嫩茎花椰菜愈伤组织分化能力与过氧化物酶及吲哚乙酸氧化酶的稳定性

嫩茎花椰菜的过氧化物同功酶与其形态发生有一定关系。它在脱分化开始以前的增加,可能与细胞恢复分生能力有关;而在脱分化或分化开始后的变化,可能是脱分化或分化的结果。由于过氧化物酶易受外界因素影响,培养基中的激素也会引起过氧化物同工酶的变化,因而不能笼统地说过氧化物酶同功酶谱的变化可作为脱分化或分化的指标。     

枸杞髓组织培养中体细胞胚胎发生与过氧化物酶同工酶分析

枸杞髓组织在 MS+6 - BA0 .1mg/ L+NAA0 .5mg/ L培养基上诱导愈伤组织发生。在 MS+6 - BA0 .1mg/ L+NAA0 .5mg/ L+CH50 0 mg/ L培养基上继代培养 ,再转入 MS+6 - BA2 mg/L +NAA 0 .5mg/ L的分化培养基上进行分化培养。显微观察表明 ,在培养过程中愈伤组织细胞由非胚性细胞转变为胚性细胞 ,直至发育成体细胞胚胎和完整植株 ;电泳结果显示 ,体细胞胚胎发生的各阶段 ,其过氧化物酶同工酶发生相应的变化。     

阿司匹林促进体细胞胚胎发生

在今年七月组织培养协会的会议上,R.D.Shillito等人论述了一篇将乙酰水杨酸(或阿司匹林)加入培养基而促进原生质体团块形成的文章.最近,法国科学家J.-P.Rou等人报道,水杨酸和阿司匹林浓度为10～100μm时,促进了胡萝卜细胞悬浮培养物的体细胞胚胎发生.当培养基中加入的水杨酸浓度为50μm时,培养物产生的体细胞胚胎比对照高两倍.看来,阿司匹林和水杨酸对细胞生长和存活以及培养基的pH值均无损害.     

红豆草体细胞胚胎发生的激素调控及L—脯氨酸对它的促进作用

在 LS 附加1mg/1 BA+1mg/l KT 的培养基上,红豆草(Onobrychis viciaefolia Scop.)无菌苗的下胚轴切段产生淡黄色的愈伤组织。愈伤组织转移到 LS 附加1mg/l BA 的培养基上,诱导体细胞胚胎发生,而在 LS 附加1mg/l KT 的培养基上抑制体细胞胚胎发生。同时,发现红豆草胚性愈伤组织中游离脯氨酸的含量仅为非胚性愈伤组织的2/5。向培养基中加入L-脯氨酸可以促进红豆草体细胞胚胎发生。最适浓度为1000mg/l。     

小鼠胚胎组织、成体组织和胚胎癌细胞酯酶同功酶谱的比较研究

本文比较了129品系小鼠几种胚胎组织及其相应的成体组织的酯酶同功酶谱。几种胚胎组织都可检测到共同的具有相同迁移率的C区酶带和E区酶带。在这些胚胎组织的功能发育过程中,C区酶带被其它区带所取代;E区酶带在成体组织中有的活性降低,有的完全消失。从这些比较分析中可以观察到酯酶同功酶从“胚胎型”向“成体型”的转变。与这些结果相对应,F9-1和B7-2胚胎癌细胞克隆株及来源于早期胚胎细胞的细胞系细胞也都具有酯酶C和E的活性。     

红豆草体细胞胚胎发生早期过氧化物酶和酯酶同工酶酶谱变化

红豆草下胚轴切段接种于含1mg/l BA,1mg/l KT的LS培养基上,通过筛选和繁殖由一块外植体而来的淡黄色愈伤组织,而得到生理状态比较一致具有较高胚性发生能力的非胚性愈伤组织,将其转移到含1mg/l BA的LS培养基上后可诱导体细胞胚眙发生。在体细胞胚胎发生早期发现过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶酶谱均有规律性变化。过氧化物酶同工酶酶谱在胚性培养的第10天,两条明显的A_1、A_2带消失。酯酶同工酶各酶带之间酶活性比例在胚性培养过程中变化很大,培养后期酶带变得不明显或酶带数下降。说明胚性发生过程遗传信息的表达有选择性并为激素所调控。     

