自身免疫型卵巢早衰模型的研究

目的为了更好地建立自身型卵巢早衰模型,采用不同的造模时间和佐剂观察ZP3诱导的免疫型卵巢早衰模型建立的相关因素。方法将动情周期正常的B6AF1小鼠,随机分为正常组、模型A组、模型B组、模型C组、模型D组。造模结束后取小鼠血清检测性激素,取卵巢观察病理改变、透明带的变化、颗粒细胞的凋亡。结果除模型A组外,其余3组均表现出动情周期紊乱、高促性腺激素低雌激素、闭锁卵泡增多、透明带明显、卵巢凋亡细胞增多的现象,与各组相比模型C组和D组在闭锁卵泡数量、卵巢凋亡细胞和透明带的变化上更加明显。结论 ZP3诱导可造成免疫型卵巢早衰,其中3次免疫的两组成模效果更好,成模率在80%,可作为今后建模的参考。     

当归多糖通过AKT/FOXO3通路调节免疫性卵巢早衰小鼠内分泌功能

为探讨当归多糖(angelica polysaccharide,AP)对免疫性卵巢早衰小鼠内分泌功能的影响及分子机制,本研究将60只雌性BALB/c小鼠分为正常组、模型组、AP低剂量(100 mg/kg)、中剂量(200 mg/kg)、高剂量(400 mg/kg)组和补佳乐阳性组,以小鼠透明带多肽为抗原,皮下多点注射建立免疫性卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠模型,灌胃相应药物,连续治疗4周后检测各组小鼠卵巢指数,检测各组小鼠血液SOD和MDA水平;通过ELISA检测各组小鼠卵巢组织IL-1β和IL-6水平,Western blotting检测各组小鼠p-AKT和FOXO3蛋白表达水平。与空白组相比,模型组小鼠卵巢指数显著降低,与模型组比较,AP低、中、高剂量组和阳性组小鼠卵巢指数显著升高,差异具有统计学意义(p<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠血液SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,与模型组比较,AP低、中、高剂量组和阳性组小鼠血液SOD活性显著升高,MDA含量显著降低。ELISA结果显示,与空白组比较,模型组小鼠卵巢组织IL-1β和IL-6含量显著升高,与模型组比较,AP低、中、高剂量组小鼠卵巢组织IL-1β和IL-6含量显著降低,差异具有统计学意义(p<0.01)。Western blotting结果显示,与空白组比较,模型组小鼠卵巢p-AKT和FOXO3蛋白表达显著降低,与模型组比较,AP低、中、高剂量组和阳性组小鼠卵巢p-AKT和FOXO3蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(p<0.01)。本研究结果说明,当归多糖AP激活AKT/FOXO3通路,抑制小鼠氧化应激,改善免疫性卵巢早衰小鼠内分泌功能,可在一定程度上抑制免疫卵巢早衰。     

卵巢颗粒细胞凋亡的调控因素

卵泡闭锁是哺乳动物卵巢中一种普遍现象,其实质是由卵巢颗粒细胞凋亡造成的。颗粒细胞的状态已经成为衡量卵母细胞质量乃至胚胎发育能力的一个重要参考指标,因此对颗粒细胞的凋亡开展研究显得十分必要。调控颗粒细胞凋亡的因素有多种,本文从与颗粒细胞凋亡相关的激素、与颗粒细胞凋亡相关细胞因子和与颗粒细胞凋亡相关的基因三方面对卵巢颗粒细胞凋亡的调控因素进行综述。     

