根癌农杆菌介导转化诸葛莱获得转基因植株

以诸葛莱下胚轴和子叶为材料,在附加ＢＡ和ＮＡＡ的ＭＳ培养在上诱导芽于生,在１／２ＭＳ培养基上诱导生根,获得完整再生植株,建立了诸葛菜组织培养高频再生体系,再用根癌农杆菌介地转化炒下胚了叶,在附加一定量的氨邪说青霉素,头孢霉和卡那霉素的相应增减基上进行筛选,并增减再生成苗,获得完整抗性再生植株,移植到盛有土壤的花盆中均可存活,生长正常,将再生植株叶片,进行ＧＵＳ、ＮＰＴⅡ酶活性性测定和Ｓｏｕｔｂｅｒ     

根癌土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶获得转基因植株

采用诸葛菜子叶为材料。在MS+BA 3mg／l,+NAA O．2mg／L培养基上诱导芽的再生,1／2 MS+IBA 0．03mg／L．上诱导生根,获得完整再生植株,建立了诸葛莱组织培养高频再生系统,其再生率可达100％。采用土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶．在附加一定量的氨苄青霉索、头孢霉素和卡那霉素的相应培养基上进行筛选,进而培养出再生成苗。获得完整植株,经GUS和NPTI酶活测定,以及Southern blot分析．证实为转基因植株。转化子叶的芽再生率为51％．获得完整转基因植株的转化率为5．53％。在国内外首次建立了以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)为载体,诸葛菜子叶为受体的遗传操作系统。     

罗布麻子叶和下胚轴再生植株的培养

本文报道了用罗布麻（Apocynum venetam)幼苗的子叶和下胚轴切段诱导出愈伤组织和再生植株。结果表明,愈伤组织的诱导在附加0.5mg/L6－BA和0.1-1mg/L NAA的MS培养基上为最好。在附加0.5mg/L NAA的MS培养基上培养愈伤组织能促进芽的分化,当NAA浓度增加到1mg/L时则能抑制芽的分化。随后在附加0.4mg/L IBA的MS培养基上诱导生根,获得完整再生植株。     

苦荞胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

以苦荞子叶和下胚轴为外植体,进行了不同浓度激素组合的MS和SH固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生的研究。结果发现,MS培养基比SH培养基更有利于胚性愈伤组织诱导;2,4-D是诱导愈伤组织的有效激素,KT能有效促进胚状体的形成;下胚轴和子叶都能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株。下胚轴在MS 1.5mg·L-12,4-D 1.5mg·L-1BA培养基,子叶在MS 2mg·L-12,4-D 0.5~1.5mg·L-1BA上能高效诱导出愈伤组织;愈伤组织在MS 2mg·L-12,4-D 0.1mg·L-1KT培养基中继代,能有效诱导胚性愈伤组织;来自下胚轴的胚性愈伤组织在1/2MS 2.0mg·L-1BA 0.5mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上能够高频再生出芽,来自子叶的胚性愈伤组织在1/2MS 1.0mg·L-1BA 0.1mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上芽诱导率较高;MS 1mg·L-1NAA是适宜的再生苗生根培养基。     

西瓜的组织培养和植株再生

为了进行抗病毒基因工程在西瓜育种上应用的研究,我们首先开展了西瓜快繁技术的摸索工作。以京欣1号西瓜的子叶、下胚轴、花药为外植体诱导愈伤组织及植株的再生。将外植体培养在 MS 基本培养基附加不同量及不同组合的2,4-D、BA、KT、NAA 的 PH5.8的培     

幼胚下胚轴及子叶上植株的诱导

由6个苹果品种和1个梨品种的幼胚下胚轴及子叶基部直接诱导出不定芽。不定芽的发生是成从的。实验使用MS作基础培养基,其中附加细胞分裂素和生长素的浓度为BAP 1—3ppm,NAA 0.5ppm。但是,我们在进一步实验中表明,在上述培养基中除去了生长素亦得到同样结果。在含有0.5ppm IBA的土豆培养基上,离体诱导下胚轴及子叶基部处在发育中的不定芽生根,成长为完整植株。这一结果为克服果树及农作物杂交育种中常见的幼胚不育和扩大繁殖优良品种的无性系植株,提供一个可能的实用方法。     

