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《生物技术通报》1992,(2)
920410可在蓝燕株系PCC7120中分析启动子的载体〔英〕/Tang,J.D.…了J.Baeteriol一1901,i了3 (s)一2729~2731〔译自DBA,1991,10(12),91一06654〕 构建了启动子探测载体pJL3,它含有一个多克隆位点、cat基因(不带启动子)以及转录终止子。经接合将其从大肠杆菌转移至Aoaba‘。a“P.PCC7iZo中。新质粒的成分来源于:质粒pRL25C (含大肠杆菌和兰藻复制子)、新霉素杭性标记、bom接合转移区、质粒pDUI(从丝态兰细菌分离到)以及pBR322的序列。描述了该载体质粒的详细构建过程。Aoaba。:a psbB基因编码光合系统n中的一种分子量47000的叶绿… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(4)
821276大肠杆菌户葡枪普酸酶甚因作为鉴定酵母菌株的标记〔英〕/petering,J……了Am.J。Enol.Vitie一1991,42(i)一6一11〔译自DBA,1991,10(18),91一10239二 大肠杆菌介葡糖普酸酶(GUS)uidA基因(分离自质粒pKLG4的HindIH片段)经改造,即在其编码序列上连接酿酒酵母乙醇脱氢酶启动子和终止子序列,构成pAW220新质粒,用于在酵母中的表达。pAW220在转化酿酒酵母3A时,可整合至第13染色体的ILVZ基因中。筛选抗性除草剂甲基化Sulfometuron(10产g/ml)的转化株。用Southern杂交法筛选转化株中在ILVZ基因内含有GUS者(3 AM)。3 AM培养于1… 相似文献
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通过对重组质粒No.8-1的亚克隆,灰色链霉菌插入到大肠杆菌载体质粒中的序列已缩小到410bp,仍具有启动子功能。序列分析表明,启动子活性片段的G C碱基组成为50.5%。内含链霉菌启动子区域常有的正向重复序列;有1个Alul位点,1个Clal位点,2个Mbol位点,3个Nla Ⅲ位点,1个Pvu Ⅱ位点;具有类似于E.coli启动子的保守序列-10区和-35区,两者间隔18bp;在相应位置上分别有一段序列与E.coli的SD序列和在苄铅青链霉菌的SEP(Streptomyces-E.coil-type promoter)序列中存在的保守序列具有一定的相似性。 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920889在发醉杂件下乳抽对tac启动子的诱导〔英刀Neu-bauer,P.…j Aeta Bioteehnol一1091,11(一)一23~2。〔译自DBA,i,。i,10(15),91-08级38〕 发展了一种用乳糖代替昂贵的TPTG诱导tac启动子的表达系统。采用大肠杆菌JC53的R100质粒协助质粒诱动,用平板结合法将大肠杆菌JM109的F,质粒(Lelq、pro AB)转入受体菌NK5525(lae‘、pro)。得到的原养型CW3oll超量表达lae阻遏物基因,并以乳糖为能源和碳源生长。质粒pOFI.o转化的菌株CW3oll含控制lae操纵子(I-acZ和lacy)片段的 tac启动子和氨节青霉素抗性基因。摇瓶和发酵罐实验结果表明… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920861克隆的外源基因在大肠杆菌中增加表达的可能性〔英〕/Venetianer,p.了Aeta Bioteehnol一1991,11(2)一129~133〔译自DBA,1991,10 (15),91一08439习 在异源宿主(如大肠杆菌)中合成并累积想要的(外源)蛋白产物是一个复杂的多步骤过程,并受到以下步骤的影响:i。提高基因拷贝数的方法,如采用高拷贝数载体;11.提高和控制转录率的方法,如使用强启动子;111。提高翻译率的方法,如选用适宜的Shine一Dalgaroo序列;iv.增加合成蛋白或肤稳定性的方法,如表达融合蛋白;v.提高重组质粒稳定性的方法;如使用无需抗生素而能选择连续出现的质粒的方法;… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(8)
