第Ⅷ凝血因子基因内限制性片段长度多态性(RFLP)的研究及其在甲型血友病基因连锁分析中的应用

本文系统地研究了广东地区汉族人群中FⅧ:C基因内BclⅠ,XbaⅠ和BgⅡ位点RFLP的基因频率。多态性位点BclⅠ,XbaⅠ及BglⅠ的切点阳性率分别为63.5%、43.5%和100%。对Bcll和Xbal多态性切点连锁情况研究显示,19.5%的Bcll切点阳性纯合子为Xbal切点杂合子,证明联合应用此两位点RFLP可以把甲型血友病基因连锁分析的有效率提高到65.9%。用RFLP连锁分析对两例甲型血友病家系中的女性进行了致病基因携带者检测,对另一例家系进行了基因产前诊断。     

限制性片段长度多态性（RFLPS）及其原因

DNA是绝大多数生物(RNA病毒除外)携带和传递遗传信息的复杂的生物聚合体。能被限制性核酸内切酶在特定的核苷酸顺序上切割,形成各种长度的DNA片段,通过电源能将这些片段分开。 生物个体间的差异,本质上是DNA水平上的差异。这是由于进化过程中染色体DNA上核苷酸顺序发生了改变,当这种改变涉及到限制性酶切位点时,酶切后产生的DNA片段长度     

自发性高血压大鼠原癌基因表达和限制性内切酶片段长度多态性分析

观察自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）的生长曲线、ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达和ｃ－ｆｏｓ基因酶切图谱的情况,与对照组京都维斯特大鼠（ＷＫＹ）进行对比。结果显示,在小牛血清作用下ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ生长速率和ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达明显大于ＷＫＹ;ｃ－ｆｏｓ原癌基因限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析表明,经ＢａｍＨ Ｉ或ＥｃｏＲ Ｉ酶切后的ＳＨＲ－ＷＫＹ的酶切图谱一致,同时也未发     

山羊品种间线粒体DNA限制性片段长度多态性研究

本试验利用ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｃｌⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨａｅⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ计１８种限制性内切酶,研究了来自欧洲,非洲及国内的５个山羊品种共计３３只个体的ｍｔＤＮＡ,共检测了２７处限制性态型,可归结为８种单倍型。结果表明,国内２个百品种的基本单倍型为ＢａｍＨⅠ－Ａ,ＢｃｌⅠ－Ｂ、ＣｌａⅠ－Ａ     

影响籼稻DNA限制性片段长度多态性检测的因素分析

对窄叶青（籼稻）和京系１７（粳稻）的ＲＦＬＰ进行了系统分析。结果表明，某种酶多态性检测能力与同时检测到此多态性的其余酶的数目之间存在极显著的正相关（ｒ＝０．９６２＊＊）。由此推论，籼粳稻大部分ＲＦＬＰ可能来自大范围ＤＮＡ的结构变化而不是碱基取代。ｃＤＮＡ克隆虽然具有高度的保守性，但却具有比基因组克隆更高的多态性检测能力。在实验使用的探针范围内，探针长度和检测到多态性无相关性。由探针检测到的多态性位     

自发性高血压大鼠原癌基因表达和限制性内切酶片段长度多态性分析

观察自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）的生长曲线、ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达和ｃ－ｆｏｓ基因酶切图谱的情况,与对照组京都维斯特大鼠（ＷＫＹ）进行对比．结果显示,在小牛血清作用下ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ生长速率和ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达明显大于ＷＫＹ;ｃ－ｆｏｓ原癌基因限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析表明,经ＢａｍＨⅠ或ＥｃｏＲⅠ酶切后的ＳＨＲ和ＷＫＹ的酶切图谱一致,同时也未发现ＳＨＲ的ｆｏｓ基因扩增现象．提示,ＶＳＭＣｓ的异常增殖和ｃ－ｆｏｓ原癌基因的表达异常与高血压的形成有关,而ｃ－ｆｏｓ原癌基因的过度表达可能是由于某些与基因转录调控有关的因素异常所致．     

人体基因组D14S13位点限制性片段长度多态性的研究

应用pCE1.2探针,分析了296个无关个体基因组D14S13位点Haelll酶解的限制性片段长度多态性（RFLP）,进行了等位基因频率的分布统计,发现至少含有66个等位基因,位点杂合性大于93％,在对8个家系93名相关个体的分析中,没有发现突变发生,此RFLP分析方法已初步应用于法医学的个人识别和亲权鉴定中,并对准确度进行了计算。》     

