叶酸靶向载顺铂羧甲基-β-环糊精纳米复合物的制备及对鼻咽癌的体外抑制效应

为达到鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NeC）的靶向化疗,该研究通过酰胺化反应和配位偶联技术制备叶酸（folicacid,FA）分子靶向载川页铂（cisplatin,CDDP）羧甲基-β-环糊精（carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM—β—CD）纳米复合物（FA-CM—β—CD—CDDP）,采用邻苯二胺（o-phenylenediamine,OPDA）比色法检测复合物中CDDP含量,紫外分光光谱检测FA含量,透射电镜观察复合物形态,激光粒度仪测定复合物粒径大小。荧光显微镜观察NPC叶酸受体（folatereceptor,FR）阳性HNE-1细胞及FR阴性CNE-2细胞对偶联FITC的复合物的吞噬及OPDA比色法检测细胞内CDDP的浓度。通过MTT法、集落形成实验和流式细胞术检测复合物对HNE-1细胞增殖能力和凋亡的影响。研究结果显示,复合物中偶联的FA和CDDP浓度分别为340gg／mL和2mg／mL,CDDP包封率达20．00％,复合物粒径均匀且大小为157．8nm。HNE-1细胞内见较多FITC,细胞内CDDP浓度为6．24ng／mL,而CNE-2细胞内FITC较少,细胞内CDDP浓度仅约2．01ng／mL。HNE-1生长抑制率在24h明显高于对照组（CM—β—CD—CDDP）,其IC50（4．80μg／mL）明显低于对照组（6．97μg／mL）,但当所载的CDDP终浓度达到16．00μg／mL时,两组抑制率均达到80％以上;作用48h两组抑制率无明显差异。在24h,当复合物的CDDP终浓度为1．00μg／mL时,HNE—1的集落形成率为33．21％,明显低于对照组（52．27％）。当复合物的CDDP终浓度为0．25μg／mL和1．00μg／mL时,HNE-1的凋亡率分别达12．65％和22．35％,明显高于对照组（6．91％和14.21％）。研究结果表明,成功构建的FA—CM—β—CD．cDDP纳米复合物能够靶向抑制FR阳性的NPC细胞增殖并促进其凋亡。     

长瓣兜兰的组织培养与快速繁殖

1植物名称长瓣兜兰（Paphiopedilum dianthum Tanget Wang）。2材料类别种子。3培养条件种子萌发培养基：（1）1／2MS＋马铃薯汁100mg·L-1（单位下同）;（2）MS＋马铃薯汁100;（3）1／2MS＋100mL·L-1椰乳;（4）MS＋100mL·L-1椰乳。原球茎继代增殖培养基：（5）1／2MS＋6-BA0．2＋NAA0．5＋100mL·L-1椰孚L;（6）1／2MS＋6-BA0．2＋NAA1．O＋100mL·L-1椰乳。壮苗及生根培养基：（7）1／2MS＋吲哚丁酸（IBA）0．2＋2g·L-1活性炭;（8）1／2MS＋IBA0．4＋2g·L-1活性炭。以上培养基均加2．0％蔗糖和0．6％琼脂,pH5．2。5．4。培养温度为（25±2）℃,光照强度为30-40μmol·m-2·S-1,光照时间为12h．d-1。     

Cr^3＋胁迫对苦草叶片活性氧清除系统和叶细胞超微结构的影响

研究了不同浓度Cr^3＋胁迫对苦草[Vallisneria natarts（Lour．）Hara]叶片活性氧清除系统及细胞超微结构的影响。结果表明,随Cr^3＋浓度的提高（0．5-15．0mg·L^-1）,苦草叶片中O2^-·和MDA含量、SOD和POD及CAT活性均呈现先上升后显著下降的变化趋势,且在10．0和15．0mg·L^-1 Cr^3＋胁迫条件下显著低于对照（P〈0．05）。在1．0mg·L^-1Cr^3＋胁迫条件下,O2^-·的含量达到最高（0．96 OD·g^-2）;在2．0mg·L^-1Cr^3＋胁迫条件下,MDA含量和SOD、POD及CAT活性最高。随Cr^3＋胁迫浓度的提高,苦草叶片细胞超微结构受损程度逐渐加深,导致核仁和高尔基体消失;线粒体脊突膨胀,线粒体膜受损并出现囊泡状结构;叶绿体变形、类囊体膨胀受损并最终导致叶绿体破损。表明高浓度Cr^3＋胁迫对苦草叶片细胞产生了不可逆的伤害。     

