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1.
采用单特异引物PCR克隆法,得到大鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转录调控区DNA片段.核酸序列分析证实,大鼠iNOS基因的5′-侧翼区含有IFN-γ和TNF-α应答元件及NF-κB结合位点的保守序列.这些保守序列的位置及排列显著区别于人和小鼠的iNOS基因.电泳迁移率改变分析(EMSA)表明,VSMC受IL-1和IFN-γ刺激后,细胞核内产生某种可与iNOS基因5′-侧翼区特异结合的核蛋白因子. 相似文献
2.
大鼠诱导型一氧化氮合酶基因转录调控区的克隆与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
采用单特异引物PCR克隆法,得到大鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转录调控区DNA片段。核酸序列分析证实,大鼠iNOS基因的5'-侧翼区含有IFN-γ和TNF-α应答元件及NF-kB结合位点的保守序列。这些保守序列的位置及排列显区别于人和小鼠的iNOS基因。电泳迁移率改变分析(EMSA)表达,VSMC受IL-1和IFN-γ刺激后,细胞核内产生某种可与iNOS基因5'-侧翼区特异结合的核蛋白因 相似文献
3.
多个顺式作用元件调节血管紧张素原基因表达 总被引:1,自引:1,他引:0
血管紧张素原是最强的血管活性物质——血管紧张素Ⅱ的唯一前体,在不同的生理和病理条件下,其水平各异.为了研究血管紧张素原基因表达的调控,将人血管紧张素原基因5′端侧翼序列1.2kb同氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因编码序列连接,构成表达载体,并且在此基础上构建5′端系列缺失的突变表达载体,用这些表达载体转染HepG2和COS-7,确定了正负调控元件;同时应用DNA-蛋白质凝胶泳动检测技术,发现核蛋白质与该顺式元件的结合,从而证明多个顺式作用元件调节血管紧张素原基因的表达. 相似文献
4.
主要利用凝胶迁移率试验和抗体超迁移试验,以hIL-3基因5′侧翼含κB位点的序列为探针,探究NF-κB是否参与了hIL-3基因的表达调节.结果表明,在Jurkat细胞和人外周血T淋巴细胞中,都存在与此序列特异结合的可诱导蛋白;NF-κBp65亚基的单抗对DNA-蛋白复合物的形成没有影响.这些结果揭示:正常细胞和肿瘤细胞中,确存在可特异识别hIL-3基因5′侧翼的κB顺序的蛋白因子,而且该蛋白因子的表达是可诱导的;但NF-κB并未参与IL-3基因的表达调节. 相似文献
5.
人分裂细胞核抗原基因片段的筛选、测序及对启动子的分析 总被引:1,自引:0,他引:1
经6.6×105个克隆筛选,从装在λ噬菌体载体Charon30中的人基因库中筛选到了一个含人分裂细胞核抗原(PCNA)基因的克隆。经Southern杂交分析插入基因长约14kb,有较长的5'上游区,但3'端缺少一部分。经亚克隆和测序已确定从5'上游1263bp到3'端与λ载体接点共4969bpPCNA基因片段的核苷酸序列。将PCNA基因启动子核苷酸序列与DNA聚合酶α,拓扑异构酶Ⅱα,胸苷酸激酶基因的启动子进行比较有30%以上同源性,具有“看家基因”特征。在转录起始点的5'上游几百bp的范围内都有与CAT,SP1,E2F,NFHB,Oct1和ATF等转录因子的结合位点相似的核苷酸序列。 相似文献
6.
苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达 总被引:21,自引:0,他引:21
将全长3.5kb的Bt基因3’端缺失,得到长为2.1kb、1.8kb的基因。分别将这3个长度(1.8kb、2.1kb、3.5kb)的基因置于水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子调控之下,并与选择标记基因aadA(编码氨基糖苷-3’-腺苷酸转移酶,具壮观霉素抗性)表达盒相连;以烟草叶绿体基因trnH-psbA-trnK为同源片段,构建成叶绿体转化载体pBT3、pBT8和pBT22。用基因枪把Bt基 相似文献
7.
