树鼩细菌感染模型的建立及抗菌药物的治疗效果评价(英文)

在抗微生物感染药物开发过程中, 动物模型是必不可少的。虽然目前已经用啮齿类动物建立了一些细菌感染动物模型, 但在小型灵长类动物中还很少见。这里首次报道两个树鼩细菌感染动物模型。第一种是在三度烫伤后的皮肤表面接种 5×106 CFU 的金黄色葡萄球菌构建的皮肤烫伤感染模型。这个数量的金黄色葡萄球菌可以造成 7 d 持续性感染, 并且在第 4天可以看到明显的炎症反应。第二种是用绿脓杆菌构建的涤纶补片感染模型, 接种 2×106 CFU 的绿脓杆菌同样可以引起持续 6 d 感染, 并在第三天在伤口处观察到大量的脓液。进一步用这两种模型评价头孢哌酮钠和左氧氟沙星的治疗效果。左氧氟沙星和头孢哌酮钠在皮肤烫伤感染模型中能分别将 100 mg 皮肤组织中的细菌降低到 4log10 和 5log10 CFU, 并且在涤纶补片植入感染模型中这两种抗生素都能显著地将感染的细菌降低了 4log10 CFU (P<0.05)。结果表明用金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌成功构建了两个细菌感染的树鼩模型。此外, 树鼩对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌很敏感, 适合用于构建细菌感染动物模型和评价新的抗细菌感染药物的效果。     

烧烫伤创面感染的小鼠模型构建

目的探讨一种简单、稳定的烧烫伤创面感染的小鼠模型构建方法,以便进行相关烧烫伤创面修复研究。方法取30只BALB/c小鼠,采用自制木质烫伤板,沸水浴法烫取直径8 mm的圆形创面,烫伤时间分别为5 s、10 s、15 s。伤后48 h,取创面组织进行HE染色观察,筛选最佳创面烫伤时间。另取72只小鼠制成深Ⅱ度烫伤创面,采用擦刮法分别接种20μL菌浓度为1×106、l×107、1×108CFU/mL金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923的菌液。接种细菌后72 h,取创面组织HE染色观察创面炎症反应情况,并测定3、7、14 d的皮肤菌负荷,筛选最佳的细菌接种浓度。最后,按最佳条件建模后,观察创面的完全愈合时间以及创面愈中、愈后的组织学变化,以确定此创面感染模型是否建立成功。结果组织学结果表明,10 s为深Ⅱ度创面的理想致伤时间,最佳接种菌浓度为l×108CFU/mL,此时期,14 d内菌负荷均高于l×105CFU/g。该模型的创面愈合时间(21±0.95 d)较正常创面愈合时间(15.92±0.34 d)明显延长(P<0.01),炎性反应明显,愈后不佳。结论烧烫伤创面感染的小鼠模型构建成功,可作为感染创面防治研究的实验动物模型。     

抑菌生防治大鼠烫伤创面大肠杆菌感染的实验研究

本实验将大白鼠背部烫伤后,用大肠杆菌涂抹创面,分别用BS_(224)菌(抑菌生)及AG—SD(磺胺嘧啶银霜)处理创面,以观察抑菌生对动物烫伤感染的防治效果。结果表明:抑菌生对有一定耐药性(但对AG—SD不耐药)的大肠杆菌引起的烫伤局部感染具有较强的防治功效,其作用和疗效优于AG—SD。     

MRSA气溶胶诱导烫伤SKH-1无毛小鼠皮肤感染合并肺炎模型

目的探讨烫伤条件下,建立MRSA气溶胶致SKH-1无毛小鼠皮肤感染合并肺炎模型的方法及其评价指标。方法 48只SKH-1无毛小鼠,随机分成PBS对照组,单纯感染组和烫伤合并感染组。合并感染组小鼠皮肤烫伤后,MRSA（ST-239）气溶胶呼吸道感染,采用体重、血常规、菌血症率、皮肤和脏器荷菌量、病理组织学变化和分子生物学等指标对模型进行综合评价。结果与其他两组相比,合并感染组小鼠第3天体重下降明显;白细胞数显著增多;菌血症率达100%;皮肤和肺荷菌量较高,分别达108CFU/g和106CFU/g;镜下观察皮肤和肺炎症病变明显;免疫组化结果显示皮肤组织内CD138呈阳性表达;multi-PCR测定感染组织内nuc和mecA基因均为阳性。结论 SKH-1无毛小鼠烫伤再辅以MRSA气雾攻击的方式,可成功建立能够模拟临床上烧烫伤患者继发MRSA肺炎的动物模型,此模型对于抗MRSA药物药效评价研究具有重要临床应用价值。     

