维生素E和微量元素Se对人肝癌细胞生长,分化及其癌基因…

本工作观察了体外环境中不同水平的维生素Ｅ和微量元素Ｓｅ对人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）生长,分经和其癌基因（Ｎ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ）表达水平的影响,实验结果表明：高水平维生素Ｅ（２．４、９．２、２４：０ｎｍｏｌ／Ｌ）和Ｓｅ（０．１５,０．３０,０．６０ｎｍｏｌ／Ｌ）对肝癌细胞的集落形成率具有明显的抑制作用;生化分析显示高水平维生素Ｅ微量元素Ｓｅ均可明显抑制环境中脂质过氧化的水平,Ｓｅ对癌细胞甲     

HMBA对人肝癌SMMC—7721细胞周期相关基因表达的影响

本文研究HMBA对人肝癌SMMC－7721细胞周期G0／G1期阻滞相关基因表达的影响。免疫细胞化学和核酸原位杂交检测结果显示,HMBA可明显上调p21^WAF1/CIP1、p16蛋白表达并增强p21^WAF1/CIP1基因转录,同时对CDK4、Cyclin D1蛋白表达以及c-myc基因转录均具有明显的下调作用。结果表明,HMBA可通过增强p21^WAF1/CIP1、p16基因表达而抑制Cyclin D1-CDK4活性,最终导致细胞进入S期所需的c-myc等基因转录活性下降,从而将细胞周期阻滞于G0／G1期,诱导人肝癌细胞分化。     

氧胁迫对人肝癌细胞生长分化和凋亡的影响

The human hepatoma cells SMMC-7721 were treated with different concentrations of ascorbic acid (50-800 mumol/L) and FeSO4 (2.5-40 mumol/L) system to generate oxidative stress at various degrees. The oxidative stress induced by the system were mainly contributed to hydroxyl radical. All the various degrees of oxidative stress in this study are able to inhibit the proliferation of hepatoma cells. While low levels of oxidative stress may cause hepatoma cells lost some malignant features, such as aggregation of Con-A to the cell surface, alpha-fetoprotein, gamma-glutamyltransepeptidase and tyrosine-alpha-ketoglutarate transaminase, all of the 4 indices tended to cell differentiation, coloning efficiency potential decreased significantly, and apoptotic cells appeared. The numbers of apoptotic cells increased with the increasing of oxidative stress. The apoptotic cells exhibited non-adherent, smaller, chromatin condensed around the periphery of the nucleus in the shape of crescent, nuclear fragmentations but with intact cellular membrane, and DNA degraded to around 21.2 kbp fragment. All of the results showed that there is possibility to inhibit hepatoma cells growth, to promote differentiation and apoptosis, and therefore to initiate reverse transformation via strict regulation of oxidative stress.     

维生素E对中华鳖幼鳖生长、肝脏维生素E以及血清皮质醇含量的影响

为探讨维生素E(VE)对中华鳖(Pelodiscus sinensis)幼鳖的生长、肝脏VE和血清皮质醇的影响，通过特定生长率、高压液相色谱法和放免法，我们测定了中华鳖幼鳖的生长、肝脏VE和血清皮质醇含量。发现VE添加量为1000和5000mg／kg的两组，能明显降低中华鳖幼鳖的生长。维生素E添加量为500、1000和5000mg／kg的三组，肝脏维生素E含量明显高于对照组，VE添加量在0—1000mg／kg的范围时，肝脏VE的含量随着饲料中VE含量的增加呈指数式增加，并且在VE添加量为5000kg／kg的一组基本达到饱和。维生素E添加量为0和50mg／kg的2组，其血清皮质醇的平均值明显高于维生素E添加量为250、500、1000和5000mg／kg的4组的平均值。上述结果表明：高剂量的VE降低了中华鳖幼鳖的生长和血清皮质醇的含量；在一定剂量范围内，肝脏VE随着饲料中VE含量的增加而升高。     

