中国家蚕抗菌肽CBM1、CBM2的克隆和表达研究

根据所测定的中国产家蚕CBM1和CBM2 cDNA序列,设计成熟肽的特异性引物,将此基因与凝血因子Xa（FXa）的切割序列以PCR方法连接起来,克隆至pGEX—KG表达质粒中。该载体为改进的GST融合表达质粒,所携带的6个Gly有助于提高FXa的切割效率。克隆得到的融合载体在大肠杆菌JM109中扩增和筛选。经DNA测序,证实为含有正确序列的乙酰化的pGEX—KG—FXa—NCBM1（pKG—FXa—NCBM1）、非乙酰化的pGEX—KG—FXa—CBM1（pKG—FXa—CBM1）和乙酰化的pGEX—KG—FXa—NCBM2（pKG—FXa—NCBM2）、非乙酰化的pGEX—KG—FXa—CBM2（pKG—FXa—CBM2）。将该载体在BL21中诱导表达,得到GST-FXa切割位点NCBM1、CBM1、NCBM2、CBM2等4种融合蛋白。经SDS—PAGE,考马斯亮兰染色后,Lab—Work扫描,其表达产物达到15％～20％,每升培养液平均可得20mg融合蛋白。菌体总蛋白经GST-亲和层析柱得到纯的GST—FXa—NCBM1、GST—FXa—CBM1、GST—FXa—NCBM2、GST—FXa—CBM2融合蛋白,再经FXa酶切后,透析过柱得到重组的NCBM1和CBM1。平板抑菌试验证明,4种融合蛋白均有明显的生物学活性,且没有显著的差异。     

CBM在多糖底物降解中的应用进展

碳水化合物结合模块(carbohydrate-binding module, CBM)是碳水化合物活性酶的重要组成部分，其功能是识别并结合到特定的多糖底物上以提高催化结构域在底物附近的浓度及催化效率，帮助其更好地降解如纤维素、木聚糖、几丁质和黄原胶等大分子化合物。不同家族的CBM因其来源或结构不同往往会具有不同的底物结合特性。本文从CBM的家族、结构和功能等方面对CBM近年来的研究进行了综述，特别是对其作为融合单元运用到多糖底物的降解和糖苷水解酶改造方面的应用进行了总结。     

基于CBM的大型医院科室合著网络探析

目的 探讨医院专科化趋势下跨科室协作的可能性,为构建临床科室协作平台提供依据,并介绍华西医院学科协作经验。方法 以医院科室科研合著网络为切入点,应用社会网络技术,对医院科室合著情况进行量化分析,并对合著网络进行可视化处理。结果 目前该大型综合性医院专科化明显,但院内合著趋势强,尤其心内科与胸心外科、神经内科与神经外科关系十分密切,以老年科为中心形成多个内科科室集群。结论 医院应因势利导,进行组织与创新管理,促进心脏诊疗/神经以及老年病诊疗协作平台构建,努力实践“以病人为中心”。     

深黄被孢霉M6-22

应用PCR技术,从含有深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pTMICL6中,扩增出1.38kb的目的片段,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMID6,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVSc1中,在SC-Ura合成培养基中,选择到酵母工程株YMID6.在合适的培养基及培养条件下,加入外源底物亚油酸,经半乳糖诱导后,收集菌体.通过GC-MS对酵母工程株所含的全部脂肪酸进行色谱分析,结果表明,γ-亚麻酸的含量占酵母总脂肪酸的8.69%.     