影响籼粳稻DNA限制性片段长度多态性检测的因素分析

对窄叶青(籼稻)和京系17(梗稻)的RFLP进行了系统分析。结果表明,某种酶多态性检测能力与同时检测到此多态性的其余酶的数目之间存在极显著的正相关(r=0.962**)。由此推论,籼粳稻大部分RFLP可能来自大范围DNA的结构变化而不是碱基取代。cDNA克隆虽然具有高度的保守性,但却具有比基因组克隆更高的多态性检测能力。在实验使用的探针范围内,探针长度和检测到的多态性无相关性。由探针检测到的多态性位点均匀地散布在水稻的12对染色体上,这可能是这两个品种所属的亚种之间的遗传距离较大的原因。     

水稻限制性片段长度多态性（RFLP）零等位现象的分子基础研究

零等位基因(nullallele)是指不能产生有功能的产物的等位基因。由限制性片段长度多态性(RFLP)揭示的零等位表现为在实验所用的严谨条件下一个探针与一个植物品种的DNA能够稳定地杂交,而与另一个植物品种的DNA杂交的信号很弱或者没有信号,这说明在后者的基因组中与该探针相应的区域发生了缺失、插入或染色体重排等较大范围的变异。本文利用水稻基因组随机探针RG684对52个水稻品种进行了RFLP分析,结果零等位主要出现在地理上分布于我国东北及日本一带较为典型的粳稻品种中。零等位的这种分布与有些研究者假定的水稻进化从野生稻→籼稻→粳稻的趋势相吻合。RG684的核苷酸序列分析表明其为基因组中没有编码功能的部分,这种序列的缺失或变异不会对植物的生存产生明显的影响。与果蝇gypsy转座子bx34e序列的比较发现RG684序列11403—1439处的37个碱基与其长末端重复顺序(LTR)有78.4%的同源性,作者推测水稻中RFLP零等位的产生可能与转座或类似转座的事件有关。     

中国普通野生稻核糖体RNA基因限制性片段长度多态性

对９８份普通野生稻、亚洲栽培稻及稻进行了核糖体ＲＮＡ基因间间隔区的限制性片段长度多态性分析。共发现３０种长度变异类型,组成４５种表现型。广西普通野生稻的ｒＤＮＡ间隔序列长度多样性最丰富,２４份材料中长度变异类型,     

凝血因子FⅧA链基因第1内含子内顺式调节元件的鉴定

探讨FⅧA基因表达的分子机制.凝胶阻滞实验(EMSA)结果证明,FⅧA基因第1内含子5′区的前12碱基与转录因子结合并由此调控基因表达.FⅧA基因第1内含子第12位碱基由C突变为A(内含子1( 12)C→A)导致与转录因子结合能力降低.构建不同的荧光素酶表达质粒Luc1、Luc2、Luc3、Luc4、Luc5、Luc6,并转染U937细胞和HepG2细胞.结果显示,如果Luc5(具有最高表达活性)的内含子1( 12)由C突变为A,启动子活性显著降低.与Luc5相比,突变后的Luc5的活性分别下降了52·9%(U937,P<0·01)和47·6%(HepG2,P<0·01).将Luc5与PN3 Sp1共同转染U937细胞和HepG2细胞后,Luc5的荧光素酶活性分别提高了42·4%(U937,与Luc5单独转染比较P<0·01)和54·9%(HepG2,与Luc5单独转染比较P<0·01),而突变后的Luc5(Mut)与PN3 Sp1共同转染则没有明显的改变.表明转录因子Sp1在FXA基因表达的重要性.这些结果也表明,内含子在FⅧA基因表达过程中起重要作用,为遗传性凝血因子Ⅷ发病机理的研究提供了新的证据.     

医学分子遗传学讲座 第五讲限制性片段长度多态性

每个个休在溃传上是不同的,而不同的本质不是 在基因产物＿匕而是在DNA水平上的差异。这些差异 大多数都是由于不编码蛋白质的区域和没有重要调节 功能的区域发生了中立突变,这些中立突变所构成的 DNA变异称为DNA多态性。DNA多态性本质是 由于进化过程中的各种原因引起染色体DNA中核营 酸排列顺序发生了改变,当这种改变涉及到限制性内 切酶识别位点时,利用限制性内切酶可将DNA切割 成不同长度的限制性片段。这类不同长度的限制性片 段类型在人群中所呈现的多态频率分布现象,就称为 限制制性片段长度多态性（RFLP)o RFLP具有广泛 的用途,它可以作为一种“遗传路标”,对人类基因组制 图提供必要的标记,当多态性顺序与人类遗传性疾病 位点连锁时,可作为遗传缺陷的产前诊断或是鉴别携 带者的标记,还可以应用于亲子鉴定和群体研究等方 面。     