离子草的组织培养与快速繁殖

1 植物名称 离子草[Chorispora tenella（Pall．）DC．]。 2 材料类别 无菌苗茎段。 3 培养条件 （1）不定芽诱导培养基：MS＋6-BA2．0mg·L^-1（单位下同）＋NAA0．1;（2）继代增殖培养基：MS＋6-BA1．0＋NAA0．5：（3）生根培养基：1／2MS＋IBA0．5。上述培养基均添加3％蔗糖和0．7％琼脂,pH5．8～6．0。培养温度为23～26℃,光照时间为16h·d～,光照强度约34μmol·m^-2·s^-1。     

特康唑对常见念珠菌的体外敏感性试验

目的：研究特康唑对重度念珠菌性阴道炎常见念珠菌的体外敏感性。方法菌株分离自上海交通大学医学院附属仁济医院、上海市第六人民医院、上海市第一妇婴保健院妇科门诊外阴阴道念珠菌病（ VVC）患者的阴道分泌物。所有菌株均经念珠菌显色培养基（ CHROMagar Candida）、API 20C AUX鉴定,并采用CLSIM27?A3肉汤微量稀释法对213株临床分离念珠菌作了特康唑、克霉唑、咪康唑3种抗真菌药物敏感性测定。结果213株菌株经鉴定为白念珠菌192株（90．14％）,光滑念珠菌21株（9．86％）。特康唑对192株白念珠菌的MIC范围：0．024～12．5μg／mL,MIC50：0．39μg／mL,MIC90：1．56μg／mL,GM：0．248μg／mL;特康唑对19株光滑念珠菌的MIC范围：0．024～1．56μg／mL,MIC50：0．049μg／mL,MIC90：1．56μg／mL,GM：0．107μg／mL。结论目前阴道念珠菌病的病原菌仍以白念珠菌为主,并提示特康唑与克霉唑、咪康唑3种药物对213株念珠菌均具有良好的敏感性,特康唑对白念珠菌及光滑念珠菌有较强的抑制作用并未发现有耐药现象。     

中国仓鼠卵巢细胞的悬浮适应及代谢特征

目的：通过悬浮适应,使中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）获得悬浮生长的特性,并可在悬浮培养条件下较快地生长。方法：将CHO细胞以3×10^5／mL接种于100mL的三角瓶内,培养时加入1％小牛血清、1g/LPIuronic F-68、25μg／mL硫酸葡聚糖,培养体积35mL,摇床转速90r／min,每24h离心换液,当细胞增殖为2×10^6／mL时传代。结果：经过悬浮适应,细胞的平均比生长速率由适应最初的0．27／d提高为适应后的0．48／d,最大总细胞密度由适应初期的2．5×10^6／mL提高为适应后的6．3×10^6／mL,目的蛋白活性也由适应前的2781U／mL提高为适应后的8878U／mL,适应后细胞的葡萄糖平均比消耗率为1．42μmol／（10^6细胞·d）,低于适应前的2．16μmol／（10^6细胞·d）。结论：贴壁生长的CHO细胞经过悬浮适应,不仅可以在悬浮培养条件下快速生长,而且细胞对葡萄糖的利用率也得到提高。     

新铁炮百合的离体快速繁殖

1植物名称新铁炮百合（Liliumlongiflorum×L．formosanum,铁炮百合和高砂百合的杂交种）。2材料类别鳞片。3培养条件以MS为基本培养基。（1）鳞片初次接种培养基：1／3MS＋6－BA1mg·L-1（单位下同）＋IBA0．02＋GellanGum（美国生产的微生物多糖培养基固化剂）2g·L-1;（2）增殖培养基：MS＋6－BA1．0～1．5＋IBA0．2;（3）球茎形成培养基：MS＋6－BA0．2～0．5＋IAA0．2＋NAA0．05;（4）生根培养基：1／2MS＋IBx0．5。培养基含蔗糖25g·L－1,除（1）外,其它培养基附加普通琼脂5．5g·L－1,pH5．8。培养温度22～25…     

