C57-ras致癌性转基因模型杂交1代的脏器及血液学参数测定

目的测定自主建立的致癌性转基因动物模型C57-ras小鼠杂交F1代的血液生理生化值和主要脏器重量,计算脏器系数并作统计学分析。方法选取同窝C57-ras转基因阳性鼠和BALB/cJ小鼠交配后的杂交1代CB6F1-Tg小鼠,雌雄各半,采血,测量血液生理指标和血清生化指标,并称主要脏器重量。结果血液生理指标中,CB6F1-Tg转基因阳性（＋/-）雌鼠和阴性（-/-）雌鼠间比较,MCHC存在极显著性差异（P〈0.01）;CB6F1-Tg转基因阳性（＋/-）雄鼠和阴性（-/-）雄鼠间比较,PLT、PCT、EOS%、NEUT、NEUT%、LYM%存在显著性差异（P〈0.05）,NEUT%、LYM%存在极显著性差异（P〈0.01）。血清生化指标中,CB6F1-Tg阳性（＋/-）雌鼠和阴性（-/-）雌鼠比较,ALT、TP、ALB存在显著性差异（P〈0.05）,TG存在极显著性差异（P〈0.01）。主要脏器重量和脏器系数均无显著性差异（P〉0.05）。结论测定了新建C57-ras致癌性转基因小鼠模型F1代阳性小鼠和阴性小鼠的主要生物学特性,为该模型在致癌性安全性评价等领域的实际应用中提供参考。     

利用荧光定量PCR分析c-Ha-ras基因在C57-ras转基因小鼠中的拷贝数

目的:利用real-time PCR建立检测C57-ras转基因小鼠中外源c-Ha-ras基因拷贝数的简便方法,为药物安全性评价C57-ras转基因小鼠模型的繁殖和筛选提供数据支持。方法:以自建的人原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠为研究对象,利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的绝对定量法测定3个C57-ras转基因小鼠系的c-Ha-ras基因Ct值,通过与内参基因GAPDH比较计算获得转基因的拷贝数。结果:内参基因GAPDH的标准曲线为lg NGAPDH=-2.852Ct+26.236,外源基因c-Ha-ras的标准曲线为lg NRAS=-3.068Ct+39.186;经计算,NO.2、NO.3、NO.5系的F6代拷贝数分别为4、4和3,并且系内不同个体间拷贝数一致。结论:利用SYBR GreenⅠreal-time PCR技术建立了检测C57-ras转基因小鼠中外源基因拷贝数的方法,该方法操作简单,节约成本,为C57-ras致癌性模型的选留和应用提供了基础和技术手段,也为其他类似转基因品系中转基因拷贝数的确定提供了一种参考方法。     

转基因EGFP小鼠的主要脏器重量及脏器系数

目的测定转基因C57BL／6-Tg（ACTB—EGFP）1osb／J（EGFP）小鼠主要脏器重量和脏器系数。方法实验选用5～6周雄性、6～7周雌性小鼠各15只,用sartorius电子天平分别测定体重和9个主要脏器重量,计算脏器系数,并对雌雄脏器重量和脏器系数之间进行比较。结果雌雄小鼠脏器重量间比较,雄性鼠体重明显大于雌性的体重（P〈0．01）;心、肝、肺、肾、肾上腺的重量间差异极显著（P〈0．01）;脾脏比较差异显著（P〈0．05）;雌雄间脏器系数比较,肺、脑、肾上腺间差异极显著（P〈0．01）,心、肝、脾、肾脏间差异不显著（P〉0．05）。结论转基因EGFP小鼠不同性别间脏器重量及脏器系数间有一定的差异,为相关研究打下了基础。     

c—Ha-ras在转基因小鼠模型C57-ras各组织中的表达谱分析

目的：分析转基因c-Ha-ras在C57-ras癌症小鼠模型中的组织表达谱及时空表达差异。方法：利用半定量及荧光定量RT-PCR法,分析不同首建鼠系、不同周龄小鼠各脏器中转基因c-Ha-ras的表达。结果：转基因c-Ha-ras在心、肝等13种组织器官中均有表达,在肺脏中表达最高,在肝脏中表达最低,No.2、No.3和No.5等3个首建鼠均呈现相似的变化规律;转基因在No.5首建鼠中表达水平最高,而在同一个首建鼠系中,12周龄时表达高于8周龄和24周龄。结论：转基因c-Ha-ras在各脏器中能高效表达,并间接表明该转基因能稳定遗传,为C57-ras癌症小鼠模型用于新药临床前致癌性评价提了供理论支持。     