静脉注射抗β-内啡肽血清对大鼠烫伤休克的影响

本实验在大鼠烫伤后,立即静脉注射不同剂量的抗β-内啡肽血清,观察动物血压、心率、呼吸及存活时间的改变。结果发现:(1)给予抗β-内啡肽血清后,烫伤动物的平均存活时间明显延长(P<0.01),且随抗血清剂量的增加呈明显的剂量依赖关系。(2)静脉注射抗β-内啡肽血清后,烫伤大鼠的血压下降被延缓,烫伤后60至120min时尤为明显。(3)烫伤大鼠的心率减慢在静脉注射抗β-内啡肽血清后也被延缓,这种影响出现早,但持续短。(4)抗β-内啡肽血清可使烫伤动物的呼吸频率保持相对恒定,且这种作用持续时间较长。实验提示:抗β-内啡肽血清对烫伤动物的心血管及呼吸功能有一定的改善作用,延缓烫伤休克的出现,使动物烫伤后存活时间延长,间接提示β-内啡肽参与烫伤休克。     

初始接种量对Bt33菌株孢子含量的影响

在温度 30± 0 5℃、转速 180r/min的条件下 ,用Bt发酵培养液对Bt33菌株进行振荡培养 ,考察不同接种量和液培时间对孢子含量的影响。结果表明 ,将孢子含量为 2 5× 10 9CFU ml的母液按 1%～ 15 % (V V)的比例接种后培养 33～ 5 0h ,9%和 12 %接种量处理能产生 8 5× 10 9CFU ml以上的孢子浓度。通过拟合逻辑斯蒂生长模型 ,发现该菌在上述液培条件下的最大孢子含量为 1 0 3× 10 1 0 CFU ml。     

茄病镰刀菌致ICR小鼠局部皮肤感染的实验研究

目的建立茄病镰刀菌感染皮肤的ICR小鼠模型。方法将茄病镰刀菌三个不同浓度的菌悬液分别接种于正常和免疫抑制ICR小鼠受损及正常未受损的皮肤,于接种后第7、14、21、28天处死动物,取皮疹和各脏器进行真菌镜检、培养和组织病理学检查。结果正常和免疫抑制组皮肤受损的小鼠均出现皮疹,而免疫抑制组皮疹程度重,持续时间长,且真菌镜检、培养及组织病理学大都可见菌丝。皮肤未受损的小鼠不发生皮疹。实验小鼠均未出现系统播散。结论接种109CFU/mL或1010CFU/mL茄病镰刀菌的孢子悬液于免疫抑制ICR小鼠擦伤的皮肤,可有效造成ICR小鼠的茄病镰刀菌皮肤感染。     

海洋红酵母的液体培养

目的探讨提高海洋红酵母的液体高密度培养方法。方法在摇瓶培养条件下,测定温度、pH、装液量、接种量及摇床转速对海洋红酵母BY2菌株生长的影响,进一步放大培养至50L发酵罐,在培养过程流加氨水以控制pH稳定在5.3~5.5的条件下,考察不同葡萄糖浓度对海洋红酵母BY2菌株发酵菌量的影响。结果摇瓶最适培养条件为温度25℃,pH 5.5,接种量8%、装液量40mL/250mL三角瓶、摇床转速200r/min,在此培养条件下,24h时菌量达到8.9×108 CFU/mL;扩大至50L发酵罐,葡萄糖初始浓度为40、60、80、100g/L各罐20~24h时的菌量相应达到26.6×108、29.5×108、47.8×108、66.8×108 CFU/mL。结论提高初始葡萄糖浓度,流加氨水稳定发酵过程的pH,可以显著提高BY2菌株的发酵菌量。     

PCR-DGGE法评价连续培养模型中肠道菌群的多样性

目的建立人体肠道菌群连续培养模型,验证连续培养模型培养肠道菌群的可行性和稳定性。方法建立连续培养系统,把正常人粪便接种于发酵罐中培养,通过活菌计数和PCR—DGGE法分析连续培养系统中菌群的多样性变化。结果连续培养系统中菌群数量由接种前的10^10～10^11CFU／ml降至10^8-10^9CFU／ml并最终达到稳态;PCR—DGGE法分析结果表明,菌群的多样性指数稳定,各条带均匀度趋于一致。结论连续培养模型能较好模拟人体肠道微生态环境,再现了肠道菌群组成的多样性,可作为肠道菌群培养及菌群相关性研究的离体模型。     

纳洛酮对大鼠烫伤休克的影响

36只烫伤大鼠,分为纳洛酮组和盐水对照组。两组动物侧脑室分别注射纳洛酮和生理盐水,观察纳洛酮对烫伤休克的影响。 结果表明:纳洛酮组大鼠的存活率高于盐水对照组。纳洛酮组动物烫伤后2小时存活率为83％,烫伤后4小时存活率为39％;盐水组动物烫伤后2小时存活率为44％,烫伤后4小时存活率为5.6％。纳洛酮组血压下降和心率减慢的进度也较慢,烫伤后180分钟血压才降低到63％,而盐水组在烫伤后90分钟血压已降低到62％。纳洛酮组动物的呼吸和体温变化也较慢。这些结果提示:纳洛酮具有一定的抗烫伤休克的作用。     

