小鼠胚胎及生后发育的肾上腺皮质的组织学与组织化学研究

胚龄１３日小鼠肾上腺结构尚未形成,在肾附近可见两群细胞。１５日两群细胞融合,呈一新月形小体,外包被膜,内含两类细胞,一类胞体较大,染色较深,另一类胞体较小,染色浅。１７日,胞体大染色深的细胞形成团索状,发育成皮质细胞;另一类细胞则迁移至中央,形成髓质。组织化学研究显示,胎龄１５日及以后的肾上腺皮质细胞３β－羟甾体脱氢酶（３β－ＨＳＤＨ）、脂类、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、亮氨酸氨基肽酶（ＬＮＡｓｅ）均为阳性。以上一些酶活性的出现提示１５日及其后胚鼠,生后１～６０天小鼠的肾上腺皮质都有分泌甾体激素之功能。     

小鼠早期胚胎发育过程中TGF-α和EGF-R mRNA的表达

This study was conducted to examine the activity of TGF α and EGF R mRNA using the RT PCR technique in the early embryonic development of the mouse. Expression of TGF α mRNA was initially observed in the 8 cell stage embryo of the mouse. The level of expression gradually increased in the morula and blastula. Expression of EGF R mRNA was initially observed in the 4 cell stage embryo of the mouse and 8 cell stage embryo;morula and blastula all expressed EGF R mRNA and the levels of expression had not changed. These results confirm that epidermal growth factors play a key role in early embryonic development of the mouse, especially TGF α which can stimulate and regulate embryonic development via the autocrine system.     

H102对APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白和淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响

目的:研究H102对APP695转基因模型小鼠脑内淀粉样蛋白和淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响方法:9月龄转基因小鼠随机分为模型组和药物注射组,正常对照组采用月龄和性别与之相匹配的C57BL/6J小鼠。药物注射组给予侧脑室注射H102,每只每次3μl,连续10d;模型组和正常对照组给予等体积NS。应用免疫组织化学结合刚果红组织学染色,普通光学显微镜观察海马和颞叶皮层蛋白表达的变化。免疫印迹法检测小鼠大脑皮层APP蛋白的表达。结果:Aβ和APP免疫组化染色结果显示对照组海马CA1区神经元胞浆着色呈阴性或弱阳性,模型组较对照组阳性细胞增多,表达增强,胞浆着色明显加深。药物注射组同模型组相比,胞浆着色变淡,表达减弱。刚果红染色观察转基因小鼠模型组和H102注射组大脑颞叶皮层和海马的淀粉样斑块,可见H102注射组淀粉样斑块数较模型组明显减少。正常对照组未见阳性淀粉样斑块。免疫印迹检测显示模型组APP蛋白表达明显增加,给药组与模型组相比具有统计学意义。结论:APP695转基因小鼠大脑CA1区Aβ蛋白和APP蛋白表达增加,H102能够明显抑制该转基因小鼠Aβ蛋白和APP蛋白表达。     

模拟微重力环境对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响

90年代初,美国航空航天局(NASA)设计研制出一种转壁式生物反应器(Rotating Wall Vessel Bioreactor,RWVB)。采用RWVB进行基地试验时,意外地发现离体细胞在RWVB中呈现高密度聚集,并形成较大的组织样结构。RWVB的核心结构是由两个同心圆柱体构成的旋转培养装置。将细胞与培养液置入内、外圆柱体之间,整个装置绕水平纵轴旋转,使培养物长时间保持悬浮状态。由于在旋转过程中     

CWE纯系小鼠脑组织发育过程中细胞癌基因及其表达研究

 本文以Ha-ras.c-fos、c-myc、v-erbB、mos五种癌基因片段为分子探针,应用斑点杂交技术,对CWE纯系小鼠脑组织发育的四个时期(胚胎期、新生期、性成熟期、体成熟期)的RNA进行分子杂交分析。发现:在实验各期中这几种癌基因的表达有较明显的变化。Ha-ras、c-fos、c-myc基因的表达在胚胎期和新生期脑组织中较高;v-erbB基因的表达在性成熟期脑组织中较高;mos基因在实验各期均无表达。DNA斑点杂交结果:小鼠脑组织发育各期均未观察到癌基因扩增现象。Southern杂交结果:CWE小鼠发育的各期均显示:5.4kb、3.4kb、1.8kb、1.0kb四条c-fos基因区带;7.4kb、4.5kb、3.4kb三条c-myc基因区带。结果表明:不同细胞癌基因在小鼠胚胎发育和胚后发育中有不同的表达。     