Fmr1基因敲除小鼠脏器重量和脏器系数的比较分析

目的通过对Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠的脏器重量和脏器系数进行比较分析,了解其脏器重量的差异,探讨Fmr1基因对动物生长发育等方面的影响。方法分别测定Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠内脏器官的绝对重量和脏器系数,并进行统计学处理和分析。结果相同年龄的Fmr1基因敲除小鼠雄性的体重、心、肺、肝和肾的绝对重量均极显著的大于雌性（P〈0.01）。雌雄间脏器系数除肾脏（P〈0.05）和脑（P〈0.01）外,其余无显著差异。与FVB小鼠比较,Fmr1基因敲除小鼠心脏较轻（P〈0.01）,肾脏（P〈0.01）、体重和脑较重（P〈0.05）。脏器系数肾脏较大（P〈0.01）,心脏（P〈0.01）、脑和脾（P〈0.05）较小。结论Fmr1基因可影响动物的某些脏器重量和脏器系数。     

GF级KM小鼠生长曲线、主要脏器参数及生理生化指标的测定分析

目的采用对SPF级KM小鼠进行剖宫产术,用无菌奶妈代乳方法,培育出GF级（即无菌级）KM小鼠,了解GF级KM小鼠的生长发育并绘制出生长曲线;测定其不同生长阶段的主要脏器重量及血液生理生化值并进行比较分析。方法①分别称取60只（雌雄各半）0～112日龄GF级KM小鼠体重,绘制其生长曲线;②随机抽取28、56、112日龄的KM小鼠60只（雌雄各半）,活体称重,依次剖取心、肝等主要脏器称重;③小鼠眼眶采血,测定其血常规和生化值。结果 GF级KM小鼠的体重随着日龄的增长而逐渐增加,断奶后1～2周内增重最为迅速,4周后的雄鼠体重明显高于雌鼠;主要脏器（心、肝、脾、肺、脑等）重量随年龄增大均逐渐增加,盲肠体积增大尤其明显,而胸腺随着日龄的增加而逐渐萎缩,其重量迅速减轻;同一日龄GF级KM小鼠的雌雄间血常规和生化值指标均存在差异,但随着年龄的增加差异的项目逐渐增多。结论 GF级KM小鼠生长发育和血液生理生化的研究结果可为KM小鼠的标准化及最终成为国际标准品系提供基础数据。     

无菌级C3H/OrlSlac小鼠生长繁殖、主要脏器参数以及血液生理生化指标的测定分析

目的了解无菌级C3H/OdSlac小鼠的生长、繁殖性能;测定无菌级C3H/OrlSlac小鼠主要脏器重量以及血液生理、生化正常值并进行分析比较.方法 ①统计无菌级C3H/OrlSlae小鼠的1～3胎的繁殖指标数据,包括:平均每胎产子数、离乳率、怀孕率、胎间隔和生产指数;②分别称取60只(雌雄各半)0～112 d的无菌级...     

双歧杆菌C57BL小鼠抗辐射能力的研究

目的探讨双歧杆菌对电离辐射损伤的防护作用。方法选用SPF级C57BL小鼠30只,随机分成3组（每组10只）：A组：正常对照组;B组：放射损伤组;C组：双歧处理组,用双歧杆菌菌悬液灌肠28 d后,然后与放射损伤组一同进行^60Coγ射线一次性全身照射,形成急性放射损伤。24 h后按不同要求采集标本,对肝组织分别进行SOD和CAT活力及MDA的含量检测;用电镜观察脊神经组织细胞的超微结构;对脾脏组织用RT-PCR检测TLR2 mRNA水平的表达;并对肾脏组织用免疫组化检测bcl-2、NF-κBp65和Cytochrome C的蛋白表达情况。结果双歧杆菌处理组肝组织中SOD和CAT水平明显高于放射损伤组（P〈0.01）,同时MDA明显低于放射损伤组（P〈0.01）;电镜结果显示：放射损伤组与双歧处理组的细胞浆、细胞核和线粒体均明显肿胀,双歧处理组同时具有早期凋亡现象;RT-PCR结果显示：双歧处理组TLR2 mRNA的表达明显高于放射损伤组;免疫组化结果显示：双歧处理组Cytochrome C的表达明显优于放射损伤组,而NF-κBp65和bcl-2则相反。结论双歧杆菌可通过清除自由基、抗膜脂质氧化、提高免疫机能和诱导细胞凋亡等方式来降低辐射对小鼠的损伤。双歧杆菌具有一定的抗辐射作用。     