检测双孢蘑菇培养料中微量1－氨基环丙烷－1－羧酸（ACC）的离子色谱法

建立了一种快速简便直接检测双孢蘑菇培养料中微量1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）含量的离子色谱法。此法使用DionexICS．3000离子色谱仪与AminoPacPA．10离子交换柱,以0．25m01．L^-1NaOH、1．00mol.L^-1NaAc和水作为洗脱液进行梯度洗脱,流速0．25mL．min^-1,柱温30℃,进样量25uL。在此条件下,信噪比为3时,ACC的保留时间为9．284min,最低检测限是0．0330μg．mL^-1,标准曲线线性符合系数为0．9990,线性范围在0．10-2．00μg.mL^-1。三个加标水平下的回收率分别为106．00％、91．71％和96．08％。该方法可用于检测双孢蘑菇培养料中的ACC含量,检测结果为3．6620μg．g^-1（FW）。此法也适用于其他食用菌和土壤微生物的研究。     

巨紫荆幼胚再生体系的建立

1植物名称巨紫荆（（Cercls gtgantea Cheng et Keng f．）,植株来源于本校校园内。2材料类别9月上旬巨紫荆荚果中未成熟种胚。3培养条件幼胚萌发与无菌苗生长的培养基：（1）-（3）1／2MS＋6-BA0．5mg．L-1（单位下同）＋蔗糖（2％、2．5％、3％）;（4）-（6）1／2MS0＋6-BA0．5＋蔗;膪（2％、2．5％、3％）;（7）～（8）1／2MS＋6-BA0．5＋维生素C（Vc,0．5、1．0）;（9）-（10）1／2MS0＋6-BA0．5＋Vc（0．5、1．0）。芽增殖培养基：（11）MK＋6-BA0．5＋NAA0．1;（12）MK＋6-BA0,75＋NAA0．1;（13）MK＋6-BA0．5＋NAA0．25;（14）MK＋6-BA0．75＋NAA0．25;（15）MK＋6-BA1．0＋NAA0．25;（16）MK＋6-BA1．5＋NAA0．25;壮苗培养基：（17）MK＋6-BA0．75＋NAA0．1＋1．0g．L-1水解酪蛋白（CH）;08）MK＋6．BA1．O＋NAA0．1＋1．0g．L-1CH;（19）MK＋6-BA0．75＋NAA0．25＋1．0g．L-1CH;（20）MK＋6-BAl．0＋NAAO．25＋1．0g．L-1 CH;（21）MK＋6．BA1．5＋NAA0．25＋1．0g．L-1CH。生根培养基：（22）MK＋IBA0．5＋NAA1．O;（23）MK＋IBA1．O＋NAA0．5;（24）MK＋IBA1．0＋NAA1．O;（25）MK＋IBA1．5＋NAA0．5;（26）MK＋IBA1．5＋NAA1．0。培养基（7）-（26）添加2．5％的蔗糖。     

可见分光光度法测定人尿中痕量1-萘酚

目的：建立一种可见分光光度法单独测尿中痕量1-萘酚的新方法。方法：在碱性介质中,1-蔡酚（1-NAP）与氯霉素作用生成蓝色物质导致体系的吸光度增加,2-NAP不干扰测定。结果：该蓝色产物的最大吸收波长Amax=472．0nm,其吸光度与1-NAP摩尔浓度在7．64×10^-7mol／L-6．31×10^-4mol／L范围内线性关系良好,线性回归方程为△A=0．3146C＋0．0239,相关系数r=0．9973,检出限为2．29×10^-7mol／L,相对标准偏差RSD为3．25％-6．42％,加标回收率为95．3％-105．7％。结论：本方法灵敏、简单、快速、易于推广,用于人尿中1-NAP含量的单独测定结果满意。     

六价铬对水绵生长的毒性效应

为研究六价铬（Cr^6＋）对水绵（Spirogyrasp．）的毒性效应和水绵对六价铬的毒性响应,实验设置5个暴露组（4、6、8、10和12mg／L）和1个对照组。结果表明：96h后各暴露组对水绵的生长均有抑制作用,铬浓度越高,藻细胞叶绿素a越低,显示出较明显的剂量一效应关系;六价铬对水绵的96h的Ec。值为7．25mg／L。细胞浸出液电导率在低浓度（4～6mg／L）组上升较缓慢,在高浓度组（8～12mg／L）上升显著;丙二醛（MDA）累积含量在Cr6＋≥4mg／L时,累计含量上升较高（P〈0．01）,当Cr^6＋≥8mg／L时,累积含量上升较少。水绵细胞浸出液电导率与MDA存在显著正相关（P〈0．05,r=0．891）。水绵细胞浸出液电导率和MDA含量与六价铬浓度分别存在显著（P〈0．05,r=0．951）和极显著（P〈0．01,r=0．977）的非线性的毒性响应关系。     

