肿瘤坏死因子－α（TNF－α）对常见呼吸道病毒的抑制作用

用人重组肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）和人天然α干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－α－,ＩＦＮ－α）在人胚胎肺纤维母细胞（ＨＥＦ）和Ｈｅｐ－２细胞系上对常见呼吸道病毒所致细胞病变抑制进行比较观察。病毒包括不同型别的腺病毒５株,单疱病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ｉ）１株,鼻病毒１株,仙台病毒１株,ＶＳＶ１株。结果提示ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α均具有广谱抗病毒活性。ＴＮＦ－α的抑毒作用能被ＴＮＦ－α申抗和ＩＦＮ－β单抗完全去除,被ＩＦＮ－α单抗部分去除ＴＮＦ－α的抗病毒效应。ＴＮＦ－－α中和试验的结果提示：ＴＮＦ抗病毒活性仍为ＩＦＮ－β诱生所介导。     

人TNF-α双顺反子逆转录病毒载体的构建及其在成纤维细胞中的表达

利用脑炎心肌炎病毒的内核糖体进入位点连接人ＴＮＦ－αｃＤＮＡ和选择基因ＮｅｏＲ基因,使ＴＮＦ－α及ＮｅｏＲ基因均受控于病毒ＬＴＲ启动子,将两基因同时转录至同一ｍＲＮＡ,从而构建成人ＴＮＦ－α双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＴＮＦ－α．在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将其导入包装细胞ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选得单克隆,病毒滴度为１０６ＣＦＵ／ｍｌ重组病毒分泌的细胞株．经ＰＣＲ证明外源基因已整合至细胞基因组,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹显示出单一ＬＲＴ转录本．持续Ｇ４１８筛选能明显促进目的基因ＴＮＦ－α的表达．用重组病毒上清感染小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３,Ｇ４１８筛选获得的混合抗性克隆持续高表达ＴＮＦ－α,４０Ｇｙγ线照射后能维持高效表达至７ｄ．实验结果表明,含ＩＲＥＳ的双顺反子逆转录病毒载体将是一个很好的基因转移载体．     

含人TNF—α,IL—2及NeoR基因多顺反子逆转录病毒载？…

利用脑炎心肌炎病毒和脊髓灰质灰病毒的内核糖体进行位点,连接人ＴＮＦ－α及ＩＬ－２ｃＤＮＡ和选择基因新霉素磷酸转移酶基因（ＮｅｏＲ）,使ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因均受控于病毒毒ＬＴＲ启动子,将这３个基因转录至用一ｍＲＮＡ,从而构建成含人ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因多顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＴＲＩ。在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将其导入包装细胞ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选得单克隆     

肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及白细胞介素1β（IL1－β）对胶质增生的影响及机理

本文利用小鼠大脑机械损伤模型及体外培养的胶质细胞,采用同位素渗入法观察了细胞介素及其抗体对胶质细胞增生的影响。结果表明：体外培养时ＴＮＦ－α在浓度为１０～２００ｕ／ｍｌ培养液时均能促进胶质细胞增生（Ｐ＜０．０５）,ＩＬ１－β在浓度为５～２００ｕ／ｍｌ培养液时能促进胶质细胞增生,ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β其促进胶质细胞增生作用更强烈,ＴＮＦ－α抗体能完全阻断ＴＮＦ－α的促增生作用,部分阻断ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β的促增生作用。在体实验时,ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α的作用与离体时相似,ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α亦能促进胶质细胞增生,二者共同作用时促细胞增生作用更强。以上结果提示,外源性ＴＮＦ－α及ＩＬ１－β能促进中枢神经损伤后胶质细胞增生且具有协同作用。     

TNF-α作用的两面性

ＴＮＦ┐α作用的两面性细胞凋亡是否存在保护机制？最近Ｓｃｉｅｎｃｅ上发表了三篇文章从不同的角度证明,ＴＮＦ－α在诱导细胞凋亡的同时,可通过核因子κＢ（ＮＦ－κＢ）诱导某些蛋白以保护靶细胞免于死亡。因而,靶细胞的命运就取决于细胞内这两种机制的平衡。Ｂａ...     