胚胎早期发育过程中核仁前体的研究进展

核仁前体存在于卵母细胞及早期胚胎中,由于核仁前体在卵母细胞中的含量较少且结构致密,目前,只有少数核仁前体组分得到了鉴定.核仁前体结构的完整组成尚未被详细解析,明确核仁前体在胚胎早期发育过程中发挥的作用及其机制尚存挑战.早期的观点认为:核仁前体虽不具备加工rRNA及生成核糖体的功能,但该结构为纤维颗粒状核仁的生成提供了物质基础,从而使发育后期胚胎重获核糖体生成能力.近期,这一观点逐步得到了修正.基于显微操作技术的核仁前体转移实验证实:母源核仁前体在胚胎早期发育过程中发挥关键作用,且发挥作用的时间窗口限定在受精至原核期之间.核仁前体可参与染色质重塑过程并维持着丝粒稳定,进而影响胚胎早期发育.本文主要综述了核仁前体的结构功能特点及发挥作用的潜在机制,从核仁前体的角度为拯救早期胚胎的发育潜能提供新思路.     

小鼠植入前胚胎及几种组织中IFRG15的差异表达研究

为进一步研究干扰素α应答基因IFRG15（Interferon responsive gene 15）在小鼠整个发育过程中的表达规律,从植入前胚胎及2、5、16周龄的雌、雄昆明小白鼠心、肝、脾、肺、肾、肌肉、卵巢或睾丸等组织中提取总RNA,以HPRT1（Hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1）为内参基因,利用RT-PCR的方法进行目的片段的扩增及差异性分析。结果表明,IFRG15在植入前胚胎8-细胞期,桑葚胚期开始显著高表达于受精卵、2-细胞期、4-细胞期（p〈0.05）,在囊胚期表达量达到最高,且显著高于其他各期（p〈0.05）;在雌雄小鼠几个组织体外发育过程中均检测到表达,但表达量有所不同,在雄性小鼠各组织中的表达无显著规律性差异;在5周龄雌性小鼠组织中达到最高（p〈0.05）,卵巢组织尤为明显,推测该基因对卵巢的成熟有重要的促进作用;本实验成功获得IFRG15在小鼠植入前各期胚胎及体外发育过程中的表达模式,为进一步探究该基因在小鼠克隆胚发育过程中的作用奠定基础。     

小鼠生后发育过程中轮廓乳头味蕾形态及其α-味蛋白表达

应用组织学与免疫荧光组织化学手段从不同侧面系统研究了小鼠生后早期发育过程中轮廓乳头味蕾数量、形态及α-味蛋白表达的变化规律;结果表明:出生当天小鼠轮廓乳头内尚未有味蕾存在,但在生后早期迅速发育,在出生后最初4周内味蕾的数量、大小迅速显著地增长(P<0.001),味蕾的形态也从幼年期的椭圆形到成年期的长椭圆形,味蕾细胞明显延长;发育过程中离体味蕾的形态大小同组织学研究结果具有一致性;α-味蛋白阳性味蕾与阳性细胞在出生后最初2周内显著增长(P<0.001)。结果表明,味蕾发育过程是一个结构与功能相适应的过程。     

胚胎及生后不同发育时期大鼠睾丸生殖细胞的凋亡

目的 探索雄性生殖细胞在发育过程中凋亡的特征和规律。方法 利用改进的石蜡切片原位末端标记法（TUNEL法）观察SD大鼠睾丸生殖细胞,对胚胎及生后不同阶段生殖细胞凋亡进行研究。结果 胚胎第13.5天原始生殖细胞即有较高的凋亡率,胚胎第19.5天到出生后第1天,未检测到凋亡生殖细胞,出生后第7天精原细胞分裂增生,伴有较高的凋亡率,与其他各年龄组有显著性差异。出生后第14天精母细胞凋亡率最高,与其他日龄组有显著性差异。结论 SD大鼠雄性生殖细胞发生,发育,成熟过程中都存在凋亡,主要发生在处于细胞增殖过程中的原始生殖细胞,精原细胞和初级精母细胞。     