The interaction between ADAM22 and 14-3-3β

ADAM family consists of a number of transmembrane proteins that contain a disintegrin and metalloprotease domain. ADAMs are involved in a highly diverse set of biological processes, including fertilization, neurogenesis, myogenesis and inflammatory response. The ADAM proteins have both cell adhesion and protease activities. Adam22 is highly expressed in human brain. The adam22-/- mice presented severe ataxia and died before weaning, but the function of ADAM22 is still unknown. 14-3-3 β interacting with ADAM22 was detected by using yeast two-hybrid assay. The specificity of interaction between ADAM22 and 14-3-3β was proved by in vitro binding assay and immunoprecipitation. The major 14-3-3β binding site was located in the last 28 amino acid residues of ADAM22 cytoplasmic tail. Protein 14-3-3β is abundant and plays an important role in mediating cell diffusion, migration and cell cycle control. The interaction of ADAM22 and 14-3-3β suggests that the ADAM22 may play a crucial role in neural function a     

The interaction between ADAM22 and 14-3-3β

ADAM family consists of a number of transmembrane proteins that contain a disintegrin and metalloprotease domain. ADAMs are involved in a highly diverse set of biological processes, including fertilization, neurogenesis, myogenesis and inflammatory response. The ADAM proteins have both cell adhesion and protease activities.Adam22 is highly expressed in human brain. Theadam22-/- mice presented severe ataxia and died before weaning, but the function of ADAM22 is still unknown. 14-3-3 β interacting with ADAM22 was detected by using yeast two-hybrid assay. The specificity of interaction between ADAM22 and 14-3-3β was proved byin vitro binding assay and immunoprecipitation. The major 14-3-3β binding site was located in the last 28 amino acid residues of ADAM22 cytoplasmic tail. Protein 14-3-3β is abundant and plays an important role in mediating cell diffusion, migration and cell cycle control. The interaction of ADAM22 and 14-3-3β suggests that the ADAM22 may play a crucial role in neural function and development.     

The interaction between ADAM22 and 14-3-3β

ADAM family consists of a number of transmembrane proteins that contain a disintegrin and metalloprotease domain. ADAMs are involved in a highly diverse set of biological processes, including fertilization, neurogenesis, myogenesis and inflammatory response. The ADAM proteins have both cell adhesion and protease activities. Adam22 is highly expressed in human brain. The adam22-/- mice presented severe ataxia and died before weaning, but the function of ADAM22 is still unknown. 14-3-3β interacting with ADAM22 was detected by using yeast two-hybrid assay. The specificity of interaction between ADAM22 and 14-3-3β was proved by in vitro binding assay and immunoprecipitation. The major 14-3-3β binding site was located in the last 28 amino acid residues of ADAM22 cytoplasmic tail. Protein 14-3-3β is abundant and plays an important role in mediating cell diffusion, migration and cell cycle control. The interaction of ADAM22 and 14-3-3β suggests that the ADAM22 may play a crucial role in neural function and development.     

The CBM signalosome: Potential therapeutic target for aggressive lymphoma?

The CBM signalosome plays a pivotal role in mediating antigen-receptor induced NF-κB signaling to regulate lymphocyte functions. The CBM complex forms filamentous structure and recruits downstream signaling components to activate NF-κB. MALT1, the protease component in the CBM complex, cleaves key proteins in the feedback loop of the NF-κB signaling pathway and enhances NF-κB activation. The aberrant activity of the CBM complex has been linked to aggressive lymphoma. Recent years have witnessed dramatic progresses in understanding the assembly mechanism of the CBM complex, and advances in the development of targeted therapy for aggressive lymphoma. Here, we will highlight these progresses and give an outlook on the potential translation of this knowledge from bench to bedside for aggressive lymphoma patients.     

ADAM22蛋白与14-3-3β蛋白之间的相互作用

ADAM家族是一类具有去整合域和金属蛋白酶域的跨膜蛋白, 广泛参与各种重要的生理过程, 如精卵结合、神经系统发育、成肌细胞融合以及炎症反应等. 该家族蛋白具备潜在的粘连和蛋白酶活性. adam22在脑部高度表达, 基因剔除小鼠则出现严重的共济失调, 并在断奶前死亡, 但其作用机制不详. 用酵母双杂合系统筛选到与ADAM22相互作用的蛋白质14-3-3b, 离体结合实验、免疫共沉淀进一步证实了ADAM22与14-3-3β蛋白相互作用的专一性. ADAM22胞内部分系列缺失实验表明, C端第864~892氨基酸残基是14-3-3β的结合基序. 14-3-3β在脑部大量表达, 具有介导细胞的扩散、迁移及调节细胞周期等重要功能. 因此, 本实验证实这两种蛋白质之间存在相互作用,为阐明ADAM22在神经系统发育中的功能奠定了基础.     

