肾综合征出血热病毒糖蛋白的提纯和鉴定

以感染肾综合征出血热病毒(HFRSV)的Vero E6细胞为材料,用免疫亲和层析结合制备聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)从感染细胞中提纯了HFRSV两种糖蛋白。先用免疫亲和层析从感染细胞的粗制抗原中获得含有四种蛋白的混合液,用[~3H]-氨基葡萄糖在感染细胞中标记病毒糖蛋白,观察到[~3H]-氨基葡萄糖只结合入78K和57K的病毒蛋白。再用制备SDS-PAGE从HFRSV混合液中提纯78K和57K两种蛋白。实验证明这两种糖蛋白均具中和抗原决定簇,57K的糖蛋白尚具血凝活性,初步鉴定表明这两种糖蛋白相当于文献报道的HFRSV G_1和G_2。     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒50k蛋白的分析

用18株抗肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,以下简称HFRS)病毒McAb,以Western-blot技术分析了纯化的该病毒50k蛋白。结果有7株McAb可与该蛋白反应。这7株McAb的特性(包括感染细胞膜抗原免疫荧光染色模式、中和活性及HI活性等)亦各不相同,提示它们所针对的抗原决定簇的特性也不同。用ELISA阻断试验等证明,上述7株McAb中,有5株所针对的抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。分析结果表明,该50k蛋白的特性及结构均较复杂,尚须进一步研究。     

肾综合征出血热病毒糖膜蛋白纯化工艺的改进

为了提高肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）纯化疫苗中糖膜蛋白（ＧＰ）的纯度，采用调节ｐＨ值使乳鼠脑组织蛋白沉淀的方法，对蔗糖密度梯度区带离心脱糖后的ＧＰ样品进一步纯化。试验结果表明，此方法简便易行，能大幅度降低样品中的杂蛋白含量、提高ＧＰ纯度。以该法纯化前、后的样品免疫家兔，产生的血清中和抗体水平基本一致。用此方法，可省去部分昂贵的纯化设备，降低生产成本，为ＨＲＲＳ纯化疫苗的批量生产提供又一简单可行的途径     

肾综合征出血热纯化疫苗的SDS-PAGE分析

为了证明蛑综合征出血热纯化疫苗的主要成分坦病毒蛋白,采用出血热纯化疫苗经浓缩后进行SDS－PAGE和Western-blotting分析。结果 经SDS－PAGE显示,肾综合征出血热纯化疫苗有三条蛋白带,分子量分别约为70kD、55kD和50kD,与汉坦病毒三种结构蛋白（糖蛋白G1、G2和核蛋白NP）的分子量相符;经Western-blotting显示,分子量50kD的蛋白带反应阳性,分子量70kD和55kD的蛋白带无反应,认定出血热纯化疫苗的主要成分为汉坦病毒蛋白,主要由G1、G2和NP三种结构蛋白构成。     

多克隆和单克隆抗体鉴定有肾综合征出血热病毒的四种血清型

<正> 前言 有肾综合征出血热(HFRS)病毒广泛地分布于欧亚大陆、日本、美洲和非洲。斯堪的纳维亚、苏联、中国和朝鲜是人类HF-RS疾病的地方性流行疫区。朝鲜出血热(KHF)的病因汉坦(Hantaan)病毒76-118株是由Lee等人于1978年从黑线姬鼠(A-podemus agrarius)分离到。1975年以来,日本从一些HFRS病例联想到与实验室大鼠     

肾综合征出血热病毒核衣壳蛋白在抗感染免疫中的应用

采用区带离心纯化的肾综合征出血热（ＨＲＲＳ）汉滩病毒ＬＲ１株核衣壳蛋白（ＮＰ）分别免疫新西兰白家兔和昆明种小鼠。以ＮＰ免疫家兔后用ＬＲ１株病毒攻击,实验显示,免疫后的家兔可保护１００ＩＤ５０同株病毒的攻击;ＮＰ免疫母鼠所产的乳鼠能抵抗１０＾４－１０＾５ＬＤ５０同株病毒的攻击。以上结果表明：ＨＲＲＳ的病毒ＮＰ组分在抗感染免疫中起重要作用。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒和新疆出血热(XHF)病毒形态比较

用超薄切片电镜技术比较了包括KHF在内的7株HFRS病毒,并与分类地位已明确的XHF病毒作了形态学比较,结果说明HFRS病毒具有多样形态、多部位成熟、多方式释放等形态学持点,可能是布尼科病毒新属成员。     

斑点杂交检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

本研究用非放射性标记物—地高辛碱性磷酸酶标记肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）ｃＤＮＡ制备探针,检测恙螨、鼠肺中ＨＦＲＳＶＲＮＡ的ＲＴＰＣＲ扩增产物中目的片段。结果表明：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体螨５０只组、１０只组,游离螨５０只组、１０只组,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ,抗原阴性鼠肺１０００ｍｇ检测结果为阳性,呈现明显紫褐色斑点,而ＲＴＰＣＲ检测时未能扩增出ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠肺１０００ｍｇ和游离螨１０只组中的目的条带。实验结果说明,斑点杂交检测方法比ＲＴＰＣＲ敏感。     

肾综合征出血热病毒隐性感染的动态观察

本文报道ＨＦＲＳ病毒隐性感染的连续三年动态观察,健康人群ＨＦＲＳ病毒抗原检测以未梢血片,用ＤＡＦ法检测,结果表明,贵州ＨＦＲＳ高发疫区阳性率为４．２３％,动态观察连续三年结果与此基本一致。抗原检还发现同室居住有多人呈阳性。健康人群ＨＦＲＳ抗体检测以ＩＦＡ法,结果贵州ＨＦＲＳ高发疫区人群阳性率为６．６％,动态观察连续三年中阳性率逐年有上升趋势,但这种上升与发病率大幅度下降呈不平行关系。抗体检测提示,隐性感染人群抗体滴度不高,对疫区低滴度抗体阳性可疑病人的诊断应结合多方综合考虑,以免误诊。     