小鼠着床前胚胎细胞发育命运

哺乳动物早期胚胎的发育机制一直是动物胚胎学和发育生物学领域中存在广泛争议的研究热点, 近年来, 争议的焦点主要集中在早期胚胎细胞的不同发育命运决定出现的阶段以及是否存在某种起关键作用的形态发生决定子等问题上.综述了近年来有关精子入卵位点、第二极体、胚胎形状、第二次卵裂的方向、细胞极性等因素对小鼠着床前胚胎细胞发育命运的影响.     

内皮型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾脏发育中的表达

目的观察妊娠不同时期胚胎小鼠肾脏发育不同阶段内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达,探讨eNOS在胚胎小鼠肾脏早期发育中的意义。方法分别取胚龄13d（E13）、14d（E14）、15d（E15）、16d（E16）、18d（E18）组及新生组（P0）小鼠各10只,共6组。分别用免疫组化及免疫印迹方法对小鼠肾脏内eNOS表达进行定性、定量分析。结果（1）免疫组化结果显示：E14、E15组eNOS在生肾区呈阳性表达;E16组生肾区表达减弱,肾近端小管呈强阳性表达,同时远端小管及肾脏小动脉内皮也有阳性表达;E18组、P0组近端小管呈强阳性表达,远端小管呈阳性表达,髓质中的集合管eNOS表达弱阳性,而致密斑呈阴性表达。（2）免疫印迹结果显示：E14组肾脏eNOS含量较少,随后逐渐增多,PD0组eNOS含量最多。结论（1）eNOS在小鼠肾脏第14d开始呈阳性表达,以后含量逐渐升高,出生时含量最高。（2）eNOS表达部位从生肾区开始,以后其表达逐渐减弱甚至消失,而肾近端小管、远端小管的表达晚于生肾区,且呈逐渐增强趋势,至出生时达到最强。这一结果表明eNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要调节作用。     

APP基因启动子区甲基化与冠心病相关性的研究

为了探讨淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)基因甲基化与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)之间的关系,采用甲基化特异性实时定量聚合酶链反应(quantitative methylation-specific PCR, qMSP)检测538名CHD患者及453名正常对照者的APP甲基化修饰水平。结果显示:CHD组的年龄、男性人数、吸烟及糖尿病患者人数均高于对照组(年龄, P=8.0E-08;男性人数, P=7.0E-07;吸烟, P=0.001;糖尿病,P=0.019)。CHD组患者白蛋白水平显著低于对照组(P=0.001),而AST、ALP及γ-GT的水平在CHD组中显著高于对照组(AST, P=3.0E-04; ALP, P=0.001;γ-GT, P=0.018)。在总体样本及男性样本中, APP基因甲基化水平在CHD组显著高于对照组(总体, P=0.026;男性, P=0.025)。在非吸烟CHD患者中, APP基因甲基化水平与狭窄程度呈正比(r=0.076, P=0.046)。在总体CHD伴高血压患者及男性CHD伴高血压患者中, APP基因甲基化水平和狭窄程度呈正比(总体, r=0.096, P=0.029;男性, r=0.135, P=0.019)。年龄分层分析后发现,在年龄≥63岁的男性CHD伴高血压患者中, APP基因甲基化水平与狭窄程度呈正比(r=0.219, P=0.020)。在年龄63岁的不吸烟或非高血压CHD患者中, APP基因甲基化水平与狭窄程度呈负相关(不吸烟, r=-0.223, P=0.008;非高血压,r=-0.216, P=0.010)。在男性CHD患者中, APP基因甲基化水平与年龄呈正相关(r=0.163, P=0.001)。在女性CHD患者中, APP基因甲基化水平与年龄呈负相关(r=-0.192, P=0.015)。在男性正常对照组中, APP基因甲基化水平与年龄呈负相关(r=-0.203, P=0.001)。在女性正常对照组中, APP基因甲基化水平与ApoB、白蛋白及ALT水平呈负相关(r=-0.160, P=0.028; r=-0.151, P=0.036; r=-0.163, P=0.024)。在正常对照组中, APP基因甲基化水平与Lp(a)水平呈正相关(r=0.108, P=0.031)。以上结果初步表明APP基因甲基化水平增高可能和男性CHD患病风险有关。     

