SCGE技术检测镉对背角无齿蚌血细胞DNA的损伤

以背角无齿蚌(Anodonta woodiana woodiana)为研究对象,利用单细胞凝胶电泳技术检测不同浓度及不同染毒时间氯化镉对背角无齿蚌血细胞DNA的损伤作用。结果显示,染毒后的背角无齿蚌血细胞均出现了拖尾现象,各染毒组与对照组相比,拖尾增长明显。剂量效应组中,蚌暴露在不同浓度(0、1、10、50mg·L^-1)的氯化镉中72 h,各组蚌血细胞DNA平均迁移长度及彗尾DNA含量均明显增加,与阴性对照组比较差异显著(p<0.01),存在显著的剂量-效应关系;在时间效应组中,蚌暴露在10mg·L^-1的氯化镉中分别24、48、72、96 h,随着氯化镉染毒时间的延长,各染毒组细胞DNA平均迁移长度及彗尾DNA含量与0时间组比较差异显著(p<0.01),但时间-效应关系不明显。     

杀虫剂啶虫脒和毒死蜱对捕食蜘蛛血细胞DNA的损伤作用

应用蜘蛛血细胞微核试验和单细胞凝胶电泳试验研究了两种杀虫剂啶虫脒和毒死蜱对蜘蛛头胸部和腹部血细胞DNA的损伤作用。结果表明：在啶虫脒和毒死蜱各供试浓度作用下,对蜘蛛血细胞微核率有明显的影响,与对照组相比有显著性差异(p<0.05,p<0.01);且随着两种农药浓度升高,血细胞微核率显著增加,存在明显的剂量-效应关系(啶虫脒浓度与星豹蛛头胸部血细胞微核率相关系数r=0.9284,腹部为r=0.9071;毒死蜱与星豹蛛头胸部血细胞微核率相关系数r=0.9841,腹部为r=0.9793);啶虫脒和毒死蜱对星豹蛛血细胞DNA损伤有明显的剂量-效应关系(啶虫脒浓度与星豹蛛头胸部血细胞DNA损伤相关系数r=0.9838,腹部为r=0.9834;毒死蜱与星豹蛛头胸部血细胞DNA损伤相关系数r=0.9807,腹部为r=0.9659);且两种农药在同种农药同一浓度作用下,对星豹蛛腹部血细胞微核率和DNA损伤程度要明显大于头胸部。     

SCGE法检测敌敌畏对大鳞副泥鳅DNA损伤的研究

目的 采用SCGE技术检测敌敌畏对大鳞副泥鳅DNA的损伤效应.方法 设置敌敌畏0.64 μg/L、1.28μg./L、1.92μg/L、2.56μg/L、3.20μg/L 5个浓度组和一个空白对照组(15尾大鳞副泥鳅/组),通过单细胞凝胶电泳技术(scGE)研究各浓度敌敌畏处理组在分别处理l d、2 d、3 d后对大鳞...     

重金属Cd2+、Pb2+ 和Zn2+ 对泥鳅 DNA损伤的研究

采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),研究重金属Cd2 、Pb2 、Zn2 在不同暴露时间(1—35d)、单一重金属离子不同暴露浓度(0.05mg/L、0.5mg/L、5.0mg/L)或混合重金属离子(Cd2 Pb2 、Cd2 Zn2 、Pb2 Zn2 、Cd2 Pb2 Zn2 )相同浓度(0.5mg/L)条件下对泥鳅肝胰脏细胞核DNA的损伤作用。以带彗尾核DNA百分率和彗尾长度(TL)与核直径(D)比值为指标,探讨DNA损伤级别与处理浓度间的相关性。结果显示,随着处理时间的延长,带彗尾核DNA百分率和TL/D值均呈上升趋势,5.0mg/L Zn2 组28d时带彗尾核DNA百分率最高(84.85%),35d的TL/D值亦为所有组中最高(2.50);对DNA损伤作用,初期以1级损伤为主,7d后以3级损伤为主,且损伤率超过80%;Cd2 、Pb2 和Zn2 之间的联合毒性表现复杂,但总体表现为Cd2 存在时能增强Pb2 或Zn2 对DNA的损伤作用。总之,重金属Cd2 、Pb2 和Zn2 对泥鳅肝胰脏细胞核DNA损伤具有明显的浓度和时间效应,利用SCGE技术可对水环境污染导致的生物基因毒性作用进行监测。     

