NaCl对水稻谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的胁迫作用

在ＮａＣｌ的胁迫下,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的ＮａＣｌ浓度的升高而降低;游离ＮＨ４＾＋在叶中积累,在根中未见明显变化。与根相比,叶对ＮａＣｌ的胁迫作用更为敏感。叶的ＮＡＤＨ－ＧＯＧＡＴ和ＮＡＤＨ－ＧＤＨ活性在ＮａＣｌ胁迫降低的程度明显大于根。无论是否有ＮａＣｌ存在,根的ＮＡＤＨ－ＧＤＨ活性明显高于叶。ＧＳ／ＧＤＨ比值分析提示,对对照下,根中的ＮＨ４＾存在,根的ＮＡ     

菠萝叶片中有机酸含量、转氨酶和脱氢酶活性的昼夜变化

研究了菠萝叶片中苹果酸、柠檬酸、草酰乙酸、α－酮戊二酸和草酸等有机酸和转氨酶、脱氢酶活性的昼夜变化。结果表明,除了草酸外,其他４种有机酸的含量都呈白天降低晚上增高的趋势。有机酸的含量在上午９∶００时有最高值,下午１８∶００时有最低值。苹果酸、柠檬酸、草酰乙酸、α－酮戊二酸和草酸的昼夜最大差值分别为１４０、６１、３１．８、８．２和６．７ｍｍｏｌ·ｋｇ－１ＦＷ。异柠檬酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶活性的昼夜变化与有机酸的趋势一致,白天降低晚上增高。可溶性蛋白和游离氨基酸含量以及谷草转氨酸、谷丙转氨酶活性在下午１８∶００时有最高值,凝胶电泳显示菠萝叶片中有新的蛋白带出现。     

木本植物阳生和阴生叶片叶绿体O_2和NO_2~-光还原作用

在有ＰＣＲ和ＰＣＯ环活性抑制剂甘油醛和光合磷酸化解偶联剂ＮＨ４ＣＬ存在下,比较了生长于 ３种 光环境的乔木黧蒴和灌木九节幼苗阳生和阴生叶片叶绿体的Ｏ２和ＮＯ２光还原速率。全自然光下两种 植物阳生叶片的叶绿体Ｏ２的光还原速率最高,占总光合电子传递活性的６６％－６８％,ＮＯ２光还原速率 也有类似趋势占总电子传递的１１％－１５％左右。３６％和１６％自然光下阴生叶片Ｏ２和ＮＯ２光还原 速率及Ｏ２光还原电子传递的比例显著降低,但ＮＯ２光还原电子传递的比例不受影响。与ＮＯ２光还原 相关的叶片ＮｉＲ和ＮＲ活性及ＮｉＲ／ＮＲ活性比也因叶片接受光强度大小而异,随光强减弱,黧蒴的 ＮｉＲ活性降低,九节的ＮＲ活性增高,但黧蒴的ＮＲ活性和九节的ＮｉＲ活性变化未达差异显著性。     

菠萝叶片中有机酸含量,转氨酶和脱氨酶活性的昼夜变化

研究了菠萝叶片中苹果酸,柠檬酸,草酰乙酰,α－酮戊二酸和草酸等有机酸和转氨酶、脱氢酶活性的昼夜变化。结果表明,除了草酸外,其他４种机酸的含量都呈白天降低晚上增高的趋势。     

不同氮源对小麦幼苗谷氨酰胺合成酶的影响

利用ＤＥＡＥ－纤维素柱层析、酶活性测定、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 分子杂交等技术,研究了小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）幼苗的根、叶和离体叶在不同氮源培养条件下谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）活性和同工酶变化, 以及不同氮源对ＧＳ基因转录－ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的影响． 同时与硝酸还原酶（ＮＲ）活性进行比较, 结果表明∶当以ＮＨ＋４ 作唯一氮源时,小麦幼苗根谷氨酰胺合成酶（ＧＳｒ）和叶细胞质谷氨酰胺合成酶（ＧＳ１）活性要比以ＮＯ－３ 作唯一氮源的高．当以ＮＯ－３ 为唯一氮源时, ＮＯ－３ 则促进完整叶片和离体叶片叶绿体谷氨酰胺合成酶（ＧＳ２）活性． 从转录水平上看,ＮＨ＋４ 促进根ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的合成,而ＮＯ－３ 促进叶ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的合成     