ZnT3与Aβ在APP/PS1转基因小鼠老年斑内的定位及相关性

目的研究锌转运体-3（zinc transporter 3,ZnT3）在APP／PS1转基因小鼠大脑皮层及海马内的表达,探讨ZnT3与β-淀粉样蛋白（β-amylold,Aβ）在老年斑内的定位分布及相关性。方法应用免疫荧光和共聚焦激光扫描显微镜观察ZnT3在APP／PS1转基因小鼠大脑内的表达及其与Aβ在老年斑内的位置关系。结果ZnT3主要分布于APP／PS1转基因小鼠大脑皮层和海马的老年斑中,海马苔藓纤维也可见ZnT3的阳性反应产物;ZnT3和Aβ双标的共聚焦激光扫描显微镜观察结果证实几乎所有Aβ老年斑中均有不同程度的ZnT3表达,且主要定位在老年斑周围的变性的神经元及其突起内,围绕老年斑的Aβ核心分布。结论ZnT3与Aβ共同表达于APP／PS1转基因小鼠老年斑内,提示ZnT3可能在老年斑内的锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用,进而参与了APP／PS1转基因小鼠大脑内Aβ老年斑的形成。     

前蛋白转换酶Furin和PC7在小鼠母胎界面的动态表达及其在胚胎粘附和扩展中的作用

通过免疫组化、免疫荧光和小鼠胚胎-子宫内膜上皮细胞共培养体系,研究了前蛋白转换酶Proprotein Convertases (PCs)家族中的Furin和PC7在小鼠妊娠早期子宫和胚胎中的表达及对胚胎植入的影响.结果显示:Furin和PC7在妊娠D1-D4小鼠子宫的腺上皮和D5-D7小鼠子宫的蜕膜、腺上皮高表达;PC7在植入前胚胎的2-细胞和4-细胞期表达很低,8-细胞期表达开始增加,囊胚期滋养外胚层有显著的高表达.Furin的抑制剂Dec-RVKR-CMK可显著抑制共培养体系中胚胎的粘附和扩展.以上结果表明,Furin在植入期胚胎的粘附和扩展中发挥重要作用.此外,Furin和PC7可能参与子宫内膜蜕膜化和早期胚胎发育.     

PCNA等5种基因在小鼠睾丸发育过程中的表达

以出生1日、30日和成年昆明小鼠睾丸组织为实验材料,利用地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA－mRNA分子原位杂交,研究了PCNA、cyclinD1、cdc2、P21和P16基因共5种细胞周期调控基因在小鼠睾丸发育中的表达变化。结果发现：PCNA基因在30日龄和成年鼠睾丸中都有强的表达;而cyclin D1基因只在30日龄的小鼠睾丸组织中有表达;P21、P16和cdc2基因在3个不同的发育阶段都没有表达。这些结果表明：(1)细胞周期调控基因cyclin D1、cdc2、P16和P21与小鼠睾丸发育和精子发生过程的细胞增殖控制关系不大,可能小鼠睾丸和精子发育过程中的细胞增殖调控与其他细胞的增殖调控有不同的机制;(2)cyclin D1基因在小鼠睾丸中的表达模式表明,cyclin D1基因在睾丸发育中有不同于细胞增殖促进的作用;(3)小鼠睾丸发育中,精子发生开始时期可能晚于30日龄。 Abstracts：Using in situ hybridization technique with Dig Labeled DNA probe, we studied the expression of PCNA,cyclin D1, cdc2, P21 and P16 gene in the test of one day old,30 days old and adult Kunming mouse.The results shows that the expression of PCNA gene was strong in the test of 30 days old and adult mouse; cyclin D1 gene only expressed in the test of 30 days old mouse; cdc2,P21 and P16 gene did not express in the test of all three groups of mouse.These results suggest that:(1)cyclin D1,cdc2,P16 and P21 genes are not related to the regulaton of cell cycle during test development and germ genaration, and possibly the machanism of cell cycle regulation during test development and germ genaration is different from other kind of cells;(2)cyclin D1 has other founctions except promoting cell profilation;and (3)the germ genaration during test development may start after 30 days old.     