含人TNF-α、IL-2及NeoR基因多顺反子逆转录病毒载体的构建及表达

利用脑炎心肌炎病毒和脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点,连接人ＴＮＦ－α及ＩＬ－２ｃＤＮＡ和选择基因新霉素磷酸转移酶基因（ＮｅｏＲ）,使ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因均受控于病毒ＬＴＲ启动子,将这３个基因转录至同一ｍＲＮＡ,从而构建成含人ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因多顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＴＲＩ。在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将其导入包装细胞ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选得单克隆,病毒滴度为５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ重组病毒分泌的细胞株,经ＰＣＲ证明外源基因已整合至基因组,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹显示出单一转录本。用重组病毒上清感染不同的细胞,Ｇ４１８筛选所获得的抗性克隆能不同程度地表达ＴＮＦ－α及ＩＬ－２。实验结果表明,含ＩＲＥＳ的多顺反子逆转录病毒载体能很好地在同一靶细胞中表达多个外源基因。     

通过构建轻链二级库对人源抗TNF-α抗体进行亲和力成熟

通过构建轻链二级库的方法,对人源抗ＴＮＦ－α单抗Ｆａｂ进行轻链置换,并筛选出具有更高亲和力的人源抗ＴＮＦ－α单抗的Ｆａｂ。首先用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增正常人全套抗体轻链基因,并与已获得的人源抗ＴＮＦ－α单抗的重链基因配对,构建人源抗ＴＮＦ－α噬菌体抗体轻链二级库,然后筛选与ＴＮＦ－α具有更高亲和力的克隆,经过三轮的生物淘筛（ｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ）,获得了比原来的人源抗ＴＮＦ－α单抗Ｆａｂ具有更高亲和     

ＴＮＦ—α基因在鱼腥藻７１２０中的表达及其产物的亲和层纯化

用转入ＴＮＦ－α基因并稳定有达了４年多的丝状体蓝藻－鱼腥藻７１２０（Anabaena sp.PCC7120),研究比较了在培养液中氨源（NaNO3)和碳源（NaAc)对转基因灌生长和ＴＮＦ－α基因的不同影响,氨源能稳定外源蛋白的表达,而碳源则影响细胞壁的合成。通过比较不同的破碎细胞的方法,发现超声破碎得到的可溶性总蛋白含量和ＴＮＦ－α含量均要比冻融法高出１倍左右,经过细胸破碎、硫酸铵分级沉淀、常压离子交换液相色析后,除去杂蛋白及大量容易堵柱的糖类等物质,最后通过亲和柱层析,分离出了纯的目标蛋白－重组肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）。经凝胶电泳鉴定为单一的谱带,分子量为１７kD。     

单核／巨噬细胞分泌TNF—α的调控及在老年时的改变

肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）是一种主要由单核／巨噬细胞分泌的细胞因子。它不仅有杀伤肿瘤细胞的特性,还在炎症、休克和自身免疫等病理过程中起重要作用。刺激巨噬细胞分泌ＴＮＦ－α的主要物质有内毒素、病毒、某些细胞因子和有丝分裂原以及神经肽等。而前列腺素Ｅ（ＰＧＥ）、ｃＡＭＰ类似物和肾上腺素类等可抑制其分泌。很多文献报道ＴＮＦ－α在老年时单核／巨噬细胞的分泌有改变。     

p38 MAPK参与LPS诱导RAW细胞TNF—α基因表达的调控

构建ＴＮＦ－α启动子驱动的荧光酶报告基因系统,研究ｐ３８ＭＡＰＫ信号转导系统对ＴＮＦ－α基因表达的影响,ＲＡＷ２６４．７细胞共转染实验发现,ＬＰＳ对ｐ３８的激活作用与其诱导ＴＮＦ－α转录活性的作用显著相关,虽然单纯转染ｐ３８未见明显诱导ＴＮＦ－α报告基因系统的转录活性。     