铜绿微囊藻藻毒素提取液对小鼠淋巴细胞DNA损伤的研究

采用单细胞凝胶电泳(SCGE)方法,研究了实验室培养的铜绿微囊藻藻毒素MCLR粗提液、初步提取液和纯MCLR样品对小鼠淋巴细胞的毒性效应.结果显示,正己烷萃取粗提液后,其中的色素和脂类物质被大量去除.当粗提液MCLR浓度大于66.2μg·L^-1时,能够诱发小鼠淋巴细胞DNA损伤,初步提纯液的MCLR浓度达到125μg·L^-1以上,才会诱发DNA损伤,与粗提液相比,初步提纯液的tail DNA%和OTM值有所降低,但幅度不大.纯MCLR样品诱导的DNA损伤远小于粗提液,浓度为494μg·L^-1时的tail DNA%和OTM值与75.9μg·L^-1粗提液相近,在MCLR纯化过程中大量被去除的具有紫外吸收的物质是导致损伤差异的主要来源.     

人参皂甙对缺氧大鼠海马DG区神经细胞DNA损伤保护作用的研究

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究急慢性缺氧大鼠海马DG区神经细胞细胞DNA损伤和人参皂甙对缺氧大鼠海马细胞DNA的保护作用.方法:健康成年SD大鼠随机分为急、慢性缺氧正常对照组、急性缺氧组和慢性缺氧组(分别在模拟海拔5000米高原环境连续缺氧暴露0d、3d和30d)、急性缺氧人参皂甙干预组、慢性缺氧人参皂甙干预组.应用SCGE检测海马DG区神经细胞DNA损伤.结果:随着缺氧时间的增加,海马DG区神经细胞DNA的损伤程度加重,尾长、尾部DNA百分含量和尾距显著增加(P＜0.05).人参皂甙能使缺氧损伤的海马DG区神经细胞的尾长、尾部DNA百分含量和尾距均较缺氧组减少(P＜0.05).结论:人参皂甙能有效地减轻缺氧引起的海马组织细胞DNA的断裂损伤.     

氯化钇和氯化镨引起的人淋巴细胞DNA分子损伤的研究

用单细胞凝胶电泳法检测了稀土化合物氯化钇和氯化镨对人外周血淋巴细胞的ＤＮＡ损伤效应。结果表明,与对照相比,３种不同浓度的氯化钇和氯化镨均可引起淋巴细胞ＤＮＡ受损后ＤＮＡ迁移率的显著升高,受损伤细胞的百分率与对照差异明显,提示氯化钇和氯化镨具有一定的遗传毒性。     

UVB照射后小鼠脾淋巴细胞DNA损伤程度的检测

用强度为30 μW/cm2、60 μW/cm2、90 μW/cm2、120 μW/cm2、150 μW/cm2的中波红斑效应紫外线(UVB)分别照射小鼠脾淋巴细胞5 min、15 min、30 min,采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测UVB照射对细胞DNA的损伤,结果照射5 min和15 min时,DNA损伤程度与照射强度呈正相关;而照射30 min时,30 μW/cm2组DNA损伤程度最高,60 μW/cm2、90 μW/cm2、120 μW/cm2组损伤程度有所降低,而150 μW/cm2组又出现了高DNA损伤.认为通过SCGE来检测UVB照射对小鼠脾淋巴细胞的损伤程度,可广泛应用于环境毒理学中对DNA具有损伤作用的分析,为环境生物学研究辐射对生物体的影响提供借鉴.     

三丁基锡对牡蛎鳃细胞DNA损伤的研究

有机锡化合物作为防污涂料已经被使用了半个多世纪,这样虽然延长了海洋建筑和船舶的使用寿命,减少了燃料消耗,降低了圬修费用,取得了显著的经济效益,但是不容忽视的是这类化合物的使用对海洋环境的污染也日趋严重,特别是对长期生活于海洋环境中生物造成的影响越来越令人堪忧[1]     

应用SCGE技术研究细胞DNA损伤的原理与方法

对单细胞微凝胶电泳（ＳＣＧＥ）技术的操作过程,技术原理以及实验操作过程中应注意的事项,进行了详细介绍和讨论;并应用ＳＣＧＥ技术研究了γ射线照射对人血淋巴细胞ＤＮＡ的损伤效应．结果表明,γ射线照射能引起细胞ＤＮＡ迁移长度增加,且呈显著地剂量效应关系．     