氧胁迫对人肝癌细胞生长分化和凋亡的影响

采用不同浓度的抗坏血酸(50—800μmol/L)和硫酸亚铁(2.5—40μmol/L)系统生成以羟自由基为主的各种程度氧胁迫,使之作用于人肝癌细胞。本文所采用的不同程度的氧胁迫均能抑制癌细胞的生长。低水平氧胁迫可使肝癌细胞失去某些恶性特征,趋向分化,表现为细胞表面对Con-A的凝集力、甲胎蛋白含量、γ-谷氨酰转肽酶和酪氨酸-α-酮戊二酸转氨基酶活性都朝着分化方向变化,差异显著。分化后的细胞克隆形成能力显著降低。在分化过程中,出现一定量的凋亡细胞。随着氧胁迫程度的增高,凋亡细胞增多,表现为非贴壁细胞增多,细胞体积变小,染色质凝缩在核膜边缘,呈新月形,核碎裂,但质膜完整。细胞核中DNA降解成大约21.2kbp大小的大片段DNA。有望通过严格控制氧胁迫程度来减慢肝癌细胞增殖,促进分化和凋亡,使恶性细胞逆转成良性细胞。     

视黄酸对人肝癌细胞蛋白激酶的影响

 视黄酸(RA)处理SMMC-7721人肝癌细胞株72小时后,胞浆、膜性组分的蛋白激酶C(PK-C)的活力及比活力均下降,活力分别下降44.9％和48.8％,比活力下降42.7％和35.0％。然而,胞浆与膜性组分的活力,比活力比值在RA处理前后并无十分明显的变化,这提示在RA作用过程中,未发生PK-C的膜-浆转位。蛋白激酶A(PK-A)的变化则相反,RA处理72小时,活力、比活力上升了295％,258％。PK-A/PK-C的活力比值则从0.342增加到1.849,比活力比值从0.210增加到0.897。因PKC和PKA分别和细胞的去分化性增殖和分化有关,故上述结果和我们已报道的RA可抑制SMMC-7721细胞株的增殖和促进其分化相一致。     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

维生素C和E合用对应激和非应激中华鳖幼鳖生长、肝脏维生素C和E以及血清皮质醇含量的影响

为探讨维生素C (VC)和维生素E (VE)联用对应激和非应激中华鳖幼鳖的生长、肝脏VC 和VE 以及血清皮质醇含量的影响 ,作者使用了 5组饵料 ,VC 和VE 的添加量依次为 0和 0mg/kg (对照组 )、 2 5 0和 5 0mg/kg (实验Ⅰ组 )、2 5 0 0和 5 0mg/kg (实验Ⅱ组 ) ;2 5 0和 2 5 0mg/kg (实验Ⅲ组 ) ;2 5 0 0和 2 5 0mg/kg(实验Ⅳ组 )。中华鳖幼鳖的生长、肝脏VC 和VE以及血清皮质醇分别通过特定生长率、高压液相色谱法和放免法来测定。结果实验Ⅰ -Ⅳ组中华鳖的特定生长率明显高于不加VC 和VE的对照组 ,但实验Ⅰ -Ⅳ组间没有明显不同。非应激中华鳖肝脏VC 和VE的含量随饵料中VC 和VE 含量的增加而明显升高 ,并且实验Ⅱ -Ⅳ组肝脏VC 和VE都明显高于对照组和实验Ⅰ组。酸应激后 ,对照组和实验组中华鳖肝脏VC 和VE都有下降的趋势 ,但无显著差异 ;应激后实验Ⅱ -Ⅳ组肝脏VC 和VE均明显高于对照组 ,实验Ⅳ组明显高于其它 4组。血清皮质醇的含量在实验Ⅰ -Ⅳ组间没有明显不同 ,实验Ⅰ -Ⅲ组与对照组相比虽有降低的趋势但没有变化 ,实验Ⅳ组则明显低于对照组。酸应激后 ,对照组血清皮质醇明显升高 ,其他 4组虽有升高的趋势 ,但没有明显变化。应激后实验Ⅰ -Ⅳ组血清皮质醇的含量均明显低于对照组 ,实验Ⅰ -Ⅳ组间没有明显     