辣根过氧化物酶同功酶C3基因在毕赤酵母中的表达

目的：克隆与表达辣根过氧化物酶同功酶C3（HRPC3）基因。方法：用PCR方法从辣根的总DNA中,扩增得到一种辣根过氧化物酶同功酶C3基因,将PCR产物连接到pMD18-T载体上,测序证明正确后,再将目的基因正确插入到巴斯德毕赤酶母表达载体pPIC9K中,含有目的基因的重组pPIC9K质粒在毕赤酶母中进行表达与分析。结果：应用毕赤酶母作为受体菌,成功表达了HRPC3基因,其活性为56IU/L。结论：毕赤酶母直接表达出了具有生物活性的辣根过氧化物酶同功酶C3。     

长春花激素完全适应型细胞的生长和阿玛碱合成特性

从长春花激素依赖型细胞系(C20D)筛选出一种激素完全适应型的细胞系(C20hi),考察了两种细胞生长、阿玛碱合成和与吲哚生物碱生物合成相关的酶的活性,结果表明:在生长培养基上二者生长无显著差异,而C20hi细胞平均阿玛碱含量是C20D的31.9倍,在生产培养基上C20hi细胞生长较C20D快,C20hi平均阿玛碱含量是C20D的18.4倍.通过比较生产和生长培养基中C20hi细胞的色氨酸脱羧酶、异胡豆苷合酶和牛儿醇-10-脱氢酶活性,发现在生产培养基中培养细胞的3种酶活性均显著高于生长培养基,但与阿玛碱积累没有密切关系.研究结果还表明,通过5年的继代培养,激素完全适应型细胞系C20hi的阿玛碱含量是比较稳定的.     

激素对百合植株再生的影响

本研究设计了 1 5种不同配比的激素组合研究 2 ,4 -D和 6 -BA对百合鳞片叶器官发生和体细胞胚胎发生的影响。结果表明 :在 MS培养基上 ,BA可诱导外植体直接分化不定芽 ,其中 1 .0～ 2 .0 mg/L BA诱导不定芽的分化频率最高 ,6 .0 mg/L BA抑制不定芽分化 ;2 ,4 -D可诱导直接体细胞胚胎发生 ,其中 4 .0 mg/L2 ,4 -D诱导体细胞胚胎发生的频率最高 ,而 6 .0 mg/L 2 ,4 -D诱导体细胞胚胎发生的频率降低 ;当培养基中同时含有 BA和 2 ,4 -D时 ,既出现不定芽 ,又出现体细胞胚。当再生苗移入无激素的 MS培养基和含有 1 .0mg/L和 2 .0 mg/L IAA的 MS培养基上时 ,只有无激素的 MS培养基有利于根的形成。此外 ,鳞片叶的大小和外植体的接种方向也影响外植体分化     

Bodipy-C12在癌细胞过氧化物酶体中富集

目的:研究并比较Bodipy标记的月桂酸(Bodipy-C12)在癌细胞与正常细胞中的亚细胞定位。方法:在多种癌细胞和正常细胞的培养基中加入Bodipy-C12(1μg/m L),利用共聚焦显微镜活细胞定时间隔拍摄,结合不同细胞器的分子标记蛋白,观察Bodipy-C12五分钟内在不同细胞器中的定位。结果:在人肝癌细胞系HepG2细胞中,Bodpy-C12信号不仅仅存在于线粒体和脂滴,同时富集于过氧化物酶体中。我们分别采用Pex3-GFP、Pex14-GFP、GFP-Pex16、GFP-SKL和GFP-Pmp34等特异性定位的过氧化物酶体蛋白,确认Bodpy-C12信号富集于过氧化物酶体。此外,过氧化物酶体中Bodpy-C12信号的富集发生在更多的癌细胞系中,例如结肠癌细胞HCT116和乳腺癌细胞MCF7。不同的是,在正常细胞系如3T3-L1,NRK和COS7中,Bodipy-C12信号存在于线粒体和脂滴中,但未在过氧化物酶体中检测到。结论:Bodipy-C12信号存在于正常细胞和癌细胞的脂滴和线粒体中,且其在癌细胞过氧化物酶体中富集,而不存在于正常细胞的过氧化物酶体中,预示癌细胞中过氧化物酶体脂代谢的差异。     