医学分子遗传学讲座 第五讲 限制性片段长度多态性

每个个体在遗传上是不同的,而不同的本质不是在基因产物上,而是在DNA水平上的差异。这些差异大多数都是由于不编码蛋白质的区域和没有重要调节功能的区域发生了中立突变,这些中立突变所构成的DNA变异称为DNA多态性。DNA多态性本质是由于进化过程中的各种原因引起染色体DNA中核苷酸排列顺序发生了改变,当这种改变涉及到限制性内     

凝血因子FXIII A链基因第1内含子内顺式调节元件的鉴定

探讨FⅩⅢ A基因表达的分子机制.凝胶阻滞实验（EMSA）结果证明,FⅩⅢ A基因第1内含子5′区的前12碱基与转录因子结合并由此调控基因表达.FⅩⅢ A基因第1内含子第12位碱基由C突变为A(内含子1 (+12)C→A)导致与转录因子结合能力降低.构建不同的荧光素酶表达质粒Luc 1、Luc 2、Luc 3、Luc 4、Luc 5、Luc 6,并转染U937细胞和HepG2细胞.结果显示,如果Luc 5（具有最高表达活性）的内含子1(+12)由C突变为A,启动子活性显著降低.与Luc 5相比,突变后的Luc 5的活性分别下降了52.9％（U937, P＜0.01）和47.6％（HepG2, P＜0.01）.将Luc 5与PN3 Sp1共同转染U937细胞和HepG2细胞后,Luc 5的荧光素酶活性分别提高了42.4％（U937,与Luc 5单独转染比较P＜0.01）和54.9％（HepG2, 与Luc 5单独转染比较P＜0.01）,而突变后的Luc 5（Mut）与PN3 Sp1共同转染则没有明显的改变.表明转录因子Sp1在FⅩⅢ A基因表达的重要性.这些结果也表明,内含子在FⅩⅢ A基因表达过程中起重要作用,为遗传性凝血因子发病机理的研究提供了新的证据.     

基于沙眼衣原体ompl基因限制性片段长度多态性和测序法用于女性生殖道感染沙眼衣原体基因分型

沙眼衣原体D-K型见于女性生殖道感染,尤其是宫颈感染的主要病原体,基因分型针对编码主外膜蛋白(MOMP)编码基因(ompl)多态性,CT各型ompl基因长度略有差异,总长度均在1.1 kb左右,使用ompl基因限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)进行分型,但是不同的引物设计和实验条件,结果的判读不同,结合ompl基因测序法,能构建出不同实验条件下PCR-RFLP酶切图谱,便于临床判读,并且通过BLASTA及多序列比对发现ompl基因序列碱基变异。收集2010年1月至2014年5月在柳州市人民医院就诊的宫颈脱落细胞沙眼衣原体阳性女性,结合omp1基因测序法进行分型,建立反应体系,通过ompl基因测序结果比对,确定本实验条件的参考酶切图谱,用于临床标本的CT分型检测。基于ompl基因的PCR-RFLP技术是目前沙眼衣原体基因分型临床可运用的方法。     

四种白蚁的线粒体DNA限制性片段长度多态性研究(等翅目:鼻白蚁科,木白蚁科)

用６种限制性内切酶分析了４种白蚁的线粒体 Ｄ Ｎ Ａ 限制性片段长度多态性,根据限制性片段差异计算了４种白蚁之间的遗传距离,利用 Ｕ Ｐ Ｇ Ｍ Ａ 聚类分析法构建了分子聚类图。结果表明：尖唇异白蚁与散白蚁属关系很近,聚类分析结果显示应将其归于散白蚊属     

双向等位基因特异性PCR与限制性片段长度多态性基因分型方法比较

目的:比较双向等位基因特异性PCR(Bi-PASA)法与聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RFLP)法对EZH2基因单核苷酸多态性(SNPs)位点rs887569基因分型结果有无差异,并用Bi-PASA法对EZH2基因rs17171119位点基因分型后分析与结直肠癌(CRC)易感性的相关性。方法:提取96名CRC患者与100名体检健康者的外周血DNA,分别用Bi-PASA法与聚合PCR-RFLP法检测EZH2基因单核苷酸多态性(SNPs)位点rs887569基因型,对两种分型结果进行比较;使用Bi-PASA法对EZH2基因rs17171119位点进行基因分型后用病例-对照方法分析该SNPs在中国人群中的分布。结果:Bi-PASA与PCR-RFLP对EZH2基因rs887569位点基因分型的准确率分别为99.5%和100%;EZH2基因的rs17171119 SNPs位点多态性与结直肠癌易感性无显著相关性(P=0.938,OR=0.846,95%CI:0.586-1.221)。结论:Bi-PASA是一种简单有效检测SNPs的方法,分型结果较为可靠;rs17171119 SNPs位点多态性与结直肠癌易感性无关,但本结论还有待更大样本量基因分型的验证。