人r型基因工程干扰素中残余DNA的检测

采用地高辛标记探针,以核酸杂交法检测人ｒ型基因工程干扰素（ＩＦＮ－ｒ）制品中残余ＤＮＡ含量,结果表明,自制的二组ＤＮＡ标准品相应量间显示的色斑相差悬殊,提示高蛋白含量对痕量残余ＤＮＡ的检测干扰较大,添加ＩＦＮ－ｒ的ＤＮＡ标准品比纯ＤＮＡ标准品更合理,以此测得各样品均符合ＷＨＯ要求（〈１００ｐｇ／剂量）,方法敏感性为４ｐｇ。     

r——亚麻酸发酵条件研究

本文对ｒ－亚麻酸发酵的碳源、氮源、ｐＨ值、菌体得率、油脂含量、ｒ－亚麻酸含量等进行了考察,并通过均匀设计,得到了该菌株发酵生产ｒ－亚麻酸的优化配方,用优化配方发酵结果表明,菌体得率、ｒ－亚麻酸含量均有显著的提高。     

中国人r——干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物中克隆了ＩＦＮ－ｒ－ｃＤＮＡ,序列分析证实了分子进化规律对ＩＦＮ－ｒｃＤＮＡ序列存在多态性的推论。在此基础上应用ＤＮＡ重组技术,将去信号肽中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ克隆到原核表达质粒ｐＢＶ２２０ ＰＲＰＬ启动子下游,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ,其表达水平占全菌可溶性总     

基因工程菌的发酵研究

本文对大肠杆菌表达的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ工程菌的发酵条件进行了详细的研究,探讨了发酵条件对工程菌表达外源蛋白量的影响,优化了影响发酵的各种条件,形成了一套工程菌发酵表达外源蛋白的工艺,并从工业化角度对工程菌的高密度高表达间的关系进行了探讨。     

r干扰素抗结核免疫作用的研究进展

r干扰素是重要的Th1型细胞因子,它可通过促进T细胞的增殖和分化,激活巨噬细胞,参与结核病的肉芽肿免疫反应等多方面发挥抗结核免疫作用。这些使得r干扰素在抗结核免疫治疗方面的研究受到重视,并取得一定的成功。     

重组人干扰素—β的中试研究

从大肠杆菌中大规模纯化新型干扰素β(IFN-βser17).首先建立IFN-βser17发酵和纯化工艺,连续大量纯化三批,并对纯化终产品进行全面鉴定.建立了稳定的发酵和纯化工艺流程,中试三批菌产量平均为4.33g/L,IFNβser17的表达量平均为20%,经破碎、粗提、精制后IFN-βser17的比活达2×107IU/mg以上,纯度超过96%,其他检定项目也均符合规程要求.     

基因工程菌生产重组人组织因子的发酵研究

根据表达重组人组织因子基因工程菌的自身特点,在30L发酵罐上,通过控制发酵pH、葡萄糖浓度、诱导物磷酸浓度、搅拌速度及采用分批补料等方法,对重组人组织因子基因工程菌高密度发酵和高效表达的条件进行了研究。实验结果表明:诱导物终浓度低于0.1mmol/L,菌体密度OD60014,发酵周期10.5h,基因工程菌批发酵平均产量为37.41g/L,重组人组织因子表达量为6.56 mg/L。关键词:基因工程菌;高密度发酵;组织因子     

重组昆虫病原细菌Cip蛋白基因工程菌发酵条件的初步研究

昆虫病原细菌产生两种胞内晶体蛋白CipA和CipB,为新型的生物农药——昆虫病原线虫提供必需的营养。在已构建原核表达载体pET-15b-cipA和pET-15b-cipB的基础上,研究了这两种重组载体在不同宿主菌中的表达情况,重组菌的生长特性,摇瓶培养时表达重组Cip蛋白工程菌的发酵条件。结果显示:以E.coli BL21(DE3)为宿主菌,在LB培养基中培养至OD600为0.8～1.0时,1 mmol/L IPTG诱导8 h,CipA和CipB的表达量可达30.9%和32.6%,重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。     

人α1型干扰素克隆菌的表达研究：Ⅱ.宿主细胞对质粒表达的影响

干扰素（IFN）是某些生物体细胞抗病毒感染的一类蛋白质,可用于治疗病毒性疾病和某些癌症。但由人血液获得的干扰素其量极微,目前已能通过基因工程大量生产。编码干扰素的基因已能在大肠杆菌~[1,3]、醇母~[4,5]和哺乳动物细胞表达。~[6]但仍需对工程菌的表达规律作进一步研究,特别要弄清各种因素对被克隆的外源基因表达的影响。     

