p73基因

ｐ７３基因黄君富房殿春鲁容（第三军医大学西南医院分子生物学实验室,重庆４０００３８）关键词ｐ７３ｐ５３抑癌基因人们对抑癌基因ｐ５３在肿瘤发生中的作用已进行了较为深入的研究,ｐ５３基因的缺失及失活与５０％的人类肿瘤发生有关。人们早就认为,在复杂的生物学...     

水稻cDNA c73片段在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化

曾以水稻蜡质基因５’调控区内一段３１ｂｐ片段为探针,用酵母单杂交法从水稻ｃＤＮＡ文库中筛选出若干个其编码的蛋白可能与此３１ｂｐ片段结合的ｃＤＮＡ克隆,现将其中的ｐＣ７３克隆中的插入片段ｃ７３连接到含Ｈｉｓ６的表达载体ｐＥＴ２８－ｃ（＋）上,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行诱导表达,并用Ｎｉ－ＮＴＡ树脂纯化得到预期的融合表达产物。在合适的诱导表达条件下,融合表达产物主要以可溶形式存在于大肠杆菌细胞     

重组人MCAF／GM－CSF融合蛋白表达及其生物学活性研究

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法,把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）进行基因融合,置于ｐＢＶ２２０载体的λＰＲＰＬ串联启动子下游,构建了ＳＤ序列与ＡＴＧ之间含有不同核苷酸组成的重组质粒ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３。ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３的翻译起始区都不存在稳定的二级结构,但ＤＨ５α（ｐＭＧ０２、ＤＨ５α（ｐＭＧ０３）的表达水平远远高于ＤＨ５α（ｐＭＧ０１）,ＤＨ５α（ＰＭＧ０１）几乎没有表达。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,它能分别与ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ抗体发生特异反应。生物学活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性和维持ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖的ＴＦ１细胞生长的特性,说明ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ的生物学功能是相容的．     

HIV-1 Gag pl7-p24在痘苗病毒中的表达及性质研究

研究了重组痘苗病毒表达的ＨＩＶ－１核心蛋白（Ｇａｇ）ｐ１７－ｐ２４蛋白的些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、Ｄｏｔ 及ＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了ＨＩＶ－１Ｇａｐ ｐ２４及ｐ１７－ｐ２４融合蛋白。电镜观察证实,Ｇａｇ ｐ２４及ｐ１７－２４重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗ＨＩＶ－１Ｇａｐ ｐ２４抗体。重组病毒感染ＢＨＫ２１细胞后,可见由     

p53基因及其蛋白的结构和功能研究新进展

ｐ５３蛋白来源于各种种系的动物,它们有共同的特征,划分为３个不同区域,具有５个高度保守的结构域,每一区域有不同的结构特征和功能,从而使ｐ５３发挥诸多的生物学作用     

贵州蚋属两种新记述：（双翅目：蚋科）

本文报道采自贵州的蚋属二新种：兴义维蚋Ｓｕｍｕｌｉｕｍ（Ｗｉｌｈｅｌｍｉａ）ｘｉｎｇｙｉｅｎｓｅ ｓｐ．ｎ８ｏｖ．和轮丝蚋Ｓｉｍｕｌｉｕｍ（Ｓｉｍｕｌｉｕｍ）ｒｏｔｉｆｉｌｉｓ ｓｐ．ｎｏｖ,分别描述了其形态特征,并与其近缘种相比较。模式标本存在于贵阳医学院生物学教研室。     

贵州蚋属两新种记述(双翅目:蚋科)

本文报道采自贵州的蚋属二新种：兴义维蚋Ｓｉｍｕｌｉｕｍ（Ｗｉｌｈｅｌｍｉａ）ｘｉｎｇｙｉｅｎｓｅｓｐ．ｎｏｖ．和轮丝蚋Ｓｉｍｕｌｉｕｍ（Ｓｉｍｕｌｉｕｍ）ｒｏｔｉｆｉｌｉｓｓｐ．ｎｏｖ．,分别描述了其形态特征,并与其近缘种相比较。模式标本存放于贵阳医学院生物学教研室。     

水稻cDNA c73片段在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化

曾以水稻蜡质基因５’调控区内一段３１ ｂｐ 片段为探针,用酵母单杂交法从水稻ｃＤＮＡ 文库中筛选出若干个其编码的蛋白可能与此３１ ｂｐ 片段结合的ｃＤＮＡ克隆,现将其中的ｐＣ７３ 克隆中的插入片段ｃ７３ 连接到含Ｈｉｓ６ 的表达载体ｐＥＴ２８ｃ（ ＋ ） 上,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３） 中进行诱导表达,并用ＮｉＮＴＡ 树脂纯化得到预期的融合表达产物。在合适的诱导表达条件下,融合表达产物主要以可溶形式存在于大肠杆菌细胞内;表达量占到大肠杆菌总蛋白的１０ ％ 左右;经ＮｉＮＴＡ 树脂亲和层析纯化得到的产物纯度达９５ ％ ,可供进一步研究之用。     

