西瓜核心种质的AFLP指纹图谱和SCAR标记

西瓜(Citnllus lanatus (Thunb.) Mansf.)种质资源的鉴定与评价是对其有效利用的基础。以往的研究表明,西瓜是一种遗传资源特别狭窄的作物,在用同工酶、RAPD及SSR技术对西瓜种质资源进行鉴定时,发现很难将品种完全区分开来。本研究利用高效可靠的AFLP技术,对30个西瓜核心种质材料进行了遗传分析,最终建立了这30个材料的DNA指纹图谱。在该图谱中,每个材料均有其独特的“指纹”,材料之间可以相互区分开来。为了进一步利用AFLP分子标记,将重要抗病种质材料“P1296341”的AFLP特异带转化成了生产上可以直接利用的SCAR标记。     

萝卜品种指纹图谱SRAP与AFLP分析

应用SRAP与AFLP两种分子标记技术进行了萝卜品种鉴定分析。对萝卜基因组DNA的SRAP-PCR反应体系中引物、Mg2 、dNTPs浓度进行优化,确定最优体系为引物0.3μmol.L-1,dNTP 0.2 mmo.lL-1,Mg2 3.0 mmo.lL-1。对SRAP-PCR中的退火温度(50℃)设置了12个梯度处理,以em2-me2为引物时带型无明显差异。7个供试萝卜材料的SRAP和AFLP指纹图谱分析表明,供试材料均可被SRAP和14个AFLP引物准确鉴定,每对引物组合都产生独特的指纹图谱。11个SRAP引物组合共产生155条带,多态性条带84条。聚类分析与相对遗传距离(GD)表明,供试材料聚为4类,CB-03-2与SHCB-02-1亲缘关系最近(GD=0.054 9);齐虹大连和Heiseng的亲缘关系最远(GD=0.203 4)。基于16个AFLP标记引物组合分析结果表明,供试材料聚为3类,CB-03-2和SHCB-02-1的亲缘关系最近。SRAP与AFLP综合分析结果表明,供试材料可聚为3类,其中CB-03-2与SHCB-02-1亲缘关系最近(GD=0.047 6)。     

魔芋种质资源的AFLP分析

利用AFLP技术对13份魔芋种质资源进行了DNA多态性分析。从10对引物中筛选出2对引物扩增基因组DNA,共获得112条带,其中64条为多态性标记,每个引物平均提供56个标记信息。UPMGA法聚类分析结果表明:魔芋资源的遗传多态性比较丰富,西盟魔芋和珠芽魔芋的关系比较近,白魔芋和花魔芋的关系比较近。     

广西毛竹种质资源AFLP分析

采用扩增片段长度多态性分子标记方法,对收集于广西的11个种源33份毛竹种质进行了分析.结果表明：5对引物组合用于选择性扩增,共得到198条扩增带,其中多态性带47条(23．74％);11个毛竹种源间的亲缘关系较近,但仍存在着一定的遗传变异,它们之间的遗传距离 D 在0．0006~0．1369之间;UPGMA 聚类分析,可将供试的11个毛竹种源分为4大类,其中昭平种源和南丹种源各为一类,与其它两类较易区分. PCA 分析结果与聚类分析结果相一致;Mantel 检验结果表明毛竹各种源遗传距离与地理距离间相关性显著(r ＝0．5558,P ＝0．0160).说明 AFLP 分子标记能将 11个种源33份毛竹种质区分开,是毛竹种质资源鉴别的有效手段和方法.     

中国食用向日葵种质资源遗传变异的RAPD及AFLP分析

本研究采用RAPD和AFLP方法对23个中国不同地区的食用向日葵（Helianthus annuus L.)骨干品种进行了遗传变异分析,同时对两种标记系统进行了比较。26个RAPD引物产生了总计192条DNA条带,大小分布 于0.26kb-1.98kb之间,其中165条（86．12％）具有多态性,每条引物产生DNA条带的平均数为7．38。8对AFLP引物组合共产生了576条带,分布于100bp-500bp之间,其中的341条具有多态性,多态百分率为76．00％,每对引物组合产生DNA条带的平均数为72。RAPD方法检测的每位点有效等位基因数（1．76）大于AFLP（1．65）,AFLP标记位点的平均多态性信息量（PIC）（0．38）低于RAPD标记位点PIC（0．41）,但AFLP标记具有很高的多态性检测效率（Ai=38．52）。用RAPD标记分析23个食用向日葵材料的亲缘关系,Nei氏相似性系数分布在47．84％－82．06％,平均相似性系数为0．6495,而采用AFLP的Nei氏相似性系数分布在54．15％－83．52％,平均相似性系数为0．6884。RAPD数据的标准差为0．13,而AFLP数据的标准差为0．08。因此,采用RAPD和AFLP方法分析食用向日葵遗传变异,RAPD标记具有较低相似性系数和较高方差而AFLP则相反。源于两种不同标记的遗传相似矩阵的相关系数为0．51,说明采用RAPD和AFLP系统分析食用向日葵遗传变异得到的结果有一定的相关性,无论采用RAPD还是AFLP标记进行聚类分析,都将23个不同基因型的食用向日葵材料分成了三个类群。     