高效液相色谱法测定羊痫疯丸中盐酸小檗碱含量

目的：建立高效液相色谱法测定羊痫疯丸中盐酸小檗碱含量的方法。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18（250mm×4．6mm,5μm）色谱柱,流动相：乙腈-0．05mol／L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至3）（25：75）,流速：1．0mL／min,检测波长264nm,柱温40℃。结果：线形范围是：盐酸小檗碱0．0446～1．1150μg,r=0．9998（n=5）。平均回收率为97．25％,RSD为3．14％。结论：方法简便、快速准确,重现性好。可作为羊痫疯丸的质量控制方法。     

大花茉莉的组织培养和植株再生

王植物名称大花茉莉（Jasminu。peand～m）。2材料类别茎节、叶片。3培养条件3．五诱导培养基（l）MS＋6－BA0．2～50mg／L（单位下同）;（2）MS＋6－BA0．2～5．0＋KT0．2～2．0＋IAA0．l～1．0;（3）SH＋6－BA0．2～5．0＋NAA0．l～1．0;（4）改良White＋KT02～2．0＋NAAof～1．co3．2生根培养基（回）l／2MS＋IBA0．l～1．0;（2）1／2MS＋IAA0．回～回．0;（3）1／2MS＋NAA0．1～1．0＋2,4－D0．0］十活性炭0．l％。以上均采用固体培养,琼脂06％,蔗糖2％,PH58。诱导培养基中附加少量的水解酪蛋白0．2％～05…     

白术提取物对六价铬致人外周血淋巴细胞 抗突变作用研究

目的：探讨白术提取物抗六价铬的致突变作用。方法：采用人外周血淋巴细胞程序外DNA合成（UDS）试验检测了0．03g、0．015g和0．0075／ml白术提取物对重铬酸钾（含Cr^6＋0．31ug/ml）所致淋巴细胞程序外DNA合成的影响。同时检测白术提取物与重铬酸钾的加入顺序对UDS的影响。结果：阳性对照（重铬酸钾,含CCr^6＋0.31ug/ml）组CPM值显著高于阴性对照（蒸馏水）组,P〈0．01。白术提取物与重铬酸钾同时加入以及两者间隔2h先后加入均显示白术提取物浓度与CPM值呈显著负相关（P〈0.05）,在上述不同加入方法中,白术提取物的各浓度均显示CPM值显著低于阳性对照。结论：白术提取物具有抑制Cr^6＋的致突变作用。     

复方黄连素片中盐酸小檗碱含量测定

目的：建立测试黄连素片中盐酸小檗碱含量的高效液相方法,并对此方法进行系统的方法学验证,以确保应用该方法测试的结果准确、可靠。方法：采用色谱柱：Agilent TC-C18柱（4．6 mm ×150 mm,5μm,Agilent,美国）,流动相：乙腈－0．05 mol／L磷酸二氢钾溶液（45∶55,含5％的0．05 mol／L庚烷磺酸钠溶液）,检测波长为265 nm。结果：盐酸小檗碱在2．5～80μg／mL范围内线性关系良好,得到线性回归方程为Y＝421 ．5X＋17．32,相关系数为0．9997（n＝6）;低、中、高浓度批内精密度的RSD值分别为0．30％、0．58％、0．30％,批间精密度的RSD为0．80％;重复性RSD为0．27％;低、中、高浓度的加样回收率分别为99．66％、99．88％、99．98％;供试品溶液室温放置8h稳定,RSD为0．41％。结论：本方法测定黄连素片中盐酸小檗碱的含量准确、可靠,操作简单、用时短,可用于黄连素片中盐酸小檗碱的含量测定。     

大金牛草的组织培养和快速繁殖

1植物名称大金牛草（Polygala glomerata Lour．）,别名：肥儿草、大金不换。2材料类别嫩梢。3培养条件（1）原球茎诱导增殖培养基：MS＋6-BA2．0mg．L-1（单位下同）＋NAA0．2;（2）原球茎分化培养基：1／2MS＋6．BA0．2;（3）生根培养基：1／2MS＋6．BA0．5＋0．1％活性碳。以上培养基均添加蔗糖30g-L。和琼脂5．0g·L-1,pH5．5-5．8,固化培养,培养温度为（24±2）℃,环境湿度60％-80％,光照强度30-50μmol．m-2．s-1,光照时间12h．d-1。     