人SR-AI转基因小鼠模型的主要形态学特性、血液学指标和血脂水平的研究

目的明确人SR-AI转基因小鼠的一些形态、脏器、血液学和血浆脂质参数,为人SR-AI转基因小鼠模型的应用提供相关依据.方法用游标卡尺和电子称量天平测量人SR-AI转基因小鼠的吻长、眶间距、体长、尾长及12个脏器系数并与C57BL/6J小鼠进行比较分析;用SysmexK-4500型全血自动多参数血液分析仪检测其血液学指标;并用酶法分别测定血浆总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇含量.结果人SR-AI转基因小鼠外部形态指标和脏器系数与C57BL/6J小鼠比较差异没有显著意义(P>0.05);转基因小鼠的各项血液学指标无明显改变,血脂蛋白成分的改变亦未显示统计学意义(P>0.05),甘油三酯的浓度略有增高(P<0.05).结论人SR-AI转基因小鼠的外部形态指标、脏器系数及各项血液学指标均无明显改变,适合用作动脉粥样硬化模型的研究.     

链脲佐菌素诱导C57小鼠1型糖尿病模型的研究

目的:通过小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立与人类1型糖尿病相似的C57小鼠糖尿病模型,研究建模剂量和成模率。方法:将32只C57小鼠随机分为正常对照组(A)和实验组(B)。实验组(B)可分为低、中、高剂量组(50 mg/kg、70mg/kg、90 mg/kg)(n=8)。两组都喂普通饲料1周后,B组连续5天腹腔注射不同剂量STZ,测定注射前、注射后1周、2周、3周、4周、5周的空腹血糖和体重,观察小鼠饮食、饮水和排尿情况。STZ注射第3周进行口服糖耐量实验(OGTT)。结果:给药前A、B组体重和血糖无显著差异,给药1周后,B组饮水量和进食量明显增加,体重减轻。C57小鼠用药2周后,中剂量组达到建模标准,成模率75%。各剂量组均出现了糖耐量异常。结论:诱导建立C57小鼠1型糖尿病模型方法是连续5日腹腔注注射STZ,适宜剂量为70 mg/kg。     

C57BL/6J小鼠在构建2型糖尿病模型中体重和非空腹血糖浓度的异常变化

由北京市一实验动物生产单位购入近交系C57BL/6J(B6)和封闭群ICR(3周龄)小鼠,分别以高脂饲料、高脂饲料-3%果糖饮水(实验组)和常规饲料(对照组)喂养6周,实验组腹腔注射链脲佐菌素(STZ,100mg/kg体重),然后以相应饲料继续喂养4周。每周测定小鼠体重,于注射STZ前和注射后每周测定非空腹血糖浓度。研究显示,无论是否补充果糖饮水,B6对照组体重显著高于实验组,而相应周龄的ICR小鼠,实验组体重显著高于对照组。两品系小鼠实验组间体重无差异。注射STZ后,B6实验组血糖浓度均没有达到糖尿病小鼠非空腹血糖浓度的成模标准(11mmol/L),而ICR实验组血糖浓度均达到并超过糖尿病小鼠非空腹血糖浓度的成模标准。研究表明,无论补充果糖与否,ICR小鼠均能成功建模,而B6小鼠建模均失败。因此,ICR小鼠仍是目前应用高脂饲料-STZ联合诱导2型糖尿病模型中经济、有效的候选动物,而B6小鼠在体重和血糖浓度上的异常表现很可能是其遗传背景变化的结果,这尚需进一步研究证实。