚀细胞核造成的。以上工作有助于揭示在DMSO作用下重组CHO细胞胞内HBsAg大量积累的机制。     

疫苗

880339合成含有P阳名区基因表达产物的乙型肝炎表面抗原颗粒〔英万Michel,M.L.…了Proe.Conf.Ther.Agerts ProdGenet.Eng.;Toulouse一Labeqe,Franee;29一50 May 1955一1956一23一25〔译自CBA,1987,·(4),1688〕 构建了携带有S基因和Pre一S基因区乙型肝炎病毒的CHO细胞系。该细胞系合成的乙型肝炎病毒表面抗原22nm颗粒,在形态、生化和生理特性上似与血清乙型肝炎病毒表面抗原类似。这些颗粒注入小鼠体内能诱导产生两种高水平的抗乙型肝炎病毒表面抗原和抗人血清白蛋白受体多聚物的抗体。. (戴顺志)380340预防马流感的有用方法及其…     

发酵过程中细胞浓度在线检测系统*

利用微机软、硬件技术,设计了一套比浊法细胞浓度在线检测系统,并应用于5L发酵罐中木糖醇发酵过程细胞浓度在线检测。该系统能及时、较准确地反映发酵过程中菌体浓度随时间的变化情况,在规模化生产中具有较强的适用性、通用性,可为实现其它分析仪器的计算机在线检测系统提供值得借鉴的设计思路和实现方法。     

分子筛层析法分析重组乙肝表面抗原聚集物的形成

分子筛层析作为分析蛋白质颗粒聚集物的一种有力工具,被用于研究重组乙肝表面抗原聚集物的形成。已去除聚集物的表面抗原放置在不同的理化条件下或经过不同的纯化方法处理后,应用HPLC分析其聚集物的形成。为研究发酵过程中是否形成表面抗原聚集物,酵母细胞破碎后立即用Sepharose 4 FF层析柱分离为不同的组分,并分别进行HPLC分析。结果发现,在纯化过程和酵母发酵阶段都有表面抗原聚集物的产生。     

雌激素受体在人舌鳞癌中的表达及β-雌二醇对其增殖的影响

目的：观察雌激素受体（ER）在人舌鳞癌Tca8113细胞系细胞上的表达,研究β－雌二醇（estrabiol,E2)对培养的舌癌细胞增殖的影响。方法：用免疫细胞化学方法和RT－PCR方法检测雌激素受体在人舌鳞癌细胞上的表达,将β－雌二醇（β－E2）作用于体外培养的人舌鳞癌细胞,测定^3H-TdR掺入量,并用流式细胞仪测定细胞周期。结果：经免疫细胞化学和RT－PCR方法可检测到ER－α和ER－β在人舌鳞癌细胞上均有表达,其中ER－β表哒相对较弱。不同浓度的β－E2可增加^3H-TdR掺入量,并存在着剂量效应。106-6mol/L的β－E2能使人舌鳞癌细胞处于G1期的细胞比例从对照组的76．5％下降至62．3％,而处于S期和G2期的细胞比例从23．5％上升至37．7％,细胞的DNA合成增加,促进细胞的增殖。β－E2对舌癌细胞的促增殖作用可被Tamoxifen阻断。结论：在人舌鳞癌细胞上有雌激素受体的表达,且β－E2在体外能明显促进培养的人舌鳞癌细胞的增殖。     

单抗LC-1与针对的人肺腺癌SPC-A-1细胞肿瘤相关抗原复合物的内化研究

我们运用抗人肺癌单抗LC-1结合胶体金免疫电镜技术研究了人肺腺癌SPC-A-1细胞表面抗原抗体复合物被内吞的全过程,发现该细胞表面抗原抗体复合物是通过受体介导内吞途径被内化,经多泡体富集后至溶酶体消化降解。此外我们还用流式细胞仪分析了内吞前后该细胞表面抗原量的变化和短期内的恢复情况。LC-1在诱发该细胞表面抗原内化的同时还诱发了它对该核糖体的自噬。     

黑曲霉（Aspergillus niger）和运动发酵单胞菌（Zymomonas mobilis）共固定化细胞酒精发酵的研究

本研究将生产上常用的糖化菌（Ａｓｐ．ｎｉｇｅｒ３．４３０９）与酒精产生菌（Ｚ．ｍｏｂｉｌｉｓ）共同固定在海藻酸钙凝胶中,以淀粉为原料进行固定化细胞酒精发酵实验,并就ｐＨ、温度、通气量。淀粉浓度等对发酵的影响进行了探讨,认为当ＰＨ为５．０～５．５,温度为３０℃～３３℃时乙醇产率最高（Ｙｐ／ｓ可达０．３９）。而淀粉浓度、通气量对共固定化细胞酒精发酵有显著影响,二者存在着较强的交互作用,在发酵过程中根据淀粉粘度情况调节通气量将有助于提高乙醇产率。     

木糖发酵生产乙醇的研究

选育出一株优良的木糖发酵菌株树干毕赤酵母菌7124,并利用纯木糖优化了木糖发酵条件,利用海藻酸钠固定化树干毕赤酵母菌增殖细胞,不仅能较好满足限氧发酵条件,而且能耐较高糖浓度,使乙醇发酵浓度提高到20g/L。利用半纤维素水解液进行了乙醇发酵的初步研究,基本达到了纯木糖发酵的效果。     