油菜幼苗下胚轴、根和子叶愈伤组织器官分化的初步研究

器官分化是植物生理学上的一个重要问题。油菜幼苗子叶、下胚轴和根外植体,培养在附加适当浓度的一种生长素的培养基上,能诱导产生愈伤组织。愈伤组织转至除去生长素的基本培养基上,能从子叶和下胚轴愈伤组织分化出不定芽(苗),进而从不定芽(苗)形成的茎的基部长根而形成完整小植株,但频率不高。如果在附加一种生长素的诱导愈伤组织培养基中,再加入适当浓度的一种细胞分裂素,不仅能加速下胚轴和根愈伤组织的产生,而     

荞麦组织培养及高频植株再生体系的建立

通过对荞麦(Fagopyrum esculentum Moench)不同外植体、不同激素配比的比较研究,建立了荞麦离体培养高效植株再生体系。荞麦子叶切段在含2．0 mg/L 2,4-D和1．0 mg/L 6-BA的MS培养基上愈伤组织诱导率为89．6％,而下胚轴切段在含2．0 mg/L 2,4-D和1．0-2．0 mg/L 6-BA MS培养基上愈伤组织诱导率高达100％。在2．0 mg／L 6-BA、0．1 mg,L IAA和1 mg／L KT的MS培养基上通过愈伤组织间接分化或外植体直接分化形成不定芽。来自子叶和下胚轴的愈伤组织的分化率分别为42．5％和73．6％,下胚轴的分化率明显高于子叶。将生长状态良好的不定芽转至含1．0 mg/L IBA和0．5mg/L NAA的1/2 MS培养基上生根,生根率达到100％。再生植株移栽到盆土中,成活率达91．6％,并且生长状态和特征均表现正常。     

稀有植物裸果木的组织培养及植株再生

对稀有植物裸果木进行组织培养研究,在MS培养基上裸果木的下胚轴脱分化形成愈伤组织,并进一步分化形成再生植株。激素种类及其浓度是器官脱分化与植株再生的决定因素。诱导下胚轴形成愈伤组织的最适培养基为MS 1mg／L 6-BA 0．5mg／L NAA;芽分化诱导的最适培养基为MS 1 mg／L6-BA;生根的最适培养基为不含任何激素的1／2MS培养基。     

荞麦高频离体再生及发根农杆菌转化体系的建立

荞麦无菌苗下胚轴切段在不同激素配比的MS培养基上诱导愈伤组织,出愈率均为100％。在2．0mg/L2,4-D和1．5mg/L 6-BA组合下诱导产生的愈伤组织;转入2．0mg/L 6-BA和1．0mg/L KT的MS培养基,再生苗分化率在80％以上。根尖色体分析表明再生植株具一定的遗传稳定性。发根农杆菌A4转化荞麦下胚轴和子叶获得发状根,纸电泳检测所有随机取样测定的发状根均有相应冠瘿碱的存在。     

草木樨状黄芪高频离体再生体系的建立

以草木樨状黄芪无菌苗茎切段为材料,在含１－２mg/L2,4-D和０－０．５mg/L６ＢＡ的MS培养基上培养获得大量愈伤组织,愈伤组织诱导率在９５％以上,愈伤组织在附加０．２mg/LＫＴ,１mg/L６ＢＡ,０或０．５mg/LＮＡＡ,５００mg/LＣＨ 和２００mg/L ＹＥ的ＭＳ培养基上诱导丛生芽,并进而发育成苗。苗的分化频率为１００％。分化苗或其茎的切段在不国源植物激素的１／２ＭＳ培养基上可出现根的分化,分化频率达９０％以上,再生植株经炼苗后移栽成活率达８０％以上。     