人睫状神经营养因子突变体基因克隆及高效表达

为了提高人睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的生物学活性,用ＰＣＲ方法获取Ｎ端缺失１４个氨基酸的ＣＮＴＦ基因片段,经酶切鉴定、核酸测序证实突变体的核苷酸序列,将其重组至表达质粒ｐＢＶ２２０,构建了ＣＮＴＦ突变体表达载体ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其表达水平,鸡胚背根节无血清培养法检测表达蛋白的生物学活性．结果表明,ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ能表达生物学活性高于天然ＣＮＴＦ的约２６ｋＤ蛋白质,表达水平达３０％．为今后通过基因工程方法获得ＣＮＴＦ突变体,从而制备高效的ＣＮＴＦ制剂创造了条件．     

人血小板生成素受体c—MPL膜内部分的聚合作用

血小板生成素（ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－ＭＰＬ介导。利用酵母双杂合系统研究ｃ－ＭＰＬ膜内部分在ＴＰＯ信号转导途径中的功能。首先用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从人红白血病ＨＥＬ细胞系总ＲＮＡ中扩增并克隆Ｐ型ｃ－ＭＰＬ（ＭＰＬＰ）膜内部分ｃＤＮＡ,经测序验证后克隆至双杂合载体ｐＡＳ２和ｐＧＡＤ４２４中,重组质粒命名为ｐＡＳＭＭ和ｐＧＡＤＭＭ。将ｐＡＳＭＭ与ｐ     

聚球藻7942高效泌氨突变种的获得及其泌氨、谷氨酰胺合成酶活性、光合和生长

将含有Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣＣ７１２０反义ｇｌｎＡ基因片段的穿梭表达质粒ｐＤＣ－ＡＴＧＳ转化单细胞蓝藻聚球藻Ｓｙｎｅ－ｃｈｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐ．ＰＣＣ７９４２,通过同源重组,外源ＤＮＡ定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Ｓｙｎｅｃhｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐ．７９４２突变种。将此突变种固定化在聚氨脂泡沫中后,定量测定其谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）活性。结果表明,固定化后的突变藻培养９ｄ后泌氨活性比自由生活的野生藻高１５６倍,ＧＳ活性降低７３．６％;其生长速度与同条件下野生藻相近,７７Ｋ荧光光谱表明突变种固定化后光系统Ⅱ活性提高４４％。     

蓖麻毒素A链突变体的设计,表达与活性研究

利用蛋白质结构同源模建并结合表观静电势分析,设计了拟具有生物学活性的蓖麻毒素Ａ链的突变体。将ＰＣＲ扩增的突变体基因,导入ｐＫＫ２２３－３载体中,于大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中获得高效、可溶性表达,而且,确证了表达产物具有预期的生物学活性。     

中国短蚋一新种（双翅目：蚋科）

本文报道采自贵州草海的蚋属一新种,即草海短蚋Ｓｉｍｕｌｉｕｍ ｃａｏｈａｉｅｎｓｅ ｓｐ．ｎｏｖ．,其其鉴别形态进行了描述并与其近缘种作了比较。模式标本存放于贵阳医学院生物学教研室。     

p53突变蛋白在胃癌组织中的表达及免疫电镜观察

作者应用抗ｐ５３单克隆抗体Ｐａｂ１８０１（Ａｂ２美国癌基因公司产品）对３８例手术切除的胃癌组织及癌旁胃粘膜的冰冻切片标本进行ｐ５３突变蛋白表达的检测,并进一步用胶体全免疫电镜技术对ｐ５３突变蛋白的分布特征进行观察。结果：３８例胃癌组织中,２４例有ｐ５３突变蛋白高表达,阳性率６３．２％。在对应的癌旁胃粘膜中１０例为ｐ５３的弱表达,正常组织无表达。伴有淋巴结转移的２３例胃癌标本中,１８例ｐ５３高表达（７８．３％）。免疫电镜结果表现,ｐ５３蛋白主要分布于核内染色质中,胞浆中有散在的阳性区,但以核膜周边为主,紧靠核膜。本研究结果提承胃癌的发生及其肿瘤的生物学行为与抑癌基因ｐ５３的突变密切相关,ｐ５３突变蛋白可能是通过对ＤＮＡ复制的影响而参与肿瘤的形成。     