白介素22

近两年 ,发现了多种白介素 10家族新成员 :黑素瘤分化相关基因 7产物 (ｍｅｌａｎｏｍａｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅ 7,ＭＤＡ 7)、单纯疱疹病毒转化的Ｔ淋巴细胞产生的ＡＫＫ 15 5蛋白、Ｚｃｙｔｏ 10、巨细胞病毒编码ＩＬ 10 (ｃｍｖＩＬ 10 )、白介素 19(ＩＬ 19)、ＩＬ 2 0和ＩＬ 2 2。本文重点简述ＩＬ 2 2及其受体的研究进展。ＩＬ 2 2也称为ＩＬ 10相关Ｔ细胞衍生的可诱导因子 (ＩＬ 10 ｒｅｌａｔｅｄＴｃｅｌｌ ｄｅｒｉｖｅｄｉｎｄｕｃｉｂｅｆａｃｔｏｒ,ＩＬ ＴＩＦ)。比利时Ｌｕｄｗｉｇ癌…     

SM22-α蛋白结构与功能的生物信息学分析

[目的]通过生物信息学分析手段对SM22-α蛋白结构与作用进行系统性分析。[方法]从NCBI数据库中获取SM22-α蛋白的基本信息,应用NCBI GenBank、ExPAsy、TMHMM Server v.2.0、NetPhos 3.1 Server、IEDB、SIGNALP 5.0 Server等生物信息学分析软件对SM22-α蛋白的氨基酸序列、理化性质、跨膜结构、亲水/疏水性、功能位点、信号肽、序列同源性、糖基化和磷酸化位点、空间结构以及抗原表位进行分析。[结果]SM22-α蛋白编码201个氨基酸,为碱性蛋白,其等电点为8.85,不稳定指数为31.85,并将其归为稳定蛋白。其平均亲水系数为-0.607,为亲水性蛋白。根据IEDB在线软件发现SM22-α蛋白序列的第4-31、39-50、70-89、105-111、116-122、138-197存在B细胞抗原表位。利用HLA-A*0.2:0.1算法预测SM22-α蛋白序列第61和130位序列表面存在2个T细胞抗原表位;若利用HLA-DRBI*0401算法预测则第142位序列存在1个T细胞抗原表位。SM22-α蛋白的二级结构中α螺旋占46.77%,延伸链占6.47%,β-转角占4.48%,无规则卷曲占42.29%。且通过生物信息学分析可知SM22-α蛋白在不同物种之间的同源性为97.0%~68.7%。[结论]SM22-α为碱性、稳定、亲水性胞外蛋白,且蛋白表面含有T、B细胞抗原表位,可为其抗原性药物研究提供理论参考。     

案例教学法(CBM)在康复治疗师培训中的应用和评价

目的:探讨案例教学法在康复治疗师培训中的应用。方法:100名康复治疗师志愿者按从业时间分为低、中、高级治疗师,随后将不同资格的志愿者平均分配到传统教学法教学组(对照组)和案例教学法教学组(实验组),以脑性瘫痪的康复为主要内容开展培训。培训结束后,针对学员对基础知识的掌握和病例的分析进行考核。结果:实验组的学员基础知识的平均分高于对照组(P0.05),并且对病例的分析能力也显著高于对照组(P0.01)。调查问卷结果显示,多数实验组学员认为案例教学法能够调动学习积极性,并提高独立思考、分析问题的能力。结论:在康复医学教学中,案例教学法在激发学习兴趣、提高学习效率和学生综合素质方面优于传统的教学方法。     

中国动物学会第十六届会员代表大会暨学术讨论会第二轮通知2009-5-22

2009年是中国动物学会成立75周年,理事会决定于2009年10月19-22日在重庆市召开中国动物学会第十六届会员代表大会暨学术讨论会,会期4天(包括1天报到).     