甘蓝型油菜与芝麻菜体的细胞杂交

为拓宽油菜育种的基因资源库, 改良油菜品种, 以甘蓝型油菜(Brassica napus)花油3号下胚轴和芝麻菜(Eruca sativa)下胚轴为材料分离制备原生质体; 然后采用PEG-高Ca2+-高pH法进行原生质体融合, 当PEG浓度为35%, 原生质体融合密度为5×105个/mL时, 融合25 min时, 融合率可达18.2%。融合后在培养密度为1×105个/mL时, 以附加1.0 mg/L 2,4-D +0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+ 200 mg/L肌醇+300 mg/L水解酪蛋白的改良的KM8p为融合体培养基, 以0.1 mol/L 蔗糖+0.2 mol/L葡萄糖+0.2 mol/L甘露醇作渗透稳定剂进行液体浅层培养, 效果较好, 愈伤组织再生率最高为6.8%。将融合体再生的小愈伤组织转移至培养基(B5无机盐+0.087 mol/L蔗糖+0.2 mg/L 2, 4-D+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+ 0.5% Agar, pH 5.8)上增殖培养, 待愈伤组织长至直径为3~5 mm时, 及时将其转至分化培养基(MS无机盐+0.087 mol/L 蔗糖+0.1 mg/L IAA+0.8 mg/L 6-BA+0.8% Agar, pH 5.8)中诱导不定芽再生, 芽分化率为35.7%。当不定芽长为2~3 cm时, 将其切下转入附加0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L 6-BA的1/2MS生根培养基中诱导生根, 14 d左右即可形成再生植株, 生根率可达88%。同时, 以紫外线(60 μW/cm2)照射芝麻菜原生质体, 进行不对称融合, 照射2 min的获得了愈伤组织和再生植株, 照射4 min的只获得愈伤组织, 而照射5 min以上的没有获得愈伤组织, 但其愈伤组织再生、增殖及植株再生均不如对称融合。从细胞学鉴定的21块杂种愈伤组织上再生出16株杂种植株。     

龙牙楤木幼芽体细胞胚胎发生和植株再生(简报)

龙牙楤木[Aralia elate(Miq.)Seem]是五加科楤木属的多年生乔本药用植物,又称刺老鸦,具有补气、活血、祛风、利湿、止痛等功效。主要分布于我国东北地区、朝鲜、日本和俄罗斯的西伯利亚地区。其幼嫩茎叶是有名的山菜,在我国及东南亚一些国家很受欢迎。但是,近些年来由于人为恶性采伐,使     

Preliminary studies on tissue culture and agrobacterium-medicated transformation of Brassica campestris ssp. chinensis]

The hypocotyls and cotyledons of the asepetic seedling of Brassica campestris ssp. chinensis L cv. Pudongaijiecai) were used as explants for tissue culture. Adventitious buds were differentiated on modified MS medium supplemented with TDZ 1-2 mg/L, NAA 0.2-1 mg/L and AgNO3 7.5 mg/L. The percentage of explants which formed buds of cotyledons was about 56%, and that of hypocotyls was about 37%. When the regenerated explants were transferred onto MS medium with 2 i.p. 5 mg/L and NAA 0.1 mg/L for two weeks, whole plantlets were obtained by culturing the regenerated shoots on 1/2 MS medium with NAA 0.1 mg/L. Agrobacterium tumefaciens strain (LBA 4404/PBI 121) carrying the GUS gene and Npt II gene was used for transformation. After 2 days of coculture, the hypocotyls and cotyledons were transferred onto regenerated medium containing CP 300 mg/L for bud formation. After 4-5 weeks, the differentiated buds were transferred onto selection medium with CP 200 mg/L and Km 10 mg/L for 1 month, then the green shoots were transferred onto the rooting medium containing Cef 100 mg/L and Km 20 mg/L. 4-5 weeks later, plantlets with Km resistance were obtained and some of them showed higher enzymatic activities of beta-glucuronidase than control ones.     