蝎毒对人肝癌细胞(SMMC7721)和宫颈癌(Hela)细胞抑制作用的研究

目的:探讨蝎毒粗粉及经初步纯化的蝎毒对人肝癌细胞(SMMC7721)和Hela细胞株的抑制作用。方法:以四甲基偶氮唑盐法(MTT),Western Blotting,免疫细胞化学以及荧光标记的方法,对人肝癌细胞(SMMC7721)和Hela细胞株的凋亡相关蛋白进行检测。结果:蝎毒粗毒及经初步纯化的蝎毒具有诱导SMMC7721和Hela凋亡的作用。结论:蝎毒粗毒及经初步纯化的蝎毒对人肝癌细胞(SMMC 7721)及Hela细胞的生长具有明显的抑制作用。     

人体肝癌细胞系(SMMC-7721)糖皮质激素受体的半衰期

用抑制蛋白质合成的方法,测定了人体肝癌细胞系(SMMC-7721)糖皮质激素受体(GCR)的半衰期。结果显示,在蛋白质合成被抑制79.30±3.69%的情况下,GCR的半衰期为3.5±0.3h,降解速度常数为0.200±0.017h~(-1)。如果正常细胞GCR也具有如此短的半衰期,则提示GCR对内外环境的变化可做出迅速的反应,可能在靶细胞对激素反应的调节中起着活跃的作用。     

维生素E、微量元素锌和硒对大鼠体外原代肝细胞及储脂细胞胶原代谢的影响

对维生素E、微量元素锌和硒对大鼠肝脏细胞胶原代谢的调控进行了体外研究。结果表明:肝细胞和储脂细胞均参与肝脏的胶原代谢;环境中维生素E浓度的提高可抑制肝细胞和储脂细胞的核酸合成,对细胞蛋白合成的促进作用不明显,但对细胞胶原蛋白的合成却有选择性抑制作用;环境中微量元素锌和硒浓度的适当提高对肝细胞和储脂细胞的核酸增殖和蛋白质合成均有明显促进作用,但对细胞胶原蛋白合成具有相对抑制作用,若锌和硒的浓度过高则对细胞有损害。总之,营养环境的不同将大大影响肝脏胶原的代谢,因此对肝病病人给予合理的营养膳食可能有助于防止肝硬化的恶化。     

维甲酸对人肝癌细胞磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D的作用

为了解细胞信号转导与细胞分化间的关系,研究了诱导分化剂全反式视黄酸(ATRA)和13顺视黄酸(13 cis-RA)对7721人肝癌细胞中磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D(PC-PLD)的影响。发现ATRA和13 cis-RA除能抑制7721细胞生长,并在形态上向正常方向分化外,分别在第2或第4天使膜结合性PC-PLD的比活力升高,用每瓶细胞的总活力计算,ATRA的作用在第2天也高于13 cis-RA,但13 cis-RA在第4天的效应却高于ATRA,说明13 cis-RA较ATRA的效应滞后。每天更换培养液的条件较不更换时细胞生长速度较快,且更能引起PC-PLD比活力的上升,提示新鲜培养液中可能存在促进生长和增强维甲酸升高PC-PLD的化合物。ATRA在第2天对PC-PLD比活力的作用高于第4天,可能由于第4天细胞增殖加快,细胞中蛋白质含量上升,以至使以蛋白含量计算的酶比活力下降。进一步研究维甲酸使膜结合性PC-PLD升高与蛋白激酶的关系,发现ATRA不论在第2天和第4天均使膜结合性和胞液中蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)的比活力下降,说明ATRA使膜结合性PC-PLD活力的升高不是通过PKC 或TPK对PC-PLD的激活作用来实现,其机理有待进一步研究。对维甲酸引起PC-PLD升高的生物学意义作了讨论。     