向日葵幼胚培养中体细胞胚胎发生的观察

1.向日葵不同品种体细胞胚胎发生的情况不同。2.较高浓度的蔗糖有利于向日葵幼胚的体细胞胚胎发生。3.在同样条件下,2mm长的幼胚较其它时期的幼胚体细胞胚胎发生的频率高。4.在蔗糖浓度为17.5％并分别加入0.5—10.0ppm玉米素的Nitsch培养基中,向日葵幼胚产生体细胞胚胎发生的频率随着玉米素浓度的增高而增加。5. 2,4-D能使体细胞胚胎发生,但不能分化器官。6.切片观察表明:在含玉米素的培养基上,幼胚产生了胚性细胞团和胚状体。并多数发生于子叶与下胚轴的深层。胚性细胞团周围细胞退化,使其与周围组织之间形成间隙。     

辣根过氧化物酶同功酶C基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

无论从应用还是从理论研究角度,辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是一种非常重要的酶．ＨＲＰ基因克隆与表达将有利于更深入研究ＨＲＰ的结构与功能．利用反转录ＰＣＲ从天然植物辣根中分离和克隆编码辣根过氧化物酶同功酶Ｃ（ＨＲＰ－Ｃ）一个ｃＤＮＡ,并测定其序列．结果发现,从基因推导出的氨基酸序列与Ｗｅｌｉｎｄｅｒ报道的辣根过氧化物酶序列有９０．６％的同源性．将该基因连接到表达载体ｐＥＴ－２４ｂ上,利用抗ＨＲＰ多克隆抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,检测有少量目标产物表达．在诱导表达过程中,没有发现细菌生长受抑制或受明显的毒害     

豚鼠试验，过氧化氢酶／过氧化物酶试验与耐異菸肼结核菌间的关系

本文对85株秸核病人痰内的结核菌进行了研究,测定了过氧化氢酶、过氧化物酶对异菸肼的耐药性以及对豚鼠的致病力,并分析了这几项测定秸果的关系。主要结论如下： 1．对异菸肼敏戚的菌株,其过氧化氢酶及过氧化物酶均为阳性反应。对豚鼠有致病力。 2．对每毫升培养基中含1—10微克异菸肼产生了耐药性的结核菌,其过氧化物酶及过氧化氢酶大部分变为阴性反应。 在55株耐异菸肼菌株中,过氧化物酶呈阴性反应者90．9％,过氧化氢酶呈阴性反应者则为70．9％。若两种试验并用,则呈阴性反应者达94．5％。     

胡杨不定根原基发生的分生细胞结构特征及内源激素变化分析

以胡杨实生苗去根插穗为试材,采用显微技术、气质(GC/MS)联用技术和同工酶分析技术观察和研究了外源3-吲哚丁酸(IBA)对其不定根原基(干细胞)形成的影响.结果表明:(1)胡杨插穗培养在无IBA的培养基上,36 h时有大核细胞发生,60 h时大核细胞聚集成团形成根原基,72 h时生成不定根;而添加了IBA的培养基上插穗培养60 h时大核细胞分散,出现许多薄壁细胞,72 h时薄壁细胞变大,没有根原基的形成和根的发生,表现出细胞组织愈伤化,不再分化出干细胞.添加外源IBA抑制了胡杨插穗不定根形成.(2)组织化学观察显示,在无IBA的培养基上的插穗,60 h时具双环状核仁的干细胞细胞质浓,富含蛋白质;而此时添加了IBA的插穗,具双环状核仁的细胞细胞质很少,蛋白质含量也少.(3)整个胡杨不定根形成的过程中,内源激素IAA和ABA可能作为诱导根原基发生的重要信号分子;内源激素IAA和GA3处于一个较稳定状态,有利于不定根的形成.(4)过氧化物酶(POD)2b酶带的持续表达有利于根原基的诱导;淀粉酶在60 h时表达增强,是根原基发育的标志;根原基诱导时不需要酯酶,而根原基发育时需要酯酶.     