微量元素Mn离子对DY芽孢杆菌芽孢形成影响的研究

目的研究DY芽孢杆菌发酵过程中微量元素Mn离子对芽孢形成率的影响。方法通过实验设计,调整发酵用水中锰离子的浓度,进行DY芽孢杆菌生产曲线的同步发酵分析,并对发酵终产物进行生化反应鉴定。结果实验结果显示0．08mg／L锰离子发酵浓度,显著提升了DY芽孢杆菌发酵过程中芽孢形成率,且最终发酵产物生化反应鉴定符合生产菌种原始特征。结论DY芽孢杆菌发酵过程中,除发酵培养基的选择、培养条件的控制等因素会影响芽孢形成率外,作为微量元素,适量Mn离子的引入,可以影响菌体生长曲线,促进芽孢的形成,使菌体活性更高,从而使发酵效果得到显著提升,为今后更进一步提高发酵质量提供了基础和依据。     

组成型表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶重组大肠杆菌发酵条件研究

目的:对重组大肠杆菌组成型表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA)进行了发酵条件研究。方法:在摇瓶和5L发酵罐中研究了(NH4)2SO4和葡萄糖浓度对质粒的分离稳定性及青霉素G酰化酶表达的影响。结果:该工程菌质粒具有分离不稳定性,培养基中无(NH4)2SO4时发酵过程中pH和糊精水解生成葡萄糖的浓度变化较小,细胞前期(0h-12h)的生长速率降低,质粒分离稳定性和青霉素G酰化酶的表达水平提高。发酵过程中维持低葡萄糖水平可以限制细胞的生长速率,提高质粒稳定性和促进青霉素G酰化酶的合成。采用混合碳源发酵,发酵培养基含糊精2g/L,12h后以1g/L.h恒速流加葡萄糖至35h,控制流加过程葡萄糖浓度0.1g/L左右,平均比生长速率为0.06h-1,发酵结束时质粒稳定性为86%,青霉素G酰化酶的表达水平达23 000U/L。结论:重组大肠杆菌组成型表达青霉素G酰化酶的研究对工业生产有一定指导意义。     

单抗LC—1与针对的人肺腺癌SPC—A—1细胞肿瘤相关抗原复合物的内…

我们运用抗人肺癌单抗ＬＣ－１结合胶体金免疫电镜技术研究了人肺腺癌ＳＰＣ－Ａ－１细胞表面抗原抗复合物复合物被内吞的全过程,发现该细胞表面抗原抗仨复合物是通过受体介导内吞途径被内化,经多泡体富集后至溶酶体消化降解。此外我们还用流式细胞仪分析了内吞前后该细胞表面抗原量的变化和短期内的恢复情况。ＬＣ－１在诱发该细胞表面抗原内化的同时还诱发了它对该核糖体的自噬。     

成都蜀阳制药厂产品简介

乙型肝炎免疫球蛋白制品概况　 本品系经乙型肝炎疫苗免疫献血员采集的含有一定乙型肝炎抗体效价的血浆 ,按低温乙醇法制备的特异性免疫球蛋白。其中丙球蛋白在 90 %以上。每毫升含乙型肝炎表面抗体效价不低于 1 0 0ＩＵ。本品经过病毒灭活处理。药理作用　 主要激活补体系统 ,增强体液免疫 ,能使感染肝细胞释放出来的ＨＢＶ(乙肝病毒 )在进入未感染细胞之前就被清除 ,可防止和减少正常细胞感染 ,也可能减少ＨＢＶ在体内的复制 ,利于病情恢复。适应症 　主要用于乙型肝炎的预防及治疗 :·乙型肝炎表面抗原 (ＨＢｓＡｇ)阳性以及ＨＢｓＡｇ和…     

稀土元素对红霉素发酵的影响

通过对红霉素发酵培养基中添加稀土元素的研究,确定了几种能对发酵效价有提高作用的稀土元素及其浓度,当其中镧La^3＋、钕Nd^3＋和铈Ce^4＋离子浓度分别为50mg／L、50mg/L和100mg／L时对提高红霉素效价水平最显著,提高了32％、25％和25％,并且对改善红霉素组分也有明显作用,红霉素A组分相对百分含量分别提高18．9％、32．7％和34．4％,红霉素B组分分别减少24．1％、58．6％和62．1％。     

氮源NH4Cl浓度对粪产碱杆菌发酵生产热凝胶的影响

研究了利用粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)发酵生产热凝胶的发酵条件,氮源是菌体生长的限制性底物,单纯地提高初始底物(氮源)浓度并不一定能促进细菌的生长和产物的合成.在分批发酵过程中,底物消耗导致培养环境pH的改变也是影响细菌进一步生长和产物合成的重要因素.通过增加培养基中初始氯化铵的浓度并同时控制发酵过程的pH条件,得到了较高的菌体浓度,热凝胶的合成水平也得到了显提高.当培养基中NH4Cl浓度提高到3.6g/L时,菌体浓度达到7.2g/L,热凝胶合成的产量可达30.5g/L,比原来NH4Cl浓度为1.1g/L时提高了51.7%.提高菌体浓度意味着需要提高溶氧水平来满足细菌的生长和代谢.初始氮源NH4Cl浓度的增加虽然能使菌体浓度得到提高,但发酵过程对溶氧的需求也相应增加,需要提高搅拌转速和通风以增加供氧水平.但高搅拌速率产生的高剪切力对热凝胶的凝胶性能将产生破坏作用,因此在发酵过程中需要综合考虑细菌培养密度对合成热凝胶产量和质量的影响.