营养条件对光滑球拟酵母积累α-酮戊二酸的影响

以光滑拟球酵母为研究模型,研究α-酮戊二酸的浓度情况。通过单因素实验得到α-酮戊二酸积累最佳浓度的各单因素条件为：葡萄糖浓度140g／L,NH4Cl浓度5g／L。在碳源（30g/L葡萄糖初始浓度）匮乏条件下加入丙酮酸30g／L,在此条件下丙酮酸转化为α－酮戊二酸的转化率最高达53．7％。以30g／L丙酮酸为唯一碳源时在7L发酵罐中光滑拟球酵母可生成浓度为10．7g/Lα-酮戊二酸,外源丙酮酸的转化率可达66．9％。这一结果表明,T．glabrata具有将丙酮酸转化为α-KG的能力。     

玉米根细胞质膜硝酸还原酶的研究

以水双相分配分离法从玉米（Ｚｅａ ｍ ａｙｓＬ．）根细胞中提取的高纯度正面向外和内面向外的质膜囊泡为材料,鉴定出质膜上存在有硝酸还原酶（ＮＲ）。通过缺氮和加氮培养,证明质膜ＮＲ具有诱导性。外源电子供体实验表明,质膜ＮＲ除了能利用ＮＡＤＨ 作为电子供体外, 也能直接或间接利用ＮＡＤＰＨ 作为电子供体。通过Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００, 结合胰蛋白酶及其抑制剂实验证明了质膜ＮＲ是偏于膜外侧的跨膜蛋白,它对胰蛋白酶具有特异的敏感性。讨论了质膜ＮＲ的功能     

大豆Bragg结瘤突变系叶片的NR活性调节

大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍ ａｘ （Ｌ．） Ｍｅｒｒ．）Ｂｒａｇｇ 及它的突变体， 超结瘤大豆ｎｔｓ ３８２ 和不结瘤大豆Ｎｏｄ ４９ 的叶片提取物中含有抑制ｉＮＲ活性、ｃ１ＮＲ活性和Ｃ２ＮＲ活性的抑制成分。３００ μＥ·ｍ － ２·ｓ－ １照度和接种根瘤菌ｓｔｒａｉｎ ＵＳＤＡ１１０ 是形成抑制成分的重要条件。在两种条件下，Ｎｏｄ ４９ 中的抑制活性最强， ｎｔｓ ３８２ 的最弱， Ｂｒａｇｇ 的居中。Ｂｒａｇｇ 的接种根提取物对３ 种ＮＲ活性的抑制作用基本同于其叶片提取物； ｎｔｓ ３８２ 的接种根提取物也同于其叶片提取物，基本不抑制ＮＲ的活性， 但Ｎｏｄ ４９ 的接种根提取物只抑制叶片的ｃ２ＮＲ活性， 不同于其叶片提取物抑制３ 种ＮＲ活性的作用。结果说明叶片与根两种提取物在抑制叶片ＮＲ活性的成分上相关     