新城疫病毒(NDV)疫苗株的纯化和结构蛋白的初步鉴定

本文报道新城疫Ⅰ系和Ⅳ系疫苗病毒的分离纯化,以及对其结构蛋白的初步鉴定。 将中国兽医药品监察所提供的冻干苗(NDV Ⅰ系和Ⅳ系)复壮2次,使其鸡胚感染滴度达10~6,血凝滴度为640(0.1ml)以上。按常规接种9～10日龄受精SPF鸡胚,35℃培养,收集36～72小时鸡胚尿囊液,测定血凝及滴度,置-20℃冰箱备用。     

流行性出血热病毒单克隆抗体的特性鉴定及其对病毒结构蛋白作用的初步研究

本文运用放射免疫沉淀法(RIP)、Western-blot及ELSA夹心法,对一组针对流行性出血热病毒(EHFV)L99株、C4株的单克隆抗体(McAb)进行特性鉴定,其中4株McAb针对糖蛋白G2,29株针对核壳蛋白(NP),1株针对糖蛋白G1和NP。微量中和试验和血凝抑制(HI)试验分析表明,虽绝大多数抗NP McAb既无中和活性亦无HI活性,但有1株例外。具有明显的中和活性和HI活性,提示EHFV核壳蛋白上可能存在中和抗原和血凝抗原决定簇。2株抗G2 McAb具有较高的HI活性,1株抗G2 McAb有较低的中和活性和较高的HI活性,另一株抗G2 McAb仅具有中和活性,表明EHFV糖蛋白G2上存在独立的中和与血凝抗原决定簇,也可能存在具有中和、血凝双重功能的决定簇。竞争ELISA分析显示。G2蛋白上某些中和位点和血凝位点虽然独立分布,但在某一区域可能相当靠近或有部分重叠。     

肾综合征出血热研究进展

肾综合征出血热研究进展蔡增林,范永星（沈阳军区军事医学研究所,１１００３１）１９８２年世界卫生组织（ＷＨＯ）在日本东京召开的一次病毒性出血热工作会议上统一命名为“肾综合征出血热”,我国卫生部１９９５年规定改称流行性出血热为肾综合征出血热（Ｈｅｍｏｒｒ...     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

肾综合征出血热 (Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属 (Hantavirus,HV)中的病毒引起的急性传染病,该病的病死率较高,早期诊断和治疗尤为重要.     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

To establish a rapid, sensitive and specific diagnostic assay for Hantavirus with microarray techniques, specific primers and probes were designed according to the conservative and specific DNA sequence of 76-118 strain and R22 strain. The probes were spotted on glass slides to form microarrays.The Cy3-1abled single stranded DNA fragments prepared by dissymmetical PCR were hybridized with the probes on the glass slides. The microarrays were scanned and analyzed with a scanner. The results showed that the DNA microarray could detect the different typed DNA of HTN and SEO with adequate specificity and sensitivity. The developed DNA microarray and techniques might be a very useful method for diagnosis and prevention, and could be widely applied in specific pathogens detection ofinfectious diseases such as hemorrhagic fever with renal syndrome.     

不同佐剂肾综合征出血热纯化疫苗体液免疫效果的研究

在肾综合征出血热(HFRS)纯化疫苗原液中分别加入Al(OH)3、IL-2、GM-CSF、CFA等佐剂的一种或两种,以不加佐剂的纯化疫苗原液作为对照,分别免疫BALB/c小鼠,定期进行眼眶采血,用ELISA法检测血清中抗HFRS病毒的抗体水平。用不同佐剂的HFRS纯化疫苗免疫BALB/c小鼠后,其抗体产生的时间和滴度均不同。佐剂组与对照组相比抗体产生早且(或)滴度高,IL-2佐剂组在免后第3天就可以检测到抗体;联合使用两种佐剂组与单独使用一种佐剂组相比,抗体产生早、滴度高。结果表明,上述各种佐剂对HFRS纯化疫苗诱导BALB/c小鼠产生的免疫应答均有一定的增强作用;IL-2对早期免疫应答、早期抗体的产生有显著意义;联合应用两种佐剂疫苗的免疫效果优于只加其中一种佐剂的疫苗。     

东北三省6株肾综合征出血热病毒生物学性状的研究

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是我国重点防治的急性传染病,对于流行于不同地区的汉坦病毒(hanatavirus)进行分离和系统地鉴定,可以为HFRS的防治提供科学依据,特别是对流行株血清型及基因型的确定,是研制疫苗和确定防治重点及对策的重要前提,也为研究我国汉坦病毒的遗传和进化特征奠定了基础。研究对6株流行于东北三省的汉坦病毒进行了全面鉴定,其中H8205、H8207株为人源性汉坦病毒,其余均为鼠源性汉坦病毒。研究表明,6株病毒具有病毒型别明确,抗原性较为广谱,免疫原性好,在Vero细胞上适应能力强及病毒滴度高,以及来源及传代历史清楚等特点,适合作为双价HFRS纯化灭活疫苗候选毒株,并且可建立起完善和合格的生产用毒种库,为我国生产以Vero细胞为基质的双价肾综合征出血热纯化灭活疫苗奠定了坚实的基础。     

肾综合征出血热病毒T-E抗原的制备及其特性研究

本试验建立了用Tween 80和乙醚处理HFRSV感染鼠脑、肺制备特异性抗原的方法,该抗原具有安全、稳定、特异性好、制备简单的特点,可能是HFRSV抗原的共同组分。