人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建

利用ＲＴ－ＰＣＲ从人肥大前列腺组织钓取９４个氨基酸的人前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）全长ｃＤＮＡ,序列分析结果与文献报道的完全一致．将ＰＳＰ９４成熟肽与人ＴＮＦα衍生物（ＴＮＦΔ）通过Ｌｉｎｋｅｒ－ＳＡＰＧＴＰ在基因水平上融合成５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ,融合基因ＤＮＡ序列分析结果与设计的相符合．５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为３１ｋＤ,表达量约占菌体总蛋白量的３５％．以Ｌ９２９细胞和人前列腺癌细胞株ＰＣ－３为靶细胞进行细胞毒分析结果表明,５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ融合蛋白既具有ＴＮＦ的细胞毒活性,又具有对前列腺癌细胞ＰＣ－３的杀伤作用     

青春双歧杆菌DM8504菌株对小鼠体内HCa—F25／16A3—F肿瘤细胞 …

本实验应用加热处死的青春双歧杆菌ＤＭ８５０４菌株皮下注射荷瘤ＨＣａ－Ｆ２５／１６Ａ３－Ｆ肿瘤的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,酶联法测定小鼠体内ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的含量,ＴＵＮＥＬ法及电镜观察肿瘤组织中是否有凋亡细胞的存在。实验结果指出：双歧杆菌能提高荷瘤小鼠体内ＴＮＦ－２的含量,较对照组明显升高,但ＩＬ－６的含量处理组与对照组之间无显著性差异。ＴＵＮＥＬ法除观察到不同程度的坏死组织外,未见到散在凋亡的肿瘤细     

小干扰RNA干扰缺氧诱导因子-1alpha增强口腔鳞癌细胞株化疗敏感性

目的：探讨针对缺氧诱导因子－１α（ＨＩＦ－１α）的小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）对口腔鳞癌细胞（ＯＳＣＣ）化疗敏感性的影响。方法：用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测ＯＳＣＣ和针对ＨＩＦ－１α基因的ｓｉＲＮＡ导入ＯＳＣＣ后的ＨＩＦ－１α蛋白表达水平;用ＭＴＴ法检测细胞对化疗敏感性的影响;用流式细胞术检测化疗诱导细胞凋亡的凋亡率。结果：ＨＩＦ－１α在ＯＳＣＣ中高表达,ＨＩＦ－１α－ｓｉＲＮＡ转染后ＨＩＦ－１α表达水平明显下降,细胞对化疗敏感性明显提高,化疗诱导肿瘤细胞凋亡率明显增加。结论：针对ＨＩＦ－１α基因的ｓｉＲＮＡ能明显降低ＨＩＦ－１α的表达,增强化疗对ＯＳＣＣ的凋亡诱导作用,有效提高ＯＳＣＣ对化疗的敏感性。     

bcl—2和IL—1和TNFα表达的调节作用初探

通过将反义ｂｃｌ－２基因转梁于Ｕ９３７细胞,建立了Ｂｃｌ－２蛋白表达受抑的Ｕ９３７细胞模型,证实了模型细胞的增殖和存活表型授课和线菌素Ｄ－结晶紫试验和ＥＬＩＳＡ检测表明模型细胞上清中ＴＮＦα的活性和含量无明显变化,小鼠胸腺细胞增殖试验表明模型细胞上清中ＩＬ－１活性升高,提示ｂｃｌ－２的表达对ＴＮＦα的表达无明显影响,但可能在一定程度上抑制了ＩＬ－１的表达或活性。     