甘蓝型油菜与芝麻菜体的细胞杂交

为拓宽油菜育种的基因资源库, 改良油菜品种, 以甘蓝型油菜(Brassica napus)花油3号下胚轴和芝麻菜(Eruca sativa)下胚轴为材料分离制备原生质体; 然后采用PEG-高Ca2+-高pH法进行原生质体融合, 当PEG浓度为35%, 原生质体融合密度为5×105个/mL时, 融合25 min时, 融合率可达18.2%。融合后在培养密度为1×105个/mL时, 以附加1.0 mg/L 2,4-D +0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+ 200 mg/L肌醇+300 mg/L水解酪蛋白的改良的KM8p为融合体培养基, 以0.1 mol/L 蔗糖+0.2 mol/L葡萄糖+0.2 mol/L甘露醇作渗透稳定剂进行液体浅层培养, 效果较好, 愈伤组织再生率最高为6.8%。将融合体再生的小愈伤组织转移至培养基(B5无机盐+0.087 mol/L蔗糖+0.2 mg/L 2, 4-D+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+ 0.5% Agar, pH 5.8)上增殖培养, 待愈伤组织长至直径为3~5 mm时, 及时将其转至分化培养基(MS无机盐+0.087 mol/L 蔗糖+0.1 mg/L IAA+0.8 mg/L 6-BA+0.8% Agar, pH 5.8)中诱导不定芽再生, 芽分化率为35.7%。当不定芽长为2~3 cm时, 将其切下转入附加0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L 6-BA的1/2MS生根培养基中诱导生根, 14 d左右即可形成再生植株, 生根率可达88%。同时, 以紫外线(60 μW/cm2)照射芝麻菜原生质体, 进行不对称融合, 照射2 min的获得了愈伤组织和再生植株, 照射4 min的只获得愈伤组织, 而照射5 min以上的没有获得愈伤组织, 但其愈伤组织再生、增殖及植株再生均不如对称融合。从细胞学鉴定的21块杂种愈伤组织上再生出16株杂种植株。     

Transformation of Brassica napus Using Agrobacterium tumefaciens and Regeneration of Transgenic Plants

Seeds of Brassica napus L. cv. "Yunbei 2" were surface-sterilized and germinated on hormone-free MS medium. After 4—5 days the cotyledons were excised in such a way that each has a 1—2 mm petiole was remained at its base. These cotyledons were used as the explants for tissue culture and genetic transformation. This paper first deals with the improvement of the medium for shoot regeneration. Of the elements tested, AgNO3 and carbenicillin enhanced shoot regeneration. The highest frequency (52 %) was obtained on MS medium containing 4.5 mg/L BAP, 20 μmol/L AgNOa and 500 mg/L earbenicillin. An efficient gene transfer system based on the regeneration procedure was established. After 2 days of cocultivation with Agrobacterium tumefaciens strain A208SE (pTi T37-SE, pROA93), the explants were transferred onto selection medium containing 25 mg/L kanamycin. After 1.5 months shoots emerged from 27% of the explants inoculated. They were excised and transferred onto rooting medium containing 25 mg/L kanamycin and 200 mg/L cefotaxime which is better than carbenicillin for root induction. Whole plants were transplanted into pots, and grew well in the phytotron. Transformation was confirmed by β-glueuronidase assay and Southern blotting analysis.     

半日花的组织培养及植株再生(简报)

半日花(Helianthemum Songaricum Schrenk)是半日花科半日花属落叶小灌木,分布于新疆、甘肃和内蒙古等荒漠地区海拔1000米至1300米山地。为亚洲中部荒漠特有种和古地中海植物区系孑遗种,是生长了7000万年的远古植物。比具有“活化石”之称的水杉和银杏还要早几千万年。植物学家将它及与之同龄的四合木、沙冬青和革苞菊等十几种植物统称为“古老残遗濒危植物”。故而在研究亚洲中部荒漠,特别是研究我国荒漠植物区系的起源以及与地中海     

甘蓝下胚轴原生质体再生植株

经纯化后,甘蓝下胚轴原生质体的产量为1．5×10⁶g^-1(Fw),采用液体浅层培养的方法进行培养。2～3d后,发生第一次分裂,第10天,统计分裂频率为6l％,5周内形成大量的细胞团和小愈伤组织,统计植板率为1．1％,把小愈伤组织转到与原生质体培养基相同激素的MS固体培养基上增殖。当愈伤组织长到3～5mm大小时,接到分化培养基上,芽分化率为46.7％．分化出来的芽长到3～4cm长时,从基部切下,插入生根培养基,两星期左右即可长成完整植株。     

龙牙匆木幼芽体细胞胚胎发生和植株再生（简报）

Explants excised from the young shoots of Aralia elata (Miq.) Seem. were cultured on MS media. Calli were induced from the explants on MS medium supplemented with 0.5 mg/L 2, 4-D, 0.5 mg/L BA and 0.5 mg/L NAA. Then these calli were transferred onto the MS medium containing 2.0 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BA + 0.5 mg/L NAA and 0.2% activated charcoal. Under these conditions the somatic embryoids were observed and regenerated plants were obtained from somatic embryogenesis. Then, a experimental system with stability and high regenerating efficiency has been set up for the propagation of the young plants, the cell breeding technology and the control of somatic embryogenesis of Aralia elata (Miq.).