维生素E对体外培养的人脐静脉内皮细胞白介素-8表达的影响

目的探讨维生素E(α-生育酚)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)白介素-8(IL-8)表达的影响.方法体外培养HUVEC,将其随机分为正常对照组和实验组,实验组细胞在用激动剂脂多糖(LPS)刺激之前,分别给予0、10、20、30mg/Lα-生育酚,然后在6h、24h、48h三个时段,利用双抗体夹心酶联免疫吸附技术(ELISA)和原位杂交技术(ISH)检测各组细胞IL-8蛋白表达及mRNA表达水平.结果 (1)正常对照组IL-8有基础表达;(2)与正常对照组比较,ELISA和ISH的结果均显示LPS能够明显诱导IL-8高表达:蛋白表达增强约28倍(P<0.01),mRNA表达增强约4.3倍(P<0.01);(3)维生素E能够抑制LPS诱导的IL-8的表达:ELISA结果显示20mg/L-48hα-T处理组作用最强,IL-8蛋白表达减少72.7%(P<0.01);ISH结果显示20mg/L -24hα-T处理组作用最强,IL-8mRNA表达减少73.2%(P<0.01).结论维生素E可显著抑制LPS诱导的HUVEC高表达IL-8,表明维生素E可通过影响对动脉粥样硬化有重要作用的IL-8的表达来发挥其抗动脉粥样硬化作用.     

羟基脲对人红白血病细胞株中珠蛋白基因表达和细胞分化的影响

人红白血病细胞株(HEL细胞)中珠蛋白基因表达具有自己的特点。即只表达胚胎型的γ-珠蛋白基因而不表达成人型的β-珠蛋白基因。羟基脲(Hydroxyurea)是一种抑制DNA合成的小分子有机化合物。它在临床上被用来治疗地中海贫血和镰刀型贫血。我们的实验结果表明:随羟基脲浓度增加HEL细胞的增殖速度减慢。用常规RT-PCR方法和定量PCR分析证明;用羟基脲诱导HEL细胞后,β-珠蛋白基因表达增加,α-珠蛋白基因表达减少,而γ-珠蛋白基因表达变化不明显。对参与珠蛋白表达的转录因子GATA-1和NF-E2的定量PCR分析发现:这两种转录因子的表达均增加3倍以上。因此,羟基脲可能通过某些信号传递途径促进β-珠蛋白基因表达,从而使HEL细胞趋向终末分化。     

人肝癌细胞p53基因的表达及其对细小病毒H-1的敏感性

本文利用单链构象多态性分析,17号染色体短臂等位基因杂合性分析,Northern印迹,免疫沉淀,p53基因第7外显子酶切等技术检测了两个中国人肝癌细胞系SMMC-7721,YY-8103和一个自发转化的人肝细胞系L-02的p53基因结构与表达。实验表明,这三个细胞系中没有出现17号染色体短臂等位基因杂合性缺失,第4—9外显子也没发生突变,但其mRNA和蛋白表达水平很低。利用MTT比色分析法研究了这三个细胞系和其他已知p53基因背景的八个人肝癌细胞系(QGY-7703、PLC/PRF/5、Huh-7、Hep3B、FOCUS、Tong/ HCC、SK-Hep-1、HepG2)对自主性细小病毒H-1的敏感性。除HepG2细胞外,其他十个细胞系p53基因的结构和/或表达都不正常。经H-1感染(moi=20)后,其敏感性均高于HepG2细胞。本研究初步表明了p53基因结构或表达的不正常可能导致人肝癌或转化细胞对H-1的敏感性的提高。     

人体肝癌细胞系(SMMC-7721)的糖皮质激素受体以及糖皮质激素对酪氨酸转氨酶的诱导

本文以[~3H]Dex为配体,采用完整细胞GCR和核特异结合百分率的测定方法检测了人体肝癌细胞系(SMMC-7721)的GCR。实验表明,该细胞具有高亲和力、低容量、能与GC进行特异结合的Dex结合部位,该结合部位与[~3H]Dex结合后可向核内转位,因而具备了作为GCR的基本条件。但该细胞的GCR与正常细胞的GCR相比较亦有些差别,GC与受体结合后不能诱导TAT的生成。本文对上述改变的可能机理进行了讨论。     