922913指导甲状旁膝素类似物(8一84)在大肠杆菌内表达的内核钻体结合位点〔英〕/song,W.L一ZBi。-ehem。BioPhys.Res。Commun。一1991,151 (i)一451~455〔译自DBA,1902,11(3)奋92一01358〕 设计了12种合成基因,通过用简并密码子置换 (多肤序列无突变),使每个合成基因在甲状旁腺素(PTH)一(1一5)区内含或不含内核糖体结合位点样序列(iRBS)。将12种合适的编码PTH-一(1~28)的寡核普酸擂入前体质粒pPTH一(29-84)一Ec。产生具不同编码PTH一(1一5)结构域核酸序列的质粒。此新质粒在大肠杆菌中表达(在lac启动子和操纵子控制下)产生胞内蛋… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(4)
921209噬菌体T7第10基因翻译增强子(TREN)的化学-酶促合成及其构件的功能〔俄〕/Gureyich,A.1.…1 Bioorg.khim一1991,17(5)一e47~652〔译自DBA,1991,10(18),91一10247〕 为了这种分析,通过化学一酶促合成法制备了TREN完整序列及其近端和远端序列。用Bam Hl和E。。Rl二种限制酶将合成序列克隆到多拷贝质粒pFPC10中。获得的新质粒用千检测TREN近端区增强翻译的能力。编码人白细胞介素一3的人工基因(克隆于pFPC10中,不含TREN的一部分)在大肠杆菌中的表达很低。引入完整的TREN序列,使人白细胞介素一3的产量大大升高。取代pTE3 … 相似文献
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《生物技术通报》1992,(8)
922993苏云金杆菌蜡螟亚种新型d一内毒素基因Crylg的核曹酸序列〔英〕/Smuleviteh,5.V.…了FEBSLett一1991,293(i一2)一25一25〔译自DBA,1992,11(4),92一01452」 采用亲和纯化的抗CryIG纯蛋白单特异血清进行筛选,从噬菌体卜pSLS基因文库中分离出B.t.gll一67的杀虫晶体蛋白CryIG的基因即crylg基因。对3种呈免疫反应的克隆进行限制性作图。含全长crylg基因的质粒pOC10经Xbal切除后删去噬菌体部分。所得质粒pOK10作图后,将其Kpnl一Xbal插入子(含有全长基因及两翼序列)克隆到pUC18内,产生pKP7。如此即可在大肠杆菌中经lac启动子调… 相似文献
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nisZ启动子结构与功能的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
应用βGlucuronidase基因(gusA)作为报告基因,通过定点突变方法分别缺失nisZ编码区上游两个启动子结构(promoter1和promoter2)中的一个,发现只有靠近编码区的promoter2是nisZ启动子诱导表达所必需。将promoter2中10区及其上游的一个碱基突变为乳酸菌中典型的组成型启动子的10区结构,该改变使nisZ启动子诱导功能下降;将promoter2的10区和35区的间隔区由20个碱基缺失突变为17个碱基,则nisZ启动子失去诱导功能。据此认为该间隔区的结构与nisZ启动子的诱导表达密切相关。 相似文献
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《生物技术通报》1992,(4)
921489单子叶植物LHCp启动子在转基因水稻中的表达〔英〕/Tada,Y.…2 EMBOJ一1991,10(7)一1803~1808〔译自DBA,1991,10(18),91-10498〕 通过电激将与编码水稻(Or夕za夕at苏公a)捕光叶绿素a/b光系统一n(LHCPll)结合蛋白启动子相连的户葡糖昔酸酶(GUS)基因(位于质粒PLHC4.4中)导入水稻。转化原生质体和愈伤培养物中由LHCP启动子控制的GUS基因表达远低于由花椰菜花叶病毒(CaMV)355启动子控制的,而在绿色器官中,LHCP启动子启动的LHCP-GUS活性比CaMV35S启动子启动尸的高10倍。在叶、茎和花组织中检测到LHCP一GUS基因的表… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