三个三倍体鲫鱼品系及野鲫mtDNA的比较研究

用16种限制性内切酶研究了银鲫(3N=156～162)、彭泽鲫(3N=162)和缩骨鲫(3N=150)3个三倍体鲫鱼品系及野鲫(2N=100)的线粒体DNA。有6种酶在种系间和种系内产生限制性片段长度多态性(RFLPs),银鲫共存在4种单倍型,彭泽鲫2种,野鲫3种,缩骨鲫1种。彭泽鲫和银鲫拥有相同的常见单倍型,缩骨鲫的单倍型属于野鲫的常见型。根据限制性位点的变异数据,计算了单倍型间的相似性、核苷酸多样性、品系内核苷酸多样性和品系间的遗传距离,确定彭泽鲫属于银鲫的一个地方品系,缩骨鲫属于野鲫的一个地方品系。根据核苷酸的差异,推算出银鲫和野鲫两个亚种的分化大约在11万年前完成。     

Mast cells in goldfish (Carassius auratus) gut: Immunohistochemical characterization

The common goldfish is the most widespread teleosts in the world. Due to its peculiar characteristics, such as the high resistance, easy availability and stabulation, and for its evolutionary characteristics, this fish lends itself to be one of the most used experimental models. This study aimed to characterize the mast cells in the intestine of Carassius auratus using anti-TLR-2, anti-S100, anti-VIP, anti-serotonin (5-HT) and anti-Piscidin antibodies. The intestine of goldfish, like that of all vertebrates, plays an important role in the immunology of the animal. The gut-associated lymphoid tissue GALT is an immune component containing several specific cells such as lymphocytes, macrophages and mast cells. In addition, the presence of goblet cells in the intestinal epithelium strengthens the defence system, secreting many cytokines and chemokines and displaying antibacterial properties. Our results show mast cells labelled with antibodies that are highly conserved between fish and mammals, demonstrating an active role of these cells in the immune response.     

饥饿对银鲫血液组分和卵巢发育的影响

对银鲫 (Carassiusauratusgibelio)进行投喂、饥饿 (1～ 4周 )、饥饿投喂 (饥饿 2周再投喂 2周 )处理后 ,测定其血液组分和卵巢发育的指标。结果表明 :饥饿处理后银鲫血液中血糖、甘油三酯的含量显著降低 ;红细胞数量、血红蛋白含量和胆固醇含量先显著降低 ,随后回升到投喂组水平 ;在饥饿过程中白细胞的数量、红细胞的长短径、红细胞沉降率和总蛋白均无明显变化。饥饿投喂处理的银鲫血液中红细胞数量、甘油三酯和胆固醇含量与投喂组无差异 ,但血糖含量仍显著低于投喂组 ,而白细胞数和血红蛋白含量显著高于投喂组。饥饿 4周延缓了银鲫卵巢发育 ,其性腺成熟系数和卵径均显著低于投喂组 ;饥饿投喂组的性腺成熟系数和卵径仍显著低于投喂组。分析说明饥饿阻碍了银鲫的卵巢发育 ,而饥饿对银鲫血液组分的影响在再投喂后得到恢复。     

Otolith resorption induced by anaerobic stress in the goldfish, Carassius auratus

To examine otolith resorption induced by anaerobic stress, ⁴⁵Ca-prelabelled goldfish, Carassius auratus , were kept in oxygen-deficient ambient water (O₂ < 0.5 .1 1⁻¹, 26° C) for 2 days and otoliths (asterisci) were analysed for ⁴⁵Ca retention. In a second experiment, fish were anaerobically stressed for 2 days, and then received a single intraperitoneal injection of ⁴⁵Ca. They were maintained under stress for one more day and killed to examine ⁴⁵Ca deposition in otoliths. Plasma was analysed for total and radioactive calcium. Otoliths (lapilli) were examined for stress-induced check formation by scanning electron microscopy (SEM).
Stress significantly reduced plasma calcium levels and the rate of calcium retention in otoliths, which was calculated from the ⁴⁵Ca specific activity of the plasma. On the other hand, the rate of calcium deposition in otoliths was the same in the stressed as in the control fish. SEM observation revealed that the applied stress resulted in a check formation in otoliths. These results indicate that a 48-h stress of oxygen deficiency induces calcium resorption in otoliths.     