人α－肿瘤坏死因子基因的高效表达

用人工合成的α－肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）基因构建了五个不同的表达质粒,它们不同之处是ＳＤ序列与起始密码子ＡＴＧ间距离（Ｄ）各异。计算机模拟计算出翻译起始区域（ＴＩＲ）中二级结构的最小生成自由能,以（Ｄ）为６个核苷酸时最小（绝对值）。它的表达效率也最高,产物ＴＮＦ－α可达菌体总蛋白的６０％。密码子的选用对表达效率有很大的影响,故人工合成ＴＮＦ－α基因（选用大肠杆菌偏爱的密码子）的表达效率高于ｓｃ－     

Fas与FasL的分子及细胞生物学研究进展

Ｆａｓ是Ｉ型膜蛋白,属ＴＮＦ受体家庭成员,许多细胞表达Ｆａｓ。而Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）只在激活Ｔ淋巴细胞表达,是Ⅱ型膜蛋白,属ＴＮＦ家庭成员,当ＦａｓＬ与Ｆａｓ结合时,Ｆａｓ可向细胞传递“死亡信号”,细胞在数小时内凋亡,Ｆａｓ－ＦａｓＬ介导的细胞凋亡在免疫调失及免疫病理中,可能有重要作用。     

青春双歧杆菌DM8504菌株对小鼠体内HCa-F_(25)/16A_3-F肿瘤细胞抑制作用的初步研究

本实验应用加热处死的青春双歧杆菌ＤＭ８５０４菌株皮下注射荷瘤ＨＣａ－Ｆ２５／１６Ａ３－Ｆ肿瘤的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,酶联法测定小鼠体内ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的含量,ＴＵＮＥＬ法及电镜观察肿瘤组织中是否有凋亡细胞的存在。实验结果指出：双歧杆菌能提高荷瘤小鼠体内ＴＮＦ－２的含量,较对照组明显升高,但ＩＬ－６的含量处理组与对照组之间无显著性差异。ＴＵＮＥＬ法除观察到不同程度的坏死组织外,未见到散在的凋亡的肿瘤细胞,电镜观察与ＴＵＮＥＬ结果相一致,肿瘤细胞呈现坏死细胞的超微结构,未见凋亡细胞所具有的典型的形态特征。结果提示：双歧杆菌通过调节机体的免疫系统发挥抗肿瘤的作用,其对ＨＣａ－Ｆ２５／１６Ａ３－Ｆ肿瘤细胞的杀伤是通过坏死的方式实现的。     

双歧杆菌对RAW264.7细胞的免疫刺激作用

为了检测双歧杆菌是否能增强巨噬细胞免疫因子的产生,用ＲＡＷ２６４．７细胞作为巨噬细胞模型,将８种不同的经热处理杀死的双歧杆菌分别与培养的ＲＡＷ２６４．７细胞温育。所有的双歧杆菌均能诱导ＴＮＦ－α及ＩＬ－６的产生,且产生ＴＮＦ－α及ＩＬ－６的量与双歧杆菌的剂量及诱导时间有关,在２４ｈ之内,与对照组相比,８种双歧杆菌均能增强ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的产生,但是如果双歧杆菌与ＲＡＷ２６４．７细胞温育时间短（只有１４ｈ）,低剂量的双歧杆菌（１０μｇ／ｍＬ和５０μｇ／ｍＬ）就不能诱导ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的产生。双歧杆菌     

细菌及春毒素诱发小鼠胸腺细胞凋亡的机制初探

给ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射产肠毒素Ｂ金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌或葡萄球菌肠毒素,均可引起小鼠腺萎缩,呈现胞腺重量减轻、胸腺细胞数减少、胸腺细胞存活率降低。进一步研究表明,小鼠胸腺细胞凋亡的机制可能与这些细菌或毒素诱导缩生产生ＴＮＦ－α、ＩＦＮｒ和ＩＬ－６等细胞因子有关。     

重组人白细胞介素－6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达

针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实,根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息,利用ＰＣＲ技术,对人ＴＮＦα基因进行了改造,并将其与人ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,分子量约为３７ｋＤ;活性检测结果证实,该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ－６受体的能力,在高表达ＩＬ－６受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的ＴＮＦ高约３倍。