硝酸盐对硝酸还原酶活性的诱导及硝酸还原酶基因的克隆

硝酸盐在植物体内的积累过多已成为影响蔬菜品质并影响人类健康的重要因素。硝酸还原酶（NR）是硝酸盐代谢中的关键酶,提高其活性有利于硝酸盐的降解。为了解植物不同组织中NR的活性,用活体测定法检测了经50mmol/L的KNO₃诱导不同时间后的油菜、豌豆和番茄幼苗根茎叶中NR活性,同时为了明确外源诱导剂浓度与植物体内NR活性的关系,检测了经不同浓度KNO₃诱导2h后的矮脚黄、抗热605、小白菜和番茄叶片中的NRA。结果表明,不同植物组织NR活性有很大差异,叶中NR活性较高,根其次,茎最低;不同植物的NR活性随诱导时间呈不同的变化趋势,相同植物不同组织的NR活性变化趋势相似;不同植物叶片NRA为最高时KNO₃浓度不同。用30mmol/L的KNO3诱导番茄苗2h后,从番茄根和叶中提取总RNA,用RT-PCR方法获得NR cDNA,全长2736bp,编码911个氨基酸。为进一步利用该基因提高植物对硝酸盐的降解能力打下基础。     

不同蛋白质含量小麦品种叶片NRA与氮素积累关系的研究

以鲁麦５号和昌乐５号两种不同蛋白质含量小麦品种为材料,研究了各生育期叶片ＮＲＡ与氮素积累的关系。其结果是,在不同施氮量下,各生育期叶片ＮＲＡ、ＮＯ３＾－－Ｎ、ＮＨ２－Ｎ、还原Ｎ含量皆随施氮量增加而增加,但生育前期昌乐５号的毕大于鲁麦５号,而生育后期则相反,鲁麦５号的皆大于昌乐５号,籽粒蛋白质含量亦为鲁麦５号高于昌乐５号。表明生育后期（开花期后）叶片ＮＲＡ是反映籽粒蛋白质含量高低的一项重要指标。     

梨头霉11α—羟基化制备16β—甲基—11α,17α21—三烃基孕甾—1, …

选育到一株对１６β－甲基－１７α,２１－二羟基孕甾－１,４＝－二烯－３,２０－二酮（Ⅱａ）１１α－羟基化活性强的梨头霉Ａ２８菌株,并发现底物２１－乙酰化（Ⅱｂ）可明显提高１１α－羟工 能力。在适宜的转化条件下,１１ｂ投料浓度０．５％,产物１６β－基１１α,１７α,２１－三羟基孕甾－１,４－二烯－３,２０－二酮（Ⅲ）收率为７３％,结构经波谱分析确认。     

NaCl、Mn(Ⅱ)、L-谷氨酰胺和α-酮戊二酸对地衣芽孢杆菌WBL-3合成新型土壤修复材料γ-PGA的影响

聚γ-谷氨酸(γ-PGA)及其衍生物是一种新型土壤修复和改良材料,能吸附土壤中的重金属和放射性核物质等污染物,也可作为保水材料应用于干旱环境。NaCl、Mn(Ⅱ)、L-谷氨酰胺和α-酮戊二酸四因素对Bacillus licheniformisWBL-3合成γ-PGA产量及分子量有重要影响。分别用L-谷氨酰胺和α-酮戊二酸代替L-谷氨酸,Bacillus licheniformisWBL-3未产生γ-PGA。单因素试验表明:γ-PGA产量均随四因素浓度的增大呈现先增大后减小的趋势,γ-PGA产量分别在NaCl,Mn(Ⅱ)、L-谷氨酰胺和α-酮戊二酸浓度为6%,100μmol.L-1,1.5 mmol.L-1和10 mmol.L-1时达到最大值35.79g.L-1,24.77 g.L-1,30.07 g.L-1和26.09 g.L-1;γ-PGA分子量随NaCl浓度的增大而增大,随α-酮戊二酸浓度的增大而减小,随Mn(Ⅱ)、L-谷氨酰胺浓度的增大而呈现先增大后减小的趋势。正交试验证明了单因素试验的结论,四因素间没有交互作用的影响,最优组合为NaCl:6%,α-酮戊二酸:10 mmol.L-1,Mn(Ⅱ):100μmol.L-1,L-谷氨酰胺:1.5 mmol.L-1,产量达到55.62 g.L-1。     