人促血小板生成素受体c—Mpl编码区全长cDNA的克隆及其稳定？…

以人ＨＥＬ细胞总ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了人促血小板生成素受体ｃ－Ｍｐｌ编码区全长１．９ｋｂ ｃＤＮＡ,测序结果表明与已报道的序列一致。然后构建了ｃ＝ｍｐｌ的ｐｃＤＮＡ３表达载体ｐｃＭＰＬ,转染不表达ｃｍｐｌ的Ｋ５６２细胞后,经Ｇ４１８抗性筛选,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｌｂｏｔ检测证实获得稳定表达ｃ－ｍｐｌ的细胞株。为进一步研究ｃ－Ｍｐｌ的生物学功能提供有用的实     

家蚕抗菌肽CMIV基因结构改造及表达产物的研究

参照天然抗菌肽ＣＭＩＶ组分的氨基酸序列,作了近５０％的改动,根据大肠杆菌偏爱的密码子,设计并人工合成了抗菌肽基因片段．将人工合成的抗菌肽类ＣＭＩＶ基因先重组到测序载体ｐＵＣ１１８上,经过序列分析,发现克隆于载体ｐＵＣ１１８上的基因片段与设计的序列完全一致．再将该基因片段重组到表达载体ｐＥＴ２８（ａ）上,抗菌肽以融合蛋白的形式表达．融合蛋白经镍－金属离子胶亲和层析纯化后,再用ＣＮＢｒ裂解,最终产物具有与天然抗菌肽相同的生物学活性     

O139霍乱弧菌的研究进展

Ｏ１３９霍乱弧菌是一种新发现的可引起霍乱流行的病原体，该病的流行已引起各国的关注。Ｏ１３９霍乱弧菌的研究对菌苗研制和控制疾病有重要意义。本文综述了最近国外Ｏ１３９霍乱弧菌的生物学特性、免疫反应及其毒素共调菌毛（ｔｃｐ）的研究进展。     

鸡平滑肌肌球蛋白轻链激酶在NIH 3T3细胞中的表达

肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）在调节平骨肌细胞收缩过程中具有十分重要的作用。本言语通过将ＭＬＣＫｃＤＮＡ插到质粒ｐＢＫｒｓｖ中构建ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ,并转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞中,ＤＮＡ－ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表达转染细胞可表达ＭＬＣＫ。活生分析表明所表达的ＭＬＣＫ具有生物学活性。为进一步研究ＭＬＣＫ在信号传导,调节平骨肌收缩等作用奠定了基础。     

p38MAPK信号通路

细胞表面受体到核的信号通路是现代生物学研究的主题之一。细胞外各种刺激通过和膜受体偶联的Ｇ蛋白和酪氨酸激酶介导了一系列丝氨酸／苏氨酸激酶介导的级联反应,即分裂原激活蛋白激酶（ＭＡＰＫ）级联反应。ＭＡＰＫ级联反应把细胞外信号传递到核,并汇总了各种信号通路来的传息,因此研究细胞内ＭＡＰＫ的信号通路是十分重要的．本文简要介绍了ＥＲＫ,ＪＮＫ和ｐ３８三种ＭＡＰＫ途径,着重叙述了ｐ３８ＭＡＰＫ信号途径的性质和功能以及在免疫细胞中的作用和某些疾病的临床关系。     

目的Ribozyme两侧长片段附加序列（LAS）的去除及其转录载体构建

选择小鼠腺苷脱氨酶ｍＲＮＡ特异Ｒｉｂｏｚｙｍｅ做为目的Ｒｉｂｏｚｙｍｅ（Ｒｚ）,在目的Ｒｉｂｏｚｙｍｅ两侧分别设计５＇－顺式Ｒｚ和３＇－顺式Ｒｚ,在目的Ｒｉｂｏｚｙｍｅ上设计ＢａｍＨＩ酶切位点,并构建了上述Ｒｉｂｏｚｙｍｅ转录载体ｐＳＣＲｚ２６２,采用该质粒进行体外转录,并对转录靶ＲＮＡ分子进行了切割反应。结果显示ｐＳＣＲｚ２６２在转录过程中发生了自身切割,并释放出目的Ｒｉｂｏｚｙｍｅ－Ｒｚ２６２,该目的Ｒｉｂｏｚｙｍｅ不但去除了两侧长片段附加序列,而且保持了正确的生物学活性,通过ＢａｍＨＩ切点的设计简化了该质粒的筛选。