骨髓问充质干细胞移植对VCD所致卵巢损伤的修复研究

目的：探讨小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对去氧乙烯基环己烯（VCD）所致卵巢早衰治疗的可行性。方法：采用VCD（160mgkg^-l,day^-1）连续腹腔注射来诱导小鼠卵巢早衰。每侧卵巢注射转染了绿色荧光基因小鼠骨髓来源的MSCs,于移植后14、28天及45天,取各组血液标本及卵巢组织,同时观察小鼠动情周期的变化;酶联免疫法检测血清FSH、LH水平,显微镜下观察MSC在卵巢的分布。结果：MSCs移植后各组均可见绿色荧光,并且主要分布于卵巢间质区,卵巢泡膜细胞区也可见绿色荧光细胞。MSCs组动情周期较实验对照组缩短,FSH与LH水平较实验对照组低,差异具有显著性。结论：骨髓间充质干细胞可改善卵巢早衰小鼠的卵巢内分泌功能,并且长时间存在于卵巢组织。骨髓间充质干细胞可能成为卵巢早衰治疗的新方法。     

草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3 DNA疫苗免疫不育效果的研究

为探讨不同种类小鼠卵透明带3（zp,）的免疫不育效果,并筛选高效且具有物种特异性的DNA抗生育疫苗,本研究选择草原兔尾鼠卵透明带3（Lzp3）和昆明白小鼠卵透明带3（Mzp3）构建不同的DNA抗生育疫苗表达载体,pcDNA3-mzp3（pcD-M）、pcDNA3-1zp3（pcD-L）、pcDNA3-aat-comp-mzp3（pcD-ACM）和pcDNA3-aat-comp-lzp3（pcD-ACL）分别免疫NIH小白鼠。研究中用水动力转染技术取代传统的Hela细胞真核转染检测小鼠体内真核表达情况．结果表明四种质粒均能在小鼠肝脏中进行表达;ELISA图示表明重组质粒均能使小鼠激发较高水平的特异性抗体;抗生育结果表明四种DNA疫苗均具有免疫不育的效果（P〈0．05）,其中pcDNA3-aat-comp-mzp3（pcD-ACM）的免疫效果最好（P〈0．01）;卵巢病理切片H．E染色结果显示pcD-M和pcD-L组卵巢结构与对照小鼠区别不大,而pcD-ACL和pcD-ACM组卵巢结构发生病理性变化。结果初步说明草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3对NIH小白鼠均有抗生育效果,但不具有物种特异性。     

Annexin I在PCOS大鼠颗粒细胞中的表达及意义

目的：探讨膜联蛋白I（AnnexinI）在多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠卵泡颗粒细胞的表达及生物学意义。方法：采用免疫组织化学方法及灰度值测定AnnexinI在PCOS组和对照组的卵泡颗粒细胞中的表达。结果：AnnexinI在两组中的各级卵泡颗粒细胞中均有表达,PCOS组AnnexinI在窦状卵泡中表达显著高于对照组（P〈0．05）。结论：PCOS组AnnexinI在窦状卵泡颗粒细胞的表达上调,且PCOS中窦状卵泡颗粒细胞的凋亡增加,说明AnnexinI参与了卵巢颗粒细胞的凋亡过程,并且发挥了重要作用。     

磷酸二酯酶5在小鼠卵巢内的表达

目的探讨cGMP特异性结合的磷酸二酯酶5（PDE5）在小鼠卵巢内的定位和表达情况。方法应用免疫组织化学对小鼠卵巢切片进行染色,检测PDE5在卵巢内不同部位的表达情况。利用Western blot检测PDE5在小鼠不同组织和细胞内的表达情况。结果PDE5在小鼠卵巢的黄体细胞（CL）和卵泡膜细胞（TC）上有强表达,卵母细胞（Oos）上以及大有腔卵泡的卵丘细胞（CCs）也有表达,而在小卵泡的颗粒细胞上没有表达。结论揭示了PDE5在小鼠卵巢内的表达情况,为进一步研究PDE5对卵巢功能的调节提供了生理学基础。     