曾星 《中国生物化学与分子生物学报》1997,13(4):385-390
在克隆了人基因组全长vigilin基因的基础上,对其5端转录调控区域再克隆,获得Vig-CG5-7E克隆,再用限制酶ApaⅠ和EcoRⅠ切除3端约4kb部分,得到Vig-CG5-7E3AE克隆,并对该克隆进行双向测序分析.结果表明:克隆Vig-CG5-7E用ApaⅠ酶消化后,用cDNA上游开始的20个碱基组成的寡聚核苷酸做探针进行分子杂交,可见一条小于0.1kb杂交带,根据物理图谱分析,位于Vig-CG5-7E3AE克隆的ApaⅠ端,从而推断该克隆含有转录调控元件,5端序列分析得到二个TATA盒,一个CAAT盒和一个GC盒以及二个可能的Ap-1和Ap-2结合位点.认为GC盒可能为人vigilin基因启动子的组成部分 相似文献
8.
化学修饰对反义寡核苷酸稳定性及抗流感病毒活性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探讨 A S O D N 化学修饰形式与 A S O D N 稳定性,体外细胞毒性以及抗流感病毒活性之间的关系,合成了 7 种不同化学修饰形式的 A S O D N:硫代 A S O D N 及其 3′端分别磷酸化和胆固醇修饰;3′与 5′端硫代,中间为天然结构的混合骨架 A S O D N;天然结构 A S O D N 及其 3′端分别磷酸化和胆固醇修饰等.测定了 7 种修饰体在小鼠血清, M D C K 细胞裂解液,含 2% 胎牛血清的 D M E M培养液以及水中的稳定性,体外细胞毒性和在细胞水平抗流感病毒活性.结果表明,混合骨架 A S O D N,硫代 A S O D N 及其 3′端接磷酸和胆固醇的修饰形式在小鼠血清, M D C K 细胞裂解液与含2% 胎牛血清的 D M E M 培养液中稳定性相对较高,作用 24~48 h 仅混合骨架 A S O D N 与硫代 A S O D N 发生部分降解;天然结构 A S O D N 及其 3′端接磷酸和胆固醇修饰体在 24 h 内大部分降解.所有 A S O D N 修饰体在水中具有很高稳定性,48 h 内未见降解作用.7 种 A S O D N 修饰形式在 M D C K 细胞中未表现明显的细胞毒性.硫代 A S O D N 及其 3′端接磷酸和胆 相似文献
9.
人组织因子基因位于1p21-22,启动子区有2个AP-1位点、1个kB样位点,5个Sp1位点及3个Egr-1位点。其中TE的基础表达与5个Sp1位点均有关;血清反应元件与近端3个Sp1位点和3个Egr-1位点有关; 相似文献
10.
地中海拟无枝菌酸菌U-32是一种临床上重要的抗生素-力复霉素SV的产生菌,研究表明,在地中海拟无枝菌酸菌的力复霉素生物合成过程中,3-氨基5-羟基苯甲酸合成酶(AHBAS)是合成中间体C7N母核(又称AHBA)的关键酶。通过筛以广宿主粘粒pLAFR3为载体构建的地中海拟无枝菌酸菌U-32的基因文库,获得6个阳性克隆子。将含有AHBAS基因的约2.5kb的片段克隆到pBluescriptⅡSK和KS 相似文献
11.
缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中血小板源性生长因子和c—my… 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子A链、B链和c-myc原癌基因mRNA。正常肺组织可表达1.7kb的PDGF-AmRNA和3.5kb的PDGF-BmRNA,还有少量2.2kbcmRNA.在缺氧过程中,PDGF-B链mRNA和c-mycmRNA迅速增加,至缺氧14d时,分别为正常的3倍和5倍。而PDGF-AmRNA在缺氧7d时增高,而后又略有降低。结果表明:缺氧的肺组织局生成的PDGF激活 相似文献
12.
CYP3A基因表达与调控的分子机制 总被引:5,自引:0,他引:5
P4503A是参与药的氧化代谢的重要酶系,在肝脏及肠道中含量丰富。人体内参与药物代谢的CYP3A亚系为CYP3A4、CYP3A5、CYP3A7。其中CYP3A7主要存在于胚胎肝脏。CYP3A的主要调控位于5端,其中某些转录调控因子结合位点与CYP3A在组织中的特异性表达有关。5端有两个特殊结构NFSE与HFLaSE分别为CYP3A4与CYPA3A7所独有,可能与基分别在成人及胚胎计中的特异性表达有 相似文献
13.