蛋白激酶Cα在小鼠孤雌及四倍体胚胎早期发育过程中的分布和作用

为了观察蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα在昆明白小鼠受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段的亚细胞定位和致密化进程中的表达变化,本实验利用免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察相结合的方法,对受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段PKCα的表达进行了定位观察,并利用Western blot对三组胚胎致密化进程中PKCα的表达进行定量分析.结果显示,PKCα在上述三组胚胎发育的2-细胞期至囊胚期均有表达,虽然不同胚胎PKCα的分布在同一发育阶段存在差异,却表现出在各胚胎期主要分布于卵裂球核染色质内,以及在胚胎致密化开始,PKCα在卵裂球连接处发生重新分布的共同特点.此外,三组胚胎PKCα在致密化进程中的表达呈升高趋势,即致密化后的表达高于敛密化前.结果表明,PKCct对胚胎致密化的调节具有重要作用,其在8-细胞/4-细胞期的重新分布是胚胎进入桑椹胚期的必然事件,是胚胎致密化的前提,同时伴随蛋白表达增多.此外,PKCα在囊胚期发生了植入前的第二次重新分布.PKCα在三组胚胎各发育阶段表达情况各不相同,它对小鼠胚胎发育的影响体现在整个早期发育阶段.PKCα在小鼠受精卵早期发育阶段的两次重新分布可能与在致密化开始时启动的细胞黏附事件存在某种必然联系.     

Cx43基因在人类及小鼠胎心发育中的时空表达规律

目的　检测Cx4 3在人类和小鼠的胚胎心脏的表达 ,了解该基因在心脏发育过程中的表达规律。方法　选取人类 6～ 18孕周正常胚胎或胎儿心脏 6 3例 ,小鼠孕龄 9 5～ 16 5d胚胎心脏 6 4例 ,采用免疫组化法显示Cx4 3基因在心脏的表达。结果　早期人类胚胎心脏中 ,Cx4 3在心室肌中没有表达 ,心房肌表达微弱 ,原始小梁网中表达很高 ,随着胚胎发育 ,在心房和心室的表达逐渐增强 ,小梁网的表达在胚胎 13～ 14周达到高峰。室间隔的肌部表达量较弱 ,膜部室间隔不表达。房室瓣和大动脉根部管壁Cx4 3没有明显表达。除了在大动脉管壁表达不同 ,小鼠胚胎心脏表达规律与人类基本相同。结论　Cx4 3对于胚胎心脏的发育至关重要。     

肉苁蓉苯乙醇苷对APP/PS1双转基因模型小鼠海马脑区β淀粉样蛋白表达的影响

为研究肉苁蓉苯乙醇苷对阿尔茨海默病模型小鼠海马β淀粉样蛋白表达的影响。实验选用6月龄APP/PS1双转基因AD模型小鼠60只,随机分为模型组、多奈哌齐组(0.65mg/kg)、肉苁蓉苯乙醇总苷剂量组(250,125,62.5mg/kg)、肉苁蓉毛蕊花糖苷组(125mg/kg),正常组为同窝非转基因小鼠10只,分别给予药物和蒸馏水灌胃3个月,于9月龄时通过Morris水迷宫法检测行为学改变,采用HE染色法观察小鼠脑部海马病变,采用免疫组化法和Western-blot法考察海马Aβ1-42和Aβ1-40蛋白表达。实验结果发现肉苁蓉苯乙醇苷明显改善小鼠学习与记忆能力和脑部海马神经元的损伤,减少Aβ1-42、Aβ1-40阳性细胞数,并下调蛋白表达。肉苁蓉苯乙醇苷通过下调小鼠海马脑区Aβ1-42、Aβ1-40蛋白表达,从而影响Aβ级联反应以保护神经元,发挥拮抗AD作用。本研究明确了苯乙醇苷是肉苁蓉发挥抗AD活性的主要药效物质基础,为后续将其开发为抗AD新药提供了理论支撑。