人参皂甙Rb1对环磷酰胺所致卵巢早衰大鼠的保护作用

目的探讨人参皂甙Rb1对化疗所致卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)大鼠的Bcl-2及Bax基因表达的影响。方法选用30只2-3月龄具有正常动情周期雌性Wistar大鼠随机分3组,分别为对照组,治疗组和模型组。采用免疫组化和免疫印迹方法分别观察和半定量检测POF大鼠卵巢凋亡调节基因Bcl-2和Bax的蛋白表达情况,同时对比观察人参皂甙Rb1对其表达的影响。结果模型组卵巢颗粒细胞Bax蛋白的平均光密度值较对照组明显增高(P0.05);模型组Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下调(P0.05)。Rb1治疗后Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax蛋白表达明显下调(P0.05)。结论 Rb1可能是通过下调bax蛋白水平减少卵巢颗粒细胞的凋亡,对化疗所致卵巢早衰起到治疗的作用,进而延缓卵巢衰老。     

转铁蛋白抑制大鼠卵泡颗粒细胞FSH受体的结合与维持

转铁蛋白能抑制大鼠卵泡颗粒细胞的分化,但其机理尚不清楚。本实验用已烯雌酚处理后分离的大鼠颗粒细胞,观察了转铁蛋白对FSH结合到颗粒细胞,以及在培养过程中对颗粒细胞FSH受体量维持的影响。结果表明,生理浓度范围的转铁蛋白部分地阻断了~(125)I-rFSH结合到颗粒细胞上;将转铁蛋白与FSH一起处理细胞,发现它能剂量依赖性地抑制FSH对颗粒细胞FSH受体的维持作用,并表现为孕酮及雌二醇的分泌减少。     

海参花抗氧化作用研究

目的：近年来关于天然活性成分的抗氧化特性研究越来越受到人们的关注,大量研究表明海参能通过抗氧化作用,减轻自由基对组织的损伤,提高机体免疫力。环磷酰胺可引起组织氧化损伤,导致卵巢早衰。为此,本文着重研究海参花对卵巢早衰（POF）小鼠的抗氧化作用。方法：选取健康雌性昆明小鼠80只,随机分为8组,每组10只,分别为正常组,模型组,海参花水提物低、高剂量组,海参花醇提物低、高剂量组,海参花冻干粉组和阳性药组。除正常组每天注射生理盐水外,其余各组每天注射环磷酰胺（28mg/kg）,连续5天,造成小鼠卵巢早衰、生殖系统紊乱。造模成功后,治疗组分别灌服海参花提取物和阳性药,正常组和模型组给予同体积蒸馏水。末次灌胃禁食,处死迅速解剖取出卵巢和子宫,低温下匀浆组织。测定各组小鼠卵巢及子宫组织中总蛋白含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量,并测定各组小鼠间子宫、卵巢、脾、胸腺脏器系数。结果：与模型组相比,海参花提取物能显著增加小鼠的子宫、卵巢、胸腺等脏器重量,升高卵巢及子宫组织中总蛋白含量、SOD活性、GSH-Px活性,并能降低MDA含量。结论：海参花提取物能改善环磷酰胺引起的卵巢和子宫氧化损伤,具有良好的抗氧化作用,为海参花的研究开发提供理论依据。     

卵泡颗粒细胞凋亡相关蛋白的研究进展

哺乳动物的卵巢中存在大量卵泡。大多数卵泡在发育过程中发生闭锁而消失,只有少数可以发育到成熟而排卵。卵泡是由卵母细胞与其周围的颗粒细胞构成的。卵泡颗粒细胞的凋亡是卵泡闭锁的主要原因。颗粒细胞凋亡相关蛋白通过参与凋亡通路及凋亡信号转导调节凋亡。本文就哺乳动物卵泡颗粒细胞凋亡相关蛋白的研究进展进行综述。     