过程优化提高解脂亚洛酵母积累α-酮戊二酸

目前,应用解脂亚洛酵母发酵生产α-酮戊二酸由于产量和底物转化率低、生产周期长等问题,仍未大规模工业化生产。为了解决这些问题,以研究室诱变选育获得的1株高产α-酮戊二酸的解脂亚洛酵母Yarrowia lipolytica WSH-Z06 C3为出发菌株,考察了该菌株在50 L发酵罐中转速、碳酸钙浓度、溶氧以及补料方式(多节点补料、恒速补料)等因素对α-酮戊二酸积累的影响。结果表明,当转速为300 r/min时,α-酮戊二酸和丙酮酸的产量分别为32.4 g/L和19.66 g/L;碳酸钙质量浓度为20 g/L时,α-酮戊二酸的产量提高至38.55 g/L,丙酮酸降低至8.28 g/L;控制溶氧水平在50%时,α-酮戊二酸产量为42.39 g/L,此时丙酮酸为6.22 g/L。比较高初始甘油浓度和不同的补料发酵策略,发现恒速补料效果最好,发酵144 hα-酮戊二酸产量达到66.27 g/L,丙酮酸产量为20.82 g/L。通过上述发酵过程参数的优化,α-酮戊二酸的产量和底物的转化率比未优化前分别提高了67.3%和4.56%,为解脂亚洛酵母工业化生产α-酮戊二酸提供一定参考。     

菹草（Potamogeton crispus）对水中氮、磷的吸收及若干影响因素

菹草（Ｐｏｔａｍｏｇｅｔｏｎ ｃｒｉｓｐｕｓ）对水中氮,磷的吸收与ＰＨ,光照,水温,根／茎生物量比及底泥间隙水与上覆水中营养盐浓度比有关。在ＰＨ为８．０－９．５,水温为１９－２８℃的实验条件下,水中ＮＨ４－Ｎ浓度低于０．３５ｍｇ．１＾－１左右时,菹草茎,叶优先吸收ＮＯ３－Ｎ;水中ＮＨ４－Ｎ浓度大于０．３５ｍｇ．１＾－１左右时,菹草测优先吸收ＮＨ４－Ｎ这一选择吸收与ＮＨ４－Ｎ／ＮＯ３－Ｎ比值无关,强     

镉胁迫对旱柳光合作用和内肽酶变化的影响

通过水培方法,添加不同浓度CdCl2(0、5、25、50 μmol·L^-1)处理14 d,测定叶绿素含量、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性、游离氨基酸含量及内肽酶活性,调查Cd对旱柳光合作用和内肽酶变化活性影响。结果发现：Cd处理降低了总叶绿素、叶绿素a、b含量; Rubisco活性随着介质中Cd浓度增加而降低;Cd抑制根和叶PEPC活性;同对照相比,根中游离氨基酸含量没有显著变化,而叶中游离氨基酸含量增加;不同浓度Cd处理降低根的内肽酶活性,高浓度Cd使叶内肽酶活力增加。这些结果表明,Cd通过降低叶绿素含量,促进叶内肽酶活性和抑制了CO₂羧化酶活性来影响旱柳光合作用。     

急非淋M_5型白血病单克隆抗体与柔红霉素偶合物的制备及体外细胞毒作用

用ＰＥＧ沉淀法及ＤＥＡＥ─Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换层析和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌｓ─３００凝胶层析提纯的抗急非淋Ｍ_５型白血病单克隆抗体ＩＡ_１（Ｍ_ｃＡｂ１Ａ_１）,纯度为９９．９％。用葡聚糖作中间体将Ｍ_ｃＡｂ_１Ａ_１与柔红霉素（ＤＮＲ）偶联,制备的免疫偶合物仍保持较好的抗体活性及药物活性。在４８小时杀伤实验中,此偶合物对Ｕ_（９３７）靶细胞的杀伤作用与游离ＤＮＲ相近（Ｐ＞０．０５）,明显大于对照偶合物（Ｐ＜０．０１）;在１小时预杀伤实验中,此偶合物对靶细胞的杀伤作用明显大于游离ＤＮＲ及对照偶合物（Ｐ＜０．０１）。在两个实验中,此偶合物对Ｗｉｓｈ非靶细胞的毒性都明显小于游离ＤＮＲ（Ｐ＜０．０１）;表明此偶合物在体外具有较好的选择性细胞毒作用。     

