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克隆差异表达基因的新策略 总被引:4,自引:0,他引:4
基因表达的变化有两种,即新出现的基因表达与表达量差异的基因表达.表达量差异的基因克隆技术主要有mRNA差异展示,此技术是目前筛选差异表达基因最有效的方法之一,但主要存在假阳性率高的不足,针对此缺点,近几年提出了新的策略与方法,如差异消减展示、基于PCR和减法杂交基础上的差异表达基因克隆技术,这些技术具有显著优势. 相似文献
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基因组错配筛选,代表性差异分析,mRNA差异显示和外显子扩增是管几年来发展起来的,从不同的水平和角度获得目的基因的新的基因克隆技术,本文主要介绍这四种基因克隆抗技术的原理,主要步骤及它们的优缺点。 相似文献
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酵母SOD形成的生理学研究 总被引:9,自引:1,他引:8
对筛选出的一株SOD高产菌株Y-216形成SOD的生理条件作了初步研究。结果表明:碳源、氮源、碳氮配比和金属离子等营养条件及培养温度、时间和通气量等培养条件,均对该菌株生物量与SOD含量有较大的影响。同时通过对几种酵母的测定,发现酵母菌对氧的抗性越大其SOD含量也就越高。 相似文献
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将外源基因———日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)基因克隆到大肠杆菌分枝杆菌穿梭质粒中,构建成四个不同的表达截体,研究它们在耻垢后分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatis)中的表达效率。首先将含有结核杆菌热休克蛋白70(HeatShockProtein,HSP70)的启动子的质粒pMT70用NcoI切,进行两种不同的修饰后,得到不同的SD序列;将Sj26GST基因克隆进去。再将含HSP70启动子和Sj26GST基因的片段切下,克隆到分枝杆菌大肠杆菌穿梭质粒pBCG2000中,筛选出不同SD序列、不同方向和不同拷贝数的分枝杆菌表达载体四个。所表达的重组天然Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDSPAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带。通过薄层扫描分析,发现表达质粒中双拷贝启动子外源基因组合,表达效率最高,是单拷贝组合的16倍,占分枝杆菌菌体总蛋白的28%。而不同的克隆方向和不同的SD序列(两者相差3个碱基)对表达效率的影响不明显。 相似文献
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HIV—1核蛋白p24在昆虫细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
将完整的HIV-1 p24基因克隆到杆状病毒转移质粒中,使用重组转移质粒与野生型杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞,经筛选获得带有编码p24基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞后在细胞中表达了HIV核蛋白p24。其重组蛋白的分子量为24kD。此重组糖蛋白在免疫荧光,免疫印染和酶联免疫实验中都能被人HIV-1阳性血清和单克隆抗体所识别。 相似文献
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以新筛选的对鞘翅目、鳞翅目、双翅目均具毒性的B.t.Tm13-14菌株为材料,用HD-1、3370-1为参考菌株,比较了伴孢晶体蛋白的多肽组成,以及经三种昆虫肠道酶降解产生的抗酶多肽组分。SDS-PAGE分析表明:Tm13-14晶体蛋白含138kD、132kD主要成分和65kD次要成分。其晶体分别由三种昆虫肠道酶消化产生绚毒性多肽,经生物测定,杀家蚕的毒性成分为68.5kD、59kD多肽;杀斜纹夜蛾毒性成分为71kD,67kD和59.6kD多肽杀马铃薯瓢虫毒性成分为69kD、65kD多肽。它与HD-1、3370-1晶体均有明显差异。 相似文献
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将Thinopyrum bessarabicum和Thinopyrum elongatum的种质导?… 总被引:5,自引:0,他引:5
2个双倍体即C.S-Thinopyrum bessarabicum(AABBDDJJ 2n=8x=56)和GHK-Thinopyrum elongatum(AABBDDEE 2n=8x=56)与普通小麦“中国春”杂交,获得了2个七倍体杂种。对23个双倍体、中国春、杂种F1和部分F2进行麦谷蛋白SDS-Page电泳,及结合染色体分带技术和田间赤霉病抗性鉴定筛选出由Th.bessarabicum和Th 相似文献
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根据小麦黄花叶病毒( W Y M V) 核苷酸序列测定结果,将 W Y M V R N A2 上的28 k Da 蛋白基因克隆到p E T11a 上,构建了原核表达载体p E2839 。 S D S P A G E 分析表明,经 I P T G 诱导,28 k Da蛋白基因在大肠杆菌 B L21( D E3)p Lys S 中得到高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,首次制备了小麦黄花叶病毒 R N A2 蛋白特异性抗血清。 相似文献