多囊卵巢综合征模型鼠颗粒细胞凋亡及TRAIL蛋白的表达

目的通过观察卵巢颗粒细胞凋亡及TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)蛋白的表达情况,探讨颗粒细胞凋亡与PCOS发病的相关性及凋亡调控蛋白TRAIL在PCOS颗粒细胞凋亡中的作用。方法采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,3’-末端原位标记法(TUNEL)检测大鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况,免疫组化染色及RT-PCR分析检测TRAIL蛋白及TRAIL mRNA在颗粒细胞的表达。结果PCOS组大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞凋亡发生率及TRAIL蛋白的表达较对照组明显增强(P<0.01,P<0.05),窦前卵泡颗粒细胞凋亡发生率及TRAIL蛋白的表达两组无显著性差异(P>0.05),两组卵巢始基卵泡颗粒细胞未发现凋亡征象及TRAIL蛋白表达。PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞TRAIL mRNA的表达较对照组明显增强(P<0.01)。结论PCOS大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞凋亡明显增强,TRAIL在PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控中发挥了作用。     

卵母细胞透明带异常及其对助孕结局影响的研究进展

人类透明带(zona pellucida,ZP)是在卵泡发生过程中由卵母细胞和颗粒细胞共同分泌的由ZP1-ZP4四种糖蛋白分子组成的高度有序结构,它与卵母细胞的成熟、受精、胚胎发育及妊娠结局等预后紧密关联。许多生殖中心实验室发现有些患者的卵出现全部或部分的透明带异常,而且不同实验室发现的透明带异常类型各异。研究发现这些透明带异常与卵母细胞受精、胚胎发育及临床结局有一定的相关性。本文综述了关于透明带异常及其对卵母细胞受精、胚胎发育潜能和临床结局的影响的研究进展。     

雄性受体小鼠性腺对移植卵巢卵母细胞生长发育的影响

目的探索雄性受体性腺对移植卵巢卵母细胞生长发育的影响。方法将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,将雄性受体小鼠分为性腺摘除组和性腺在位组,于21d回收移植卵巢,以评价雄性小鼠性腺对新生小鼠卵巢移植体卵母细胞生长发育的影响。结果移植后21d,性腺摘除组和性腺在位组卵巢回收率分别为80.0%和92.9%,移植体生长增大;每个卵巢平均回收卵母细胞数分别为(30.4±4.3)和(42.4±11.1)个,两者差异不显著(P0.05);性腺摘除组回收的均为GV期卵母细胞,性腺在位组大部分为GV期卵母细胞,有的达到MII期。结论雄性受体小鼠能够支持移植卵巢卵母细胞的生长发育,雄性受体的性腺对其影响不明显。     

大熊猫卵泡及卵母细胞发育的研究

本文用５只大熊猫卵巢作了连续切片观察,测量分析了卵泡、卵母细胞和透明带的生长发育与成熟过程,以及它们之间的相互关系：（１）大熊猫卵泡及卵母细胞具哺乳类动物双相生长的共同特点,在生长过程中,仅 极少数优势卵泡被确定下来,其余卵泡均在不同时期成为闭锁卵泡,特别在发情期闭锁卵泡黄体化及囊肿现象居多。（２）透明带出现在单层卵泡细胞呈低柱状至柱状期,随着卵泡及卵母细胞的增长,透明带缓慢增厚。     

人重组卵泡刺激素和表皮生长因子对性未成熟小鼠卵母细胞和颗粒细胞复合体体外发育的作用

卵泡刺激素（FSH）对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生命作用已被普遍接受,但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同,关于表皮生长因子（EGF）对腔前卵泡的作用尚不确切,本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素（rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用,利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞－颗粒细胞复合体（OGCs)(Fig.1)。体外每孔30－40个培养物并分别添加胎牛血清（FBS）,rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径,并每天照相,结果显示,rechFSH显著促进小鼠OGCs 及其卵母细胞的体外发育,这一作用可被EGF进一步增强（P＜0．05）（Fig.2),但到第八天培养结束时,培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内期生长对照组（P＜0．05）（Fig.3),说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。     