鲫鱼雌性有关蛋白的研究

本文利用聚丙烯酰胺、SDS、超薄平板等电聚焦等多种电泳方法,对不同性别鲫鱼的血清分析后,发现了两种与雌性有关的特异血清蛋白,FSSP-Ⅰ及FSSP-Ⅱ。分离提纯了含量较多的FSSP-Ⅱ,其分子量、等电点、氨基酸组成分析的结果证明,它是一类与已报道过的鱼类雌性蛋白极不相同的、与性别有关的蛋白。为性别问题的研究提供了有意义的资料。     

盐酸沙拉沙星在鲫体内的残留及消除规律研究

采用高效液相色谱法测定鲫组织中沙拉沙星并初步研究了盐酸沙拉沙星在鲫组织中的残留及消除规律。在21±2℃下,以20mg/kg的剂量单次口灌给药,取血浆和肌肉、皮肤、肝胰脏、肾脏、卵巢5种组织,各样品中加入甲磺酸达氟沙星作内标,用二氯甲烷提取组织中的药物,正己烷去脂,反相高效液相色谱法测定其中盐酸沙拉沙星的浓度。此方法平均回收率均大于82.97%,日间变异系数小于8.41%,最低检测限可达0.0125μg/g。研究结果表明盐酸沙拉沙星在血浆和5种组织中消除速率快慢不一,肾脏为盐酸沙拉沙星残留的靶组织。若规定可食用组织中的盐酸沙拉沙星在最大残留限量为30μg/kg,由休药期(WDT)公式可得出盐酸沙拉沙星在鲫体内的WDT为14d。       

Fine-structural study of leucocytes in the goldfish, Carassius auratus

An electron microscopic study was performed on leucocytes from circulating blood of the goldfish. The leucocytes were divided into eight types: neutrophil, eosinophil, large granular leucocyte (LGL), medium-sized granular leucocyte (MGL), small granular leucocyte (SGL), fine granular leucocyte (FGL), lymphocyte, and monocyte. In this report the thrombocyte was excluded from leucocytes, and LGL, MGL, SGL and FGL were tentatively classified based on the size of intracytoplasmic granules possessed by each cell. The existence of goldfish monocytes was electron microscopically demonstrated for the first time in the present report.     

鲫鱼微卫星DNA的分离及多态性分析

目的：用近缘物种鲤微卫星引物来分离鲫鱼微卫星标记并对其多态性进行分析。方法：以鲫鱼基因组DNA为模板,采用6对鲤微卫星引物进行PCR扩增,PCR产物经8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色检测。结果：筛选出2个以AC和TA为重复单元的鲫鱼新的微卫星标记。多态性分析表明,这2个微卫星标记的遗传杂合度分别为0.611和0.644,多态信息含量为0.536和0.572,属于高度多态性标记。结论：该研究筛选的2个微卫星标记可应用于鲫鱼遗传多样性、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等方面的研究。     

线粒体可能参与鲫鱼精子发生中拟染色体的形成

运用电子显微镜观察了鲫鱼生精细胞发育过程中拟染色体的形成和解体,以及拟染色体和线粒体的关系。在精子细胞阶段之前的各期生精细胞中都存在拟染色体。仅在精原细胞中观察到拟染色体的形成过程。拟染色体的形成方式与其它鱼类中拟染色体的形成方式相似。在生精细胞的发育过程中,线粒体的形态和数量发生变化。在初级精原细胞阶段,线粒体较大,多为球形,嵴少,基质电子密度低。随着生精细胞的发育,线粒体逐渐变小,多为长条状,嵴多,基质的电子密度升高。拟染色体形成后往往与线粒体结合。与拟染色体结合的线粒体往往解体,部分或全部的外膜和内膜破裂以至消失。线粒体解体后,其中的物质可能会转移到拟染色体中[动物学报52(2):328-334,2006]。     

金鱼早期仔鱼体表的电镜观察

应用扫描和透射电镜技术对金鱼(Carassius auratus)孵出1 d3、d9、d龄仔鱼的体表进行了观察。仔鱼的上皮细胞呈扁平、多边形,彼此之间由增厚的边缘嵴状突紧密连接,细胞向内凹陷的表面有指纹状嵴突。孵出3 d的仔鱼体表两侧各有一列间隔有序呈丘状突起的味蕾,外被单层上皮细胞,味孔处有一根粗圆的感觉毛。粘液细胞出现在仔鱼头部、腹部、体侧的表皮上,并开口于多个相邻上皮细胞间的连接处。粘液细胞胞质比例大,内含丰富、平行排列的粗面内质网,旁边有大量大小不一、内含物液化状、近圆形的粘原颗粒。9 d后仔鱼体表完全被粘液覆盖,初步建立了以粘液细胞为基础的防病和抗病机制,以机械和化学感觉为主的Ⅰ型味蕾觅食方式。