嗜碱芽孢杆菌XE22-4-1碱性弹性蛋白酶发酵条件的研究

从西藏天然碱湖中筛选到一株产碱性弹性蛋白酶 (alkalineelastase)菌株 ,最适生长pH为 1 0 0 ,经鉴定为Bacillussp .,编号XE2 2 4 1。该菌产酶最适碳源为 2 %葡萄糖 ,氮源为0 2 5%酵母粉 ,豆饼粉对发酵产酶有促进作用。 2L发酵罐实验表明 ,溶解氧是影响该菌株产酶的重要因素。通过提高通气量和改变搅拌速度 ,该菌株可在发酵 48h内达到产酶高峰 ,酶活力最高达 2 66u mL     

HSP22研究进展

HSP22是小热休克蛋白超家族成员之一,主要在脑、心肌和骨骼肌广泛表达,而在子宫、前列腺、肺和肾脏等组织表达一般.当各种物理、化学等因素刺激时,可启动HSP22 mRNA快速表达;再通过HSP22 N末端区域和(或)C末端区域特定位点的突变或磷酸化反应,不同构象间相互转化及作用,在保持伴侣活性、激酶活性、触发炎性介质释放、抗凋亡与致凋亡和保护细胞骨架等方面起主要作用.其活性下降会导致遗传性末梢运动神经病、Alzheimer病、结蛋白相关心肌病、乳腺癌及白内障等相关疾病的发生发展.由于其在生命领域的特殊功能作用,目前生物医学界对其研究广泛.本文收集近期国内外文献,从分子和细胞水平综述了HSP22在基因表达、分子结构、生物学活性及与临床疾病关系的最新研究进展,以供学习交流.     

节杆菌82菌株降解胆甾醇生成3-氧代-联原胆烷一1，4-二烯-22-酸

从19株有降解胆甾醇能力的微生物中,筛选出一株节秆菌(Arithrobacter)82菌株,它能在含硫酸钴的培养基中转化胆甾醇和积累3-氧代-联原胆烷-1,4-二烯-22酸(BNc)。转化过程中形成的主要中间体为胆甾烯酮(Cholestenone)。降低培养基中葡萄糖的浓度并增加玉米浆的量,可促进胆甾烯酮侧链的降解,有利于BNC的积累。BNC可在酸性溶液中形成结晶并沉淀下来,故适宜于离心收集。用传统的理化方法及光谱分析技术测定了产物的结构及特性。     

中国家蚕抗菌肽基因CBM1全长cDNA序列测定及其基因结构分析

用大肠杆菌感染中国家蚕（Bombyx mori）蛹,从中提取总RNA,用RT-PCR方法获得蚕抗菌肽基因CBM1 cDNA部分片段并克隆测序,以此蚕抗菌肽基因CBM1的部分片段,设计特异性引物,用3’、5’RACE的方法,获得蚕抗菌肽基因CBM1 cDNA的全长序列;用PCR的方法,从中国家蚕蛹基因组DNA获得抗菌肽CBM1基因的700bp、1100bp左右的2个片段,初步证实中国家蚕抗菌肽基因在单倍体染色体中至少存在2个拷贝。     

枯草芽孢杆菌SA-22β-甘露聚糖酶的纯化及其特性

利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、SephadexG 75凝胶过滤和DEAE 5 2离子交换柱层析的方法 ,将枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶纯化了 30 75倍 ,同时 ,该酶比活达到 34780 5 6u mg ,收率达到 2 3 4 3%。利用SDS PAGE凝胶电泳和SephadexG 75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶的分子量分别为 38kD和34kD。实验发现该酶的最适pH为 6 5 ,在pH 5～ 10的范围内稳定 ;该酶最适温度为 70℃ ,在 5 0℃保温 4h后其活力不变 ,在 6 0℃保温 4h后剩余酶活为 74 2 % ,70℃的酶活半衰期为 3h。实验还发现Hg2 对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的Km 和Vmax值分别为 11 30mg mL ,4 76mg mL和 188 6 8(μmol·mL- 1 ·min- 1 ) ,114 94(μmol·mL- 1 ·min- 1 )