大肠杆菌发酵重组人干扰素—α2a的高密度,高表达

利用NBS公司的BioFloⅢ发酵罐,采用培养基流加的方式培养表达人干扰素的E．coli工程菌,结果湿菌重达128g／L,干扰素活性达98×1010U／L发酵液。     

重组人干扰素βser17工程菌发酵培养条件的优化研究

实验对重组人干扰素βser17(rhIFNβser17)工程菌的发酵培养条件进行了研究,通过实验优化确定了适宜rhIFNβser17表达的培养基、诱导剂使用浓度、诱导时期和诱导后的收获时间等,建立了发酵培养工艺,并在50L发酵罐进行了中试发酵,菌体收获量湿重达13.08g/L,rhIFNβser17表达量占菌体总蛋白的20.2%,纯化后比活性达2×107IU/mg蛋白以上,为进一步的下游开发奠定了基础。     

分泌型重组铜绿假单胞菌外毒素A基因工程菌的发酵研究

铜绿假单胞菌外毒素A(P .aeruginosaExotoxinA ,PEA)是该菌最重要的致病、致死性物质。目前对PEA已经进行了深入的理论研究 ,PEA的结构、生物学活性以及医学应用前景都已比较明确 ,从而推动了PEA的生产和纯化研究。PEA在天然情况下产量极低 ,通常每毫升培养物中PEA的产量在纳克水平以下。大量制备高纯度PEA的工作有赖于高效表达性工程菌株的建立。本研究将构建好的 pMAL PEA原核分泌型表达载体转化大肠杆菌BL2 1,利用摇瓶发酵研究PEA工程菌的最优表达条件 ,摇瓶发酵的最优培养条件为 :温度 30℃ ,摇床转速16 0r/min ,在含 0 …     

斑马鱼干扰素基因工程菌发酵条件及稳定性研究

采用液体传代的方法,研究表达斑马鱼干扰素(IFN)工程菌株pRSET-B-zIFN的遗传稳定性,并对其发酵工艺进行了优化.结果表明,构建的工程菌株遗传稳定性良好,在没有选择压力的情况下,传代100次质粒稳定性仍然保持100%,菌落形态及生长情况与原代菌无明显区别,SDS-PAGE结果显示zIFN表达量无明显差异.发酵条件研究表明,工程菌在LB培养基中,接种量为1%,诱导剂终浓度为0.1 mmol/L,zIFN的表达量最高.     

基因工程菌发酵生产L-乳酸研究进展

乳酸是重要的工业平台化学品。随着聚乳酸产业的兴起,对高质量L-乳酸的需求量也不断增加。为了进一步降低L-乳酸发酵成本,提高菌株的工业适应性,各种现代生物技术已经应用到L-乳酸发酵菌种的改造上来。文中简要综述了近年来使用乳酸菌、酵母、大肠杆菌及米根霉等基因工程菌株发酵生产L-乳酸的技术进展。     

人γ－干扰素生产工艺的研究

采用高密度发酵法发酵重组人γ干扰素产生菌ＳＷＩＮＦ／ＤＨ５α并成功地获得高表达、高产量的菌体,表达的γ干扰素蛋白占菌体总蛋白的６０％以上,２０Ｌ发酵液可收获２ｋｇ（湿重）菌体。纯化过程中采用尿素抽提、稀释、复性、浓缩后通过ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００柱的纯化方法,简化了纯化步骤,缩短周期,提高了蛋白回收率。纯化中未采用单抗亲和层析技术,使产品更为安全可靠。最终产品经ＳＤＳＰＡＧＥ检测纯度达１００％,核酸含量和热原均合格,Ａ２８０／Ａ２６０＞１５,比活性达１×１０７ＩＵ／ｍｇ,总回收率达４０％。这说明整个工艺适宜大规模生产的需要,具有实际应用价值。     

人γ－干扰素生产工艺的研究

采用高密度发酵法发酵重组人γ－干扰素产生菌SW－INF／DH5α并成功地获得高表达、高产量的菌体,表达的γ－干扰素蛋白占菌体总蛋白的60％以上,20L发酵液可收获2kg(湿重)菌体。纯化过程中采用尿素抽提、稀释、复性、浓缩后通过Sephacryl S-200柱的纯化方法。简化了纯化步骤,缩短周期,提高了蛋白回收率。纯化中来采用单抗亲和层析技术,使产品更为安全可靠。最终产品经SDS－PAGE检测纯度达100％,核酸含量和热原均合格,A280／A260>1．5．比活性达1×10⁷IU／mg,总回收率达40％。这说明整个工艺适宜大规模生产的需要,具有实际应用价值。