2,4-D浓度对胡萝卜体细胞胚胎发生及其同工酶的影响

在含有不同浓度2,4-D的MS培养基上生长的胡萝卜组织,培养26天后,不含2,4-D培养基上的培养物,其酯酶同工酶谱比在含有2,4-D培养基上的培养物少一条酶带8(图3)。过氧化物酶同工酶谱中,发现前者出现的酶带1(图4)在后者的酶谱中看不到。 胡萝卜的培养组织和完整的小植物皆具有分泌过氧化物酶和酯酶的能力。总过氧化物酶活力的变化与愈伤组织、胚状体和小植物的形成有一定关系。     

从遗传变异的培养物中再生性状一致的植株

植物组培研究者们普遍认为,“非分化”的细胞和愈伤组织培养物可产生体克隆变异。因此,在商业上研究人员依靠生长在固体培养基上的顶芽分生组织或芽外植体培养物来获得一致的植株生长。通过体细胞胚胎发生可再生小植株,这可以在液体培养基中进行,避免了很多操作过程,并提高了自动化。但体细胞胚胎发生通常包括一个中间细胞或愈伤的培养阶段,这意味着产生体细胞克隆变异具危险性。University of Geisenheim and Ahrensburg′s Institut fur Gartenbauliche Pflanzenzuchtung的T.Geier和同事们已发现,从细胞遗传变异植株的愈伤和悬浮培养物中可获得高度一致性的     

大鼠肝癌发生过程基因转录调控机理的研究 Ⅰ.与DNA重复顺序互补的RNA的比较

肝细胞癌变过程,除去在细胞形态和代谢活动方面发生变化外,而且还呈现出某些胚胎肝的表型,如甲胎蛋白和胚胎性同功酶谱等。这些胚胎性蛋白在肝癌细胞中的再现,可能是由于肝细胞基因表达的调控系统,在肝细胞癌变过程中发生了异常变化,以至使己分化成熟的成年肝细胞去分化,进而发展为恶变细胞。我们用二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌,在肝癌发生过程中,观察基因调控失调,及其与肝癌发生的关系。首先,     

微球菌的脂肪酶合成调节

本文介绍了微球菌１５０４胞外脂肪酶的代谢调节模式。发现在发酵培养基中,通过补加长链脂肪酸及其油脂,能提高脂肪酶的生产水平,而中、短链脂肪酸及其酯抑制产酶能力;高浓度的葡萄糖抑制产酶能力;补加不同浓度的橄榄油,适宜补加时间也应不同。水洗细胞脂肪酶的合成受橄榄油和油酸诱导,受葡萄糖和甘油阻遏,并发现脂肪酶的分解代谢阻遏主要发生在转录水平上。     

NK4基因转染对人卵巢癌细胞SKOV-3生物学特性的影响

目的 通过在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4基因表达片段,研究NK4对人卵巢癌的治疗作用,从而验证NK4可作为卵巢癌潜在的基因治疗新策略.方法 用NK4和荧光霉素表达质粒分别稳定转染人卵巢癌细胞SKOV-3.用West-ern blot检测细胞培养基中NK4蛋白表达,以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达.用MTT试剂盒绘制细胞生长曲线.用细胞划痕试验检测NK4对细胞转移的作用.结果 在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3,SKOV-3/LUC)细胞中无表达.磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3,SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达.c-Met表达在各组差异无统计学意义.三种细胞体外生长曲线差异无统计学意义(P＞0.05).细胞划痕试验表明SKOV-3/NK4划痕区域的细胞个数明显少于SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞.结论 NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化,并能抑制卵巢癌细胞体外活动能力,为应用NK4作为卵巢癌基因治疗方法提供了研究基础.     

吸胀对水稻种子愈伤组织诱导及其性状的影响

水稻种子经浸种吸胀处理后,浸种介质的pH下降,种子细胞透性增加;种子胚芽生长加快,种子愈伤组织诱导和生长均受抑制。种子可溶性蛋白谱和愈伤组织过氧化物酶同工酶谱亦发生变化,对所诱导的种子愈伤组织则有促进分化的后效应。此种后效应因品种及所采用的诱导培养基成分不同而异。