血清降钙素原在鉴别细菌性感染与自身免疫性疾病活动期中的应用价值

目的：探讨血清降钙素原（procalcitonin,PCT）在鉴别诊断自身免疫性疾病活动期与细菌感染中的应用价值。方法：选择析深圳市保健办2011年1月-2012年3月收治的30例自身免疫性疾病活动期和34例细菌感染患者为研究对象,测定其血清c反应蛋白（C-reactive protein,CRP）和PCT的水平。结果：感染组患者CRP水平为（0．1162±0．0873）gm,PCT水平（2．37±7．02）±10^-3gm,自身免疫活动期患者CRP水平（0．0639±0．0687）gm,PCT浓度（0．09±0．08）×10^-3g／L。ROC曲线下面积（AUC）和95％可信区间（CI）分别为0．75和0186,0．61-0．83和0．74-0．94,差异具有统计学意义（P〈0．05）。CRP联合PCT水平预测的AUC为0．82．其与单独PCT水平相比没有显著性差别（P=0．74）。CRP的最佳临界值为0．0722g／L,灵敏度为73．5％,特异性为69．2％;PCT的最佳临界值为0．09×10^-3g/L,其灵敏度为82．1％,特异性为72．5％。结论：在鉴别活动期自身免疫疾病患者与细菌感染时,PCT的灵敏度与特异性比CRP高,但其联合CRP对此类诊断并无显著意义。     

表达CD19^＋CD56^-的多发性骨髓瘤浆细胞免疫表型的鉴别

目的：研究多发性骨髓瘤患者浆细胞和对照组正常浆细胞免疫表型,有效地识别表达CD19^＋CD56^-的多发性骨髓瘤恶性浆细胞。方法：采用四色流式细胞仪（BD,FACSCalibur）检测44例MM患者浆细胞以及25例健康骨髓捐献者正常浆细胞膜上的抗原表达。采用CellQuest软件分析结果。细胞膜表面抗原表达率大于20％定义为表达阳性。阳性率为表达阳性的患者及健康对照者所占百分比。结果：44例MM患者浆细胞免疫表型表达频率为：CD^138＋;97．72％（43／44）、CD38^＋：100％（44／44）、CD56^＋：63．64％（28／44）、CD19：84．09％（37／44）、CD200^＋：77．27％（34／44）、CD28^＋：38．64％（17／44）;25例对照组正常浆细胞免疫表型表达频率为：CD138^＋：100％（25／25）、CD38^＋：100％（25／25）、CD56^＋-：100％（25／25）、CD19^＋：96％（24／25）、CD200^＋：0％（0／25）、CD28^＋：0％（0／25）。在44例MM患者中,9％（4／44）患者表达CD19^＋CD56^-,利用CD200检测4例表达CD19^＋CD56^-的患者,有3例患者伴有CD200阳性表达,可与正常浆细胞鉴别。结论：CD200有利于鉴别表达CD19＋CD56-MM恶性浆细胞与正常浆细胞。     

绿宝石喜林芋的离体繁殖

1植物名称绿宝石喜林芋（Philodendronerubescens“GreenEmerald”）。2材料类别顶芽、侧芽。3培养条件不定芽诱导培养基：（1）MS＋6－BA3～6mg／L（单位下同）＋NAA0～0．5。不定芽增殖培养基：（2）MS＋6－BA2＋NAA0．互;（3）MS＋6－BA0．5＋NAA0．l。生根培养基：（4）MS＋NAA0．2;（5）1／2MS＋NAA0．2。以上每升培养基均附加蔗糖30g,琼脂7g,PH为58。培养温度为26士ZC,光照度为2000IX,每日光照12h。4生长与分化情况切取项芽或去顶后萌动生长的幼嫩侧芽作外植体,自来水冲洗30min,用75％的酒精漂洗20s,移至0…     

高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量

建立了一种高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。色谱柱为Diamonsil^TM（钻石）C18（4．6mm×150mm,5μm）,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（1．56g磷酸二氢钠／1000mL水,磷酸调节pH值3．8—4．0）（体积比为23：77）;检测波长为323nm,柱温为40℃。研究结果表明：线性范围为2．44—14．64mg/L,回归方程为y=41742x＋2287．9相关系数为R^2=0．9996,加标平均回收率为97．5％。本方法具有灵敏度高、重现性好、准确度高、操作简便等特点。