924009异源基因在牛分枝杆菌BCG中的表达:抗HIV一1Nef蛋白细饱反应的诱导〔英〕/Winter,N.…了Geue一1991,109(i)一47~54〔译自DBA,1992,11(8),92一04359〕 为了用牛分枝杆菌菌株BCG作保护性抗原载体,将编码Nef蛋白的H工V一病毒一1基因克隆于大肠杆菌一分枝杆菌穿梭载体(质粒pRR3)几中并导人BCG。质粒pRR3含一个在分枝杆菌中复制和保留必需的质粒pALSOo。片段、转座子Tn 903卡那霉素抗性基因和大肠杆菌复制原。n“f_基因在含白色链霉菌(St,epto哪歹ees albos)groES/groELi操纵子的启动子和合成核糖体结合位点的DNA表达框架(… 相似文献
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将含重组白细胞介素12(hIL—12)的杆状病毒(Ac—hIL12)经空斑纯化后,在草地贪夜蛾Sf9细胞中进行连续无稀释传代到P55代,收集被P15、P25、P35、P45、P55代重组病毒感染的细胞,抽提胞内病毒(ICV)DNA。根据重组病毒构建的原理,在P35cDNA和P40 cDNA的3′末段设计一对引物进行PCR,扩增出了包括P35cDNA、Polyhedrin启动子、P10启动子和P40 cDNA序列在内的全长约2．0kb片段,克隆至T Vector进行序列测定后发现,在第PmP25和P35代所扩增出的序列没有发生任何突变。但在P45代,P35 cDNA中就有3个碱基发生了点突变(461T→C,517A→G以及630C→T),Polyhedrin启动子的 1位后插入了一个碱基T,P40 cDNA与P10启动子区(230bp)没有变化;而第P55代除了以上碱基突变以外,P10启动子区—168位的G替换突变为T,—136与—135位之间插入一个碱基T,以及—122位缺失一个碱基T。以上结果表明杆状病毒在体外细胞连续传代过程中可导致外源基因本身的突变。 相似文献
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将含重组白细胞介素12(hIL-12)的杆状病毒(Ac-hIL12)经空斑纯化后,在草地贪夜蛾Sf9细胞中进行连续无稀释传代到P55代,收集被P15、P25、P35、P45、P55代重组病毒感染的细胞,抽提胞内病毒(ICV)DNA.根据重组病毒构建的原理,在P35 cDNA和P40 cDNA的3′末段设计一对引物进行PCR,扩增出了包括P35 cDNA、Polyhedrin启动子、P10启动子和P40 cDNA序列在内的全长约2.0kb片段,克隆至T Vector进行序列测定后发现,在第P15、P25和P35代所扩增出的序列没有发生任何突变.但在P45代,P35cDNA中就有3个碱基发生了点突变(461T→C,517A→G以及630C→T),Polyhedrin启动子的+1位后插入了一个碱基T,P40 cDNA与P10启动子区(230bp)没有变化;而第P55代除了以上碱基突变以外,P10启动子区-168位的G替换突变为T, -136与-135位之间插入一个碱基T,以及-122位缺失一个碱基T.以上结果表明杆状病毒在体外细胞连续传代过程中可导致外源基因本身的突变. 相似文献