地衣芽胞杆菌对实验性家兔阴道炎影响的研究

目的通过探讨地衣芽胞杆菌活菌制剂对实验性家兔细菌性阴道病的影响,恢复家兔阴道微生态平衡和正常菌群环境。方法（1）采用注射用氨苄西林和甲硝唑生理盐水溶液注入家兔阴道进行冲洗,建立家兔阴道脱污染动物模型。（2）取40只阴道脱污染家兔,其中20只接种大肠埃希菌,20只接种金黄色葡萄球菌,建立家兔阴道感染模型。（3）地衣芽胞杆菌对家兔阴道菌群失调的调整作用：采用不同浓度的地衣芽胞杆菌菌液（10^6CFU／ml、10^8CFU／ml、10^9CFU／ml）对感染家免阴道进行接种,分析和考察地衣芽胞杆菌对家兔阴道菌群失调的影响以及对家兔阴道黏膜的影响。结果（1）动物经过金黄色葡萄球菌感染,通过地衣芽胞杆菌治疗后,动物阴道内芽胞杆菌、肠杆菌、乳杆菌数量明显上升,葡萄球菌数量明显下降,自细胞数量减少,黏膜红肿减轻、分泌物减少,治疗作用明显。（2）大肠埃希菌感染动物经地衣芽胞杆菌治疗后,动物阴道内芽胞杆菌、乳杆菌数量明显上升,肠杆菌数量明显降低,白细胞数量减少,黏膜红肿消失、分泌物减少。结论地衣芽胞杆菌对实验性家兔金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌阴道炎的治疗有效。地衣芽胞杆菌与乳杆菌的作用相似,具有维持阴道菌群平衡的作用。     

小鼠皮下脓肿模型及其在中草药抗菌作用研究中的初步运用

小鼠对化脓性球菌皮下感染有较强抵抗力。通常皮下接种10~7—10~8以上的金黄色葡萄球菌才能形成局部脓肿。我们利用胃粘液素可以提高动物敏感性的道理将少量化脓性细菌接种于小鼠皮下获得了脓肿病变,并利用它对一些中草药及部分中草药的粗提物进行了抗菌作用的体内研究。     

铜绿假单胞菌重组Bb-OprI疫苗免疫及PA01株感染后小鼠脾细胞因子IL-17和Treg的变化

目的:研究铜绿假单胞菌重组Bb-OprI疫苗免疫及PA01株攻击后小鼠产生的保护力,及脾细胞因子IL-17和Treg的变化。方法:将5×10~9CFU的Bb-Opr I疫苗灌胃接种BALB/c鼠,每周3次,连续3周;于初次接种后4周,将5×10~6CFU的PA01株滴鼻攻击小鼠,攻击后2周处死小鼠,分离肺组织和脾脏,培养肺组织的细菌并进行菌落计数,以铜绿假单胞菌抗原(PaAg)诱导培养脾细胞,PCR扩增IL-17和Foxp3基因。结果:Bb-Opr I疫苗组小鼠的肺组织细菌计数(0.46±0.09)×10~8CFU明显低于空载体对照组(5.42±0.79)×10~8CFU和Bb对照组(6.20±0.95)×10~8CFU(P0.01),从疫苗组小鼠的脾细胞DNA可扩增出380 bp的IL-17和250 bp的Foxp3基因。结论:重组Bb-OprI疫苗可诱导小鼠产生Th17和Treg免疫应答,从而抵抗PA01株感染并维持免疫稳态。     

城市周边农田景观中非农生境与土壤动物的协同关系——以沈阳市沈北新区为例

农田景观中非农生境对生物多样性保护、耕地多功能性和农业产量等具有重要影响.本文选择中国城市化过程中生物多样性保护与农业高产需求相互冲突的典型地区沈阳市沈北新区为研究区,采用信息熵模型划分为城市近郊、城市边缘区和乡村区域,采用手捡法和Baermann 法调查,鉴定了节肢动物和土壤线虫,并通过线性回归分析确定了非农生境类型、结构及数量与土壤动物的协同关系.结果表明： 沈北新区农田景观的非农生境斑块面积均小于1 hm².随着与城市中心距离的增加,非农生境类型和比例逐渐增加,面积比例呈倒“U”型变化,斑块数量比例从8.6%增加到27.8%;土壤动物个体数呈现“U”型变化,物种量无明显变化规律.乡村和城市近郊的非农生境斑块数量比与土壤动物个体数呈正向协同关系,城市边缘区无明显规律;非农生境面积比与土壤动物个体数均呈反向协同关系;非农生境斑块数量比和面积比与土壤动物物种量均无明显协同关系.     