红豆杉种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的：通过对5份红豆杉种质资源的AFLP分析,探求各种质间的遗传多样性。方法：采用扩增片段长度多态性（AFLP）标记,在DNA水平上进行遗传多样性研究,筛选了32对选择性扩增引物,将扩增出的条带作为原始矩阵,用NTSYS-PC软件计算并分析了红豆杉种质间的相似度,构建了遗传系统进化树。结果：（1）SDS法提取的红豆杉基因组DNA质量较佳,能够满足AFLP分析的要求;（2）从32对选择性扩增引物中,筛选出10对多态性较强、带型较好、分辨率较高的组合;（3）构建了红豆杉AFLP指纹图谱,将5个红豆杉种质全部区分开来;（4）通过构建进化树,把5个种质分成3类。结论：红豆杉种质资源有丰富的遗传多样性。     

杜仲种质资源的现状及保护对策

在野外调查的基础上,根据杜仲的分布特点,划分了7个主要分布区,并对种内存在的形态差异进行了描述。在评述杜仲种质资源现状的基础上,对种质资源的破坏以及造成遗传流失的原因进行了分析。提出了有效保护杜仲种质资源的原理和方法,并强调了迁地保护的重要性。     

甜瓜（Cucumis melo L.）AFLP标记的多态性及聚类分析研究

利用AFLP技术对30个甜瓜材料进行多态性和聚类分析研究。从120对MseI和PstI引物中筛选出25对扩增效果好的引物,共扩增出262条多态性带。聚类分析结果新疆甜瓜中的夏甜瓜类型,新疆甜瓜中的冬甜瓜类型、美国粗皮甜瓜类型、日本甜瓜类型、梨瓜类型各聚为一组。上述材料的聚类分析结果与依据生态类型和地理起源的分类结果基本吻合,表明AFLP用于甜瓜种内不同材料间的遗传变异性分析是可行的。     

糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的AFLP指纹图谱分析

在对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的AFLP分析条件进行优化的基础上,利用该技术建立了14株产自不同地区的糙皮侧耳：DNA指纹图谱,并进行了数据分析。结果表明,在合成的14条引物的不同组合中,引物对E-3／M-3可以产生较多的DNA多态片段,E-AGC／M-CAT引物对的扩增效果最好,共获得184条DNA扩增带,其中多态性条带i101条,占54．89％。利用UPGMA法对所获数据进行聚类分析,计算得到糙皮侧耳菌株之间的遗传距离,发现不同品种间遗传距离差异较大,从0．192到0．754,说明糙皮侧耳的遗传多样性比较丰富。绘制的指纹分析树状图表明,14个糙皮侧耳菌株被分为6个组群,其中P17和杂3的相似性系数最高,达到了81．2％,而侧5与其他菌株的亲缘关系相对最远。     

萝卜品种指纹图谱SRAP与AFLP分析

应用SRAP与AFLP两种分子标记技术进行了萝卜品种鉴定分析。对萝卜基因组DNA的SRAP-PCR反应体系中引物、Mg²⁺、dNTPs浓度进行优化,确定最优体系为引物0.3 μmol·L^-1,dNTP 0.2 mmol·L^-1,Mg²⁺ 3.0 mmol·L^-1。对SRAP-PCR中的退火温度（50℃）设置了12个梯度处理,以em2-me2为引物时带型无明显差异。7个供试萝卜材料的SRAP和AFLP指纹图谱分析表明,供试材料均可被SRAP和14个AFLP引物准确鉴定,每对引物组合都产生独特的指纹图谱。11个SRAP引物组合共产生155条带,多态性条带84条。聚类分析与相对遗传距离（GD）表明,供试材料聚为4类,CB-03-2与SHCB-02-1亲缘关系最近(GD=0.054 9);齐虹大连和Heiseng的亲缘关系最远(GD=0.203 4)。基于16个AFLP标记引物组合分析结果表明,供试材料聚为3类, CB-03-2和SHCB-02-1的亲缘关系最近。SRAP与AFLP综合分析结果表明,供试材料可聚为3类,其中CB-03-2与SHCB-02-1亲缘关系最近(GD=0.047 6)。     