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表达强毒pp38决定簇的马立克病病毒疫苗毒CVI988点突变株的构建和特性 总被引:6,自引:1,他引:5
用鸡马立克病病毒(MDV)强毒GA株的38kD磷蛋白(pp38)基因克隆DNA转染I型弱毒疫苗CAI988/Rispens株MDV感染的鸡胚成纤维细胞,再用能识别I型强毒pp38的单克隆抗体H19做免疫荧光试验,筛选到能在pp38基因上表达强毒株特异性抗原决定簇的定向点突变弱毒株CVI/rpp38。用^35S-蛋氨酸标记的细胞裂解物做免疫沉淀反应表明,单抗H19不能识别天然CVI988株MDV中的 相似文献
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用PCR的方法克隆出了编码蓝细菌PCC7002 FNR中FNR区的基因克隆到达载体pET-3a上转化大肠杆菌BL21(DE3)后实现了大量表达。重组FNR组经DEAE-Sephdex A-50离子交换层析及Sephadex G-100凝胶层析得到大量的电泳均一的rFNRD。N末端氨基酸序列分析表明,表达产物确为petHL所编码且起始Met翻译后末被除去,rFNRD与rFNR的吸收光谱相同,其黄递酶 相似文献
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江浙蝮蛇神经生长因子在家蚕幼虫中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
江浙蝮蛇神经生长因子(NGF)基因克隆于昆虫病毒转移栽体pBacPAK8中,获得重组转移栽体pBac-PAK-NG〈与线性化Bm-AacPAK6修饰病基因组DNA共转染家蚕细胞,经过体内重组,筛选到重组病毒。用重组病毒洒家蚕幼虫,5天后收集血淋巴,经SDS-PAGE检测及利用PC12细胞进行NGF生物活力测定证明,神经生长因子在家蚕幼虫中得到较高表达,且表达产物具有良好的生物学活性 相似文献
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逆转录病毒介导CD基因在人结肠癌细胞中表达 总被引:2,自引:1,他引:1
构建了含有大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因(EC-CD)的重组逆转录病毒载体LCDDSN。经PA317细胞包装后,感染人结肠癌细胞株LoVo。G418筛选得一的稳定表达EC-CD基因的细胞克隆LoVo/LCDSN。LoVo/LCDSN鹜型LoVo相比,生长曲线无明显差异,细胞形态亦无改变。LoVo/LCDSN都对5-FU很敏感(IC50约为0.5μmol/L)。表达CD基因使细胞对基本无毒性的原药5-FC 相似文献
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高,低蛋白含量的大豆种子贮藏蛋白积累的比较研究 总被引:4,自引:0,他引:4
利用SDS-PAGE及电子显微镜等技术比较分析和观察了两个大豆品种(Glycine m ax(L.) Merr.)种子贮藏蛋白积累的差异。结果表明,在子叶发育过程中,蛋白含量高(45% )的“公交8059-3”比蛋白含量低(35% )的“GD-1515”蛋白含量高,且增长速率较快;蛋白质及7S和11S亚基积累的时期较早,尤其是7S的β亚基。电镜观察表明“公交8059-3”蛋白质在液泡中的积累,前期与“GD1515”相似,中期以后的液泡中,蛋白体占整个细胞的比例均高于“GD1515”。这表明:大豆蛋白含量的差异有其生化及结构上的基础 相似文献
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江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2基因的表达 总被引:9,自引:4,他引:5
将江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2基因克隆至表达载体pBLMVL2,转化入大肠杆菌RR1,经过温敏诱导,SDS-P;AQGE检测,在约14kD处有一表达条带。表达产物酸性磷脂酶A2约占细菌蛋白总量的30%,并以包涵体的形式存在。纯化包涵体后,将产物变性,复性,然后用FPLC Superose^TM12纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带。 相似文献
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近年来,分子生物学方法已成为寻找人类疾病新病原微生物的有效方法,使一些不能正常培养的致病因子得以鉴定。利用代表性差异分析(RDA),基于共有序列的聚合酶链反应(PCR),简称共有序列PCR和cDNA文库的筛选已成功地发现了卡波济肉瘤(KS),惠普尔病,汉坦病毒肺型综合征,非甲非乙型肝炎等疾病的病原体。 相似文献
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苜蓿中华根瘤菌042B是一株能在苜蓿和大豆上结瘤的菌株。将042B的nodSD基因克隆到时载体pBBR1MCS-5,并在豌豆根瘤菌LRR5045系统中进行功能分析,发现042B的NodD蛋白能与大豆的类黄酮化合物genistein结合,也怀苜蓿原类黄酮化合物luteolin反应。 相似文献