青纶纤维接枝改性后抗菌作用的实验观察

目的观察经接枝改性后FFA-3和FFS-1纤维织物的抗菌作用.方法采用容器振荡法,溶液为生理盐水,纤维含量为2.5%,受试菌接种量为105～106CFU/ml,作用12h.结果 2种纤维中的大肠埃希菌存活菌数均为0;葡萄球菌存活菌数分别是1.02×104和4.16×103CFU/ml.而对照纤维中2种受试菌存活菌数分别为1.6×105CFU/ml和2.99×104CFU/ml.结论 FFA-3和FFS-1纤维织物有一定的抗菌作用.     

益生枯草芽胞杆菌B15的性能检测及培养条件研究

对筛选得到的枯草芽胞杆菌B15进行了产酶及拮抗性能的检测,结果表明该菌株能够分泌淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶,同时对常见病原体有一定的拮抗作用,具有作为益生菌进行发酵和研制微生态制剂的潜力。采用单因子试验,对B15菌株的培养液组成（碳源、氮源）及培养条件进行了研究,结果表明：以1.5%葡萄糖及0.5%酵母浸出物制成的培养液,在35℃、初始pH6.5左右,装液量为20 ml/250 ml,接种量2%的条件下培养B15,可将活菌数目从原始的1.15×109CFU/ml提高至1.61×109CFU/ml。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌系统性感染小鼠模型的制备

目的采用临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染ICR小鼠,建立MRSA系统性感染小鼠模型。方法采用连续3 d腹腔注射环磷酰胺(100 mg/kg)进行免疫抑制后,将浓度为1×107cfu/m L的MRSA菌液经尾静脉接种ICR小鼠,通过生存分析、外周血白细胞计数、组织载菌量和病理学检查对模型进行评价。结果 MRSA接种后第2天小鼠开始死亡,14 d内累积死亡率达60%;外周血白细胞总数显著升高,细菌在多个器官定植,载菌量由高到低依次是肾、关节、肺、肝和脑,肾载菌量高达109CFU/g,关节、肺、肝和脑的载菌量范围在104~109CFU/g。病理观察显示肾、心脏、肺、肝、脑和关节多器官感染的组织病理学改变。结论采用环磷酰胺免疫抑制后静脉接种MRSA的方法首次成功建立MRSA系统性感染小鼠模型,该模型可应用于MRSA发病机理及药物筛选等研究领域。     

綪纶纤维接枝改性后抗菌作用的实验观察

目的　观察经接枝改性后 FFA- 3和 FFS- 1纤维织物的抗菌作用。方法　采用容器振荡法 ,溶液为生理盐水 ,纤维含量为 2 .5 % ,受试菌接种量为 10 5～ 10 6 CFU/ml,作用 12 h。结果　 2种纤维中的大肠埃希菌存活菌数均为 0 ;葡萄球菌存活菌数分别是 1.0 2× 10 4和 4.16× 10 3CFU/m l。而对照纤维中 2种受试菌存活菌数分别为 1.6× 10 5 CFU/ml和 2 .99× 10 4CFU/m l。结论　 FFA- 3和 FFS- 1纤维织物有一定的抗菌作用     

金黄壳囊孢菌侵染过程中银中杨锌指蛋白基因的表达

研究了银中杨接种金黄壳囊孢菌后锌指蛋白基因的表达,为林木抗病遗传育种工作奠定基础。从杨树上分离得到了一株杨树烂皮病菌(CHH001),测定其对银中杨的致病力,并采用形态学和ITS-PCR鉴定方法鉴定该菌株为金黄壳囊孢菌。采用实时定量荧光PCR技术对银中杨接种金黄壳囊孢菌后锌指蛋白基因的表达进行了研究。实验结果显示,ZFP1和69-Ⅳ-2-4在接种后表达水平持续上升,ZFP1在48 h的基因表达量分别为烫伤对照和空白对照的4.21倍和3.11倍;69-Ⅳ-2-4在48 h为烫伤对照和空白对照的9.56和7.06倍。ZFP1和69-Ⅳ-2-4在接种前期高表达,表明可能参与了植物与病原物的识别过程和防御反应。     

结核DNA疫苗免疫策略研究进展

近年来,结核DNA疫苗的研制得到飞速发展,在传统结核DNA疫苗的基础上构建新型DNA疫苗以及基于结核DNA疫苗的PrimeBoost免疫策略的研究成为热点,新的接种途径及接种技术有助于提高DNA疫苗在试验动物的免疫保护作用,同时对结核DNA疫苗的安全性也不可忽视。