杜仲内生真菌类群与分布的初步研究

从采自江苏和陕西的杜仲(Eucommia ulmoides)的组织中共分离获得254株内生真菌,根据形态学特征鉴定分属于9个属。研究结果表明从不同地点杜仲组织中以及从杜仲不同部位组织中分离获得的内生真菌的类群与分布存在明显差异。     

杜仲橡胶合成相关酶基因HMGR的克隆与表达分析

为解析HMGR基因在杜仲橡胶生物合成中的作用,本研究以杜仲良种华仲6号叶片和果皮为材料,参考杜仲基因组和转录组数据,克隆了杜仲HMGR基因,命名为Eu HMGR,全长1770 bp,编码590个氨基酸。实时荧光定量PCR测定结果显示,EuHMGR基因在果皮中的表达量于5月中旬达到最大值,而在叶片中的最大值出现在7月中旬。通过索氏提取测定相应时期果皮和叶片的含胶量表明,果皮中的含胶量从4月中旬到5月下旬迅速增加,而叶片中的含胶量一直平稳增长。分析不同发育时期果皮和叶片Eu HMGR基因表达量和含胶增长速率相关性发现,果皮Eu HMGR基因在不同发育时期的相对表达量和含胶增长速率呈显著正相关,而二者在叶片中无明显相关性。因此,推测Eu HMGR基因的表达与杜仲果皮中橡胶生物合成相关。     

杜仲叶片和叶柄愈伤组织的诱导和植株再生

本实验以5~6年生杜仲叶片及叶柄为外植体,研究了杜仲愈伤组织诱导及植株再生的方法。结果表明:接种于补加NAA(2.0~4.0 mg/L)或BA(1.0 mg/L)+NAA(2.0~4.0mg/L)的MS培养基上的叶片和叶柄,经21~28d培养后,脱分化形成绿色或浅绿色致密愈伤组织,频率达到70%以上。绿色致密愈伤组织在补加BA(2.25~2.75 mg/L)+NAA(0.15 mg/L)的MS培养基上经过1~2次继代之后,即出现茎芽分化,频率在15%以上,只是其中许多都是畸形苗,正常苗频率较低。此问题尚在研究之中。选择生长健壮的再生植株,切除其基部愈伤组织,然后将切口浸泡在250mg/L无菌ABT生根粉溶液中3~5sec,再插入1/4强度无激素MS培养基中, 2~3周后,在苗基部长出1~3条白色粗壮的不定根,生根频率在60%以上。     

杜仲,秤锤树花粉的超低温贮藏研究

本文研究了影响杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)和秤锤树(Sinojackia xylocarpa Hu.)花粉超低温贮藏的一些因素,包括花粉含水量、贮藏时间、冻解方法等。利用差热分析(DTA)技术预测花粉在液氮(LN)中安全贮藏含水量的范围。结果表明,含水量的影响最显著。DTA 有望用于预测花粉在 LN 中安全贮藏含水量的范围。     

杜仲化学成分研究概况

本文综述了杜仲的药理、临床应用及其木质素类成分的结构类型及主要类型的结构测定方法。     

杜仲含胶细胞的形态学研究

通过变性处理、整体透明及离析等方法的综合运用,可见杜仲体内含胶细胞是一种细长、两端膨大的单细胞,含胶细胞的分枝比较常见,大多为二叉状分枝,罕见三叉状分枝。整体透明后可见含胶细胞在叶片和果皮中的分布状况,同时对含胶细胞的形态学指标进行了测量。     

中药杜仲原植物的分子鉴定

杜仲是我国特有贵重中药材,市场供不应求,各地出现许多伪品,为克服目前仅依据形态、显微特征及理化性状进行鉴别的不足,本研究旨在运用分子标记技术鉴定中药杜仲Eucommia ulmoides Oliv的真伪。采用PCR产物直接测序法测定杜仲原植物matK基因序列,通过Clustal软件将其与GenBank中同源序列进行排序比较,分析杜仲序列特征。结果:测定的杜仲matK序列长度为1140bp,同源序列比较分析表明,杜仲matK序列中存在32个特异性位点,其中特异性A、T、C、G位点分别为8,2,11,11,序列中有一个GAC插入为杜仲所独有。matK基因是良好的分子标记,能够为杜仲原植物鉴定提供足够的特异性变异位点,matK基因序列的测序分析可成为杜仲正品鉴定的有效手段。