类产碱假单胞菌谷氨酸脱氢酶的提纯、鉴定及某些特性的初步研究

从类产碱假单胞菌纯化出电泳纯的谷氨酸脱氢酶,用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为２９０ ｋＤ,亚基分子量为４７ ｋＤ,提示该酶为六聚体．该酶对ＮＡＤＰ（Ｈ）和底物均具有高度专一性,对谷氨酸、α－酮戊二酸及ＮＡＤＰ＋ 的Ｋｍ 值分别为：２８ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ、１．２ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ及０．０６３ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ．用Ｈｉｌｌ作图法求得酶对ＮＨ＋４ 和ＮＡＤＰＨ 的［Ｓ］０．５分别为２４ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ和０．０３７ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ．最适反应温度为５０℃,催化氨化反应和脱氨反应的最适ｐＨ 分别为８．０和８．８,在热稳定性方面不及嗜热细菌的谷氨酸脱氢酶稳定．提纯的谷氨酸脱氢酶在低温（４℃）条件下,可在Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中贮存半年以上,活力无明显下降,冷冻则可导致纯酶液迅速失活．氮源对菌体谷氨酸脱氢酶水平有显著影响．     

镉诱导的菊芋幼苗膜脂过氧化和抗氧化酶活性及过氧化物酶同工酶的改变

用含有不同浓度(0~400μmol/L)Cd(NO3)2的Hoagland营养液处理砂培的菊芋。处理50d后,测定植物体内镉积累量以及过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,并对POD同工酶进行电泳分析。发现在Cd50~100μmol/L浓度内,随着镉浓度的升高,菊芋根和叶中镉的积累量显著增加,而随后积累量的增加有所减少。根和叶中MDA含量显著上升,说明镉引起了膜脂过氧化。0~100μmol/LCd处理,根和叶中POD活性随Cd浓度增加而增强,而在200~400μmol/LCd处理下有所减弱。根和叶SOD活性在50~200μmol/LCd处理下随Cd浓度增加而增强,而在400μmol/LCd处理下SOD活性明显受到抑制。根和叶CAT活性随Cd浓度升高而增强。电泳结果显示,POD同工酶变化明显,镉诱导出一条新酶带LP10。菊芋POD同工酶可以作为镉污染的土壤的生物指示剂。     

光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶系生理作用

摘要：【目的】研究α-酮戊二酸脱氢酶系在光滑球拟酵母碳代谢流、能量代谢和氨基酸代谢中的生理作用。【方法】通过敲除光滑球拟酵母中编码α-酮戊二酸脱氢酶系中E1酶的基因kgd1,构建α-酮戊二酸脱氢酶活性缺失菌株T. glabrata kgd1::kan,并考察KGDH缺失引起TCA循环关键酶活性,碳代谢流量以及胞内氨基酸和能荷水平等方面的变化。【结果】光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶活性的缺失导致：(1)细胞启动乙醛酸途径,通过形成TCA-乙醛酸循环实现TCA循环的正常代谢;(2)胞内NADH/NAD+水平     

植物谷氨酰胺合成酶基因以及基因表达

植物谷氨酰胺合成酶基因以及基因表达印莉萍,刘祥林,林忠平（首都师范大学生物系北京１０００３７）（中科院植物所北京１０００４４）一引言谷氨酰胶合成酶（ＧＳ）是植物同化氨途经中的关键酶,其在氮代谢中所处地位可与碳代谢中的Ｒｕｂｉｓｃｏ相媲美。氨的同化初始发生在ＧＳ／ＧＯＧＡＴ循环中。在此循环里ＧＳ（ＥＣ６．３．１．２）与谷氨酸合成酶（ＧＯＧＡＴ;ＥＣ１．４．１．１４）联合将ＮＨ转给α－酮戊二酸生成谷氨酸.