饲料硒和维生素E对大鼠机体抗氧化能力的影响

 用克山病病区粮配成基础低硒饲料,补充硒和/或维生素E组成四种不同水平的饲料,饲喂雄性断乳大鼠,观察其对机体抗氧化能力的影响。评价指标是用抗坏血酸诱发的红细胞溶血率、被O~-_2(超氧阴离子)氧化的血红蛋白量和组织中的TBA值。动物饲养13周后,自尾静脉取血,测定溶血率和血红蛋白被氧化的百分率,和全血SeGSHPx(含硒谷胱甘肽过氧化物酶)活力。15周后将动物断头杀死,立即取出心脏和肝脏测定SeGSHPx活力和TBA值。结果表明在克山病病区粮的饲料中补充硒或维生素E,或者二者同时补充均明显提高组织中的SeGSHPx活力和降低组织中的TBA值。不论在硒缺乏时或硒充足时,饲料中补充维生素E显著降低抗坏血酸诱发的红细胞溶血率,对O~-_2氧化血红蛋白无保护作用。在维生素E缺乏时,仅补充硒对溶血无作用。不论饲料中维生素E缺乏或者充足,补充硒对O~-_1氧化血红蛋白均有显著保护作用。     

蛋白激酶C对鼻咽癌细胞P21~(ras)表达的影响

使用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂与抗Ｐ２１Ｈ－ｒａｓ单抗,通过免疫细胞化学,双参数流式细胞仪等方法,探讨鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ中ＰＫＣ与Ｈ－ｒａｓ表达的关系。结果：１）Ｐ２１ｒａｓ蛋白在ＣＮＥ－２Ｚ细胞主要在胞膜（２７％）与胞浆（９３．７％）表达。作用于ＰＫＣ调节区的抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）与作用于催化区的ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）在明显抑制细胞生长的浓度使Ｐ２１ｒａｓ表达程度均减弱,胞膜阳性率明显降低,分别为５．６％与１．６％。２）蛋白质－ＤＮＡ双参数流式细胞法测定发现在Ｇ１期细胞群Ｒａｓ蛋白表达差异较大,提示Ｒａｓ蛋白主要在Ｇ１期合成逐渐增多;经ＰＫＣ抑制剂ＳＳ与ＳＴ处理后,Ｇ１期细胞表达的差异减小,说明ＰＫＣ抑制剂抑制了Ｇ１期Ｒａｓ蛋白合成。本研究结果提示：ＰＫＣ对Ｒａｓ蛋白向发挥作用的部位胞膜的转移具有一定的调控作用。Ｒａｓ蛋白的表达可能与ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｇ１／Ｓ期的过渡有关。     

EZH2蛋白在食管上皮永生化细胞系和恶性转化细胞系中的表达

目的研究EZH2蛋白在食管上皮永生化细胞系(SHEE)和恶性转化细胞系(SHEEC)中的表达。方法采用免疫细胞化学染色、免疫印迹分析和流式细胞术检测两种细胞系EZH2蛋白的表达。结果两种细胞EZH2蛋白染色均呈阳性,阳性反应定位于细胞核,部分细胞胞浆也有阳性着色。免疫印迹分析表明SHEEC细胞和SHEE细胞的总蛋白、核蛋白在分子质量约90ku的位置均出现特异性印迹条带。SHEE细胞中EZH2蛋白的表达强于SHEEC细胞(P<0.05)。流式细胞术显示EZH2蛋白在两种细胞中均有表达,两者的平均荧光强度无明显差别;阳性细胞率均较高,其中SHEE细胞阳性率高于SHEEC细胞。结论EZH2蛋白在SHEE细胞和SHEEC细胞中高表达可能参与了它们的恶性改变;而EZH2蛋白在两种细胞系中的差异表达可能与细胞的分化程度及来源于胚胎食管上皮细胞相关。