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启动子是基因表达调控的重要元件.在代谢工程和合成生物学研究中,经常需要利用不同强度的启动子对代谢途径进行精细调控,来实现代谢平衡,降低中间产物积累,提高目标产物合成.然而目前可获得的启动子难以满足以上要求,而且不同来源的启动子通用性差,缺乏标准化.针对这些问题,设计了1条88个碱基对的启动子,包含典型的-35区、-10区以及核糖体结合区.同时,在转录起始位点上游6个碱基、-35与-10区间隔区14个碱基对中引入简并序列,构建了合成启动子文库.利用合成启动子控制红色荧光蛋白mCherry的表达强度,经过两轮筛选,从5 000多个克隆中获得了720个不同强度的启动子.随机挑选35条不同强度的启动子进行测序分析,结果表明不同强度的启动子具有碱基偏好性.对于强启动子,-13位点嘌呤碱基出现频率高,转录起始区除-4位点外,嘧啶碱基出现的频率高于嘌呤碱基,而-10区与-35区间14个位点的嘌呤碱基与嘧啶碱基出现频率大致相当.最后选取5条不同强度启动子应用于顺,顺-粘康酸合成途径调控优化,结果显示不同强度的启动子可以调节目标产物顺,顺-粘康酸的合成和中间产物儿茶酚的积累. 相似文献
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《生物技术通报》1992,(9)
92引47抗杀稻疽菌素一S的大肠杆菌TK121的杀稻瘟菌素一S一脱氨酶N末端氨基酸序列以及bsr基因的核普酸序列〔英〕/Kobayashi,K.…了Agrie.Biol.Chem一1991,55(12)。一3155~3157〔译自DBA,1992,11(5),92一02402〕 分离到抗杀稻瘟菌素一S(BS)的蜡状芽抱杆菌K55一51菌株,并分离到BS脱氢酶(BSD)。构建了含有BSD基因(bsr)的质粒pBSRs(10.5kb)。将其再克隆到枯草杆菌及大肠杆菌TK121中,已将bsr基因定位于pTK17中的一个1。5 kbEcoRI一BamHI片段上(内含一个单一的Bglll位点)。用M13链终止法测定DNA序列,在测定的Nde工一Hincn片段中… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(7)
922444 通过诱导T7 RNA聚合酶强烈抑制氯霉素乙酰转移酶的表达[英]/Kim,H.B.…∥Biotechnol.Lett.-1991,13(10).-751～754[译自DBA,1991,10(25),91-14511] 通过诱导大肠杆菌中的噬菌体T7表达系统强烈抑制氯霉素乙酰转移酶的表达。消化了质粒pYEJ001(含带有大肠杆菌核糖体结合位点序列的无启动子cat基因)和质粒pGEM3(带有T7和SP6启动子),将连接混和物导入大肠杆菌。含由T7和SP6启动子调控的cat基因的质粒分别称为pT7CAT和pSP6CAT。即使在无RNA聚合酶条件 相似文献
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利用TAIL-PCR(Thermal asymmetric interlaced PCR)从短小芽孢杆菌基因组中扩增到碱性蛋白酶基因编码区上游的启动子片段。对该片段的序列测定和分析表明, 此片段长797 bp, 但与基因表达有关的序列长约390 bp。对启动子片段进行不同长度的缺失突变, 以获得最小的基因启动子片段, 结果表明, 该基因起始密码子上游约160 bp的DNA片段就可以启动基因的表达。将含有该片段的碱性蛋白酶基因WApQ3插入大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭质粒载体pSUGV4中, 构建了碱性蛋白酶基因表达质粒pSUBpWApQ3。将该质粒分别转入枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌中表达, 可在胞外检测到碱性蛋白酶活性, 最高酶活分别为466.5 U/mL和3060 U/mL。 相似文献
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RM0 7DNA片段分离自嗜盐古菌———盐生盐杆菌R1 ,该片段不仅在嗜盐古菌内具有启动子功能 ,而且在大肠杆菌中也具有启动子活性。序列分析表明其上确实含有细菌启动子的 35、 1 0保守区。进一步通过缺失分析证实该片段就是在大肠杆菌中具启动功能的DNA片段 :仅含 1 0区而缺失 35区的RM0 7a片段基本上无启动活性 ;而含 35和 1 0区的0 1kb片段RM0 7b具有高于RM0 7的启动活性。研究结果还表明 ,RM0 7片段在大肠杆菌中的启动活性是受环境因素调节的 ,尤其是对氯化钠浓度的提高具 相似文献