猪无透明带卵母细胞孤雌激活培养体系的优化

为了探讨猪无透明带卵母细胞孤雌激活培养体系,为手工克隆法生产小猪奠定理论和实验基础,本研究比较了不同浓度链霉蛋白酶对猪卵母细胞透明带的消化率及后期发育的卵裂率;比较了不同电激活参数对无透明带卵母细胞激活效率的影响,并探索了最适宜容纳孤雌激活胚胎的微穴大小。结果表明:2 mg/m L链霉蛋白酶能得到最高的消化率及后期发育的卵裂率;最佳电激活参数为:70 V/mm电压,80滋s脉冲时间,2次脉冲;较适宜容纳孤雌激活胚胎的微穴大小为:底部直径约为l20μm,深度约为150μm。     

卵母细胞特异表达ФC31整合酶载体pZP3－INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达

链霉菌噬菌体ФC31整合酶是一种位点特异性重组酶（Site—specific recombinase,SSR）,可介导链霉菌噬菌体attP位点（Phage attachment site）和链霉菌基因组attB位点（Bacterial attachment site）闻的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法呆集生发泡（GV）期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3（ZP3）启动子驱动的ФC31整合酶表达载体pZP3－INT和检测qbC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB^＋,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测ФC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB^＋载体发生重组的情况。结果表明：载体pZP3-INT在卵母细胞中表达ФC31整合酶mRNA;并且pBCPB^＋载体发生了位点特异性重组,提示ФC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。     

海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤模型小鼠的保护作用

目的：观察海珠益肝胶囊对卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）诱导的小鼠免疫性肝损伤的防护作用。方法：采用卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）诱导小鼠免疫性肝损伤,通过检测小鼠的血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性及肝脏病理变化来研究海珠益肝胶囊的保肝功能。结果：海珠益肝胶囊防治组小鼠血清ALT及AST活性比模型组显著降低,两组比较,差异有统计学意义。海珠益肝胶囊可明显减轻肝组织病理损伤,以大剂量组作用最佳;海珠益肝胶囊的使用使免疫性肝损伤小鼠肝细胞凋亡减少,且有剂量依赖关系。结论：海珠益肝胶囊对BCG加LPS诱导小鼠产生免疫性肝炎的模型免疫性肝损伤具有显著的保护作用。     

人参多糖对低温应激大鼠颗粒细胞与卵母细胞的调节

目的 应用体外细胞培养观察人参多糖对低温应激大鼠卵巢卵母细胞发育与颗粒细胞蛋白合成的影响,为研究人参多糖对低温应激大鼠卵巢功能的变化,提高机体耐寒能力提供科学实验解释.方法 培养Wistar大鼠卵巢卵母细胞与颗粒细胞,设37℃对照组,0、-15、-25与-35℃低温应激实验组,观察细胞计数.采用放免分析法测定3H-TdR与3H-Leu CPM值.结果 带卵泡卵母细胞低温应激实验组与对照组比较,生发泡破裂百分率57.14%/36.70%,人参多糖组68.97%/41.13%;带卵丘卵母细胞低温应激实验组与对照组比较,生发泡破裂百分率75.71%/41.14%,人参多糖组71.21%/39.28%,P＜0.05.3H-TdR掺入量人参多糖为参照与对照组比较,人参多糖实验组为1279±191与913±212,低温人参多糖实验组均值为651±211与499±116.低温应激为参照与对照组比较低温实验组均值为499±116与913±212,低温人参多糖实验组均值为651±211与1279±191,P＜0.05.3H-Leu掺入量人参多糖为参照与对照组比较,人参多糖实验组为889±153与617±119,低温人参多糖实验组均值为431±1144与300±119.低温应激为参照与对照组比较低温实验组均值为300±119与617±119,低温人参多糖实验组均值为431±144与889±153,P＜0.05.结论 低温应激抑制卵母细胞发育与颗粒细胞蛋白合成,人参多糖能促进卵母细胞成熟,能使低温应激大鼠卵巢颗粒细胞蛋白合成增加,而对带卵丘的卵母细胞无作用.