决明组织培养的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以草决明无菌苗子叶为外植体,接种于7类诱导愈伤组织的培养基上:A.MS+2.02,4-Dmg/L(以下单位省略)+0.3BA+0.2NAA.B.MS+0.22,4-D十0.2BA+2.0NAA.C.MS+1.02,4-D+0.5BA+0.2KT.D.MS+0.7BA+1.5NAA+0.1KT.E.MS+1.52,4-D+0.7BA十0.2MAA.F.MS+0.42.4-D+1.0NAA+0.1KT.G.MSB(MS的无机成份和B5有机成分)+0.15NAA+BA,KT和ZT各0.5。8~15天后分别有90~99.6%的子叶片被诱导出愈伤组织,并且F.与C.类培养基对诱导愈伤组织比较理想,放于G培养基上的愈伤组织有9.2~30.2%的芽分化率。芽在生根培养基1/2MS+0.2IBA中、98%生根,形成完整的再生植株。 相似文献
14.
为研究导致Yunnanese(Aγδβ)0-地贫缺失事件的分子机制,并从3′并入序列中搜寻增强子类序列,使用EMBL3为载体构建了一例缺失杂合子的基因组文库,筛选到来源于异常染色体11并包含Gγ珠蛋白基因区6.7kb序列以及11.5kb3′并入序列(即缺失桥片段)的克隆.此11.5kb序列在正常染色体中位于β珠蛋白基因约下游66~78kb区域.详细分析了这一区域的限制性内切酶图谱.分析了围绕缺失连接区的DNA序列,精确定位缺失的5′端点发生在Aγ珠蛋白基因上游-116~-117碱基之间.确定缺失的3′端点处于一个L1序列内,位于β珠蛋白基因下游~66kb,距离Chinese(Aγδβ)0-地贫缺失3′端点上游~12.2kb的一个EcoRⅠ位点上游413bp.围绕5′和3′端点的序列之间无明显同源性,说明这一缺失代表了体内的非同源重组事件.这一重组事件可能由L1序列介导.缺失3′端点下游序列的克隆分离也为进一步从中搜寻加强子类序列奠定了基础 相似文献
15.
宫粉郁金的组织培养和快速繁殖 总被引:7,自引:1,他引:7
1植物名称宫粉郁金(Curcuma kwangsiensis)。2材料类别 块茎萌动芽。3培养条件 萌动芽生长培养基:(1)MS+6-BA1mg·L-1(单位下同)+NAA0.2。不定芽增殖与愈伤组织诱导培养基:(2)MS+6-BA10+KT5;(3)MS+6.BA10;(4)MS+6-BA5+KT2.5;(5)MS+6-BA5;(6)MS+6-BA2+KT1。生根培养基:(7)MS+NAA0.5;(8)MS+6-BA0.5+NAA0.5;(9)MS。以上培养基均加0.7%琼脂,3%蔗糖,pH5… 相似文献
16.
实验分为白介素-1(IL-1)预处理组和非预处理组,脂质体介导反义IL-1 受体相关激酶-1(IRAK-1)寡核苷酸(ODN) 转染HepG2 细胞,用w estern 杂交分析IRAK-1 表达水平,以夹心酶联免疫吸附测定法检测NF-κB含量. 结果表明,IL-1 非预处理组反义IRAK-1 ODN不能抑制IRAK-1 表达和NF-κB活化,而预处理组IRAK-1 表达和NF-κB活化受到明显抑制. 反义IRAK-1 ODN 对NF-κB活化的抑制作用具有时间(5~24 h)和剂量(1~8 μg)依赖性. 说明IL-1 预刺激在反义IRAK-1 ODN抑制IL-1 诱导的NF-κB活化中起决定性作用. 相似文献
17.
本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子A链、B链(PDGF-A,PDGF-B)和c-myc原癌基因mRNA在正常和缺氧时的含量变化。正常肺组织可表达1.7kb的PDGF-AmRNA和3.5kb的PDGF-BmRNA,还有少量2.2kbc-mycmRNA。在缺氧过程中,PDGF-B链mRNA和c-mycmRNA迅速增加,至缺氧14d时,分别为正常的3倍和5倍。而PDGF-AmRNA在缺氧7d时增高,而后又略有降低。结果表明:缺氧的肺组织局部生成的PDGF激活了c-myc原癌基因,这对于缺氧性肺动脉高压的形成具有重要作用。 相似文献
18.
通过计算机模拟比较十种理论上柔性较好的接头在 5′ I L6 T N FΔ融合蛋白中对 I L 6 和 T N FΔ空间结构的影响情况,从中选择了 S A P G T P接头.以 S A P G T P 作为接头的 5′ I L6 S A P G T P T N FΔ和以 P G 为接头的5′ I L6 P G T N FΔ空间结构预测结果相似. D N A 序列分析两种蛋白的接头序列均与设计的一致.5′ I L6 S A P G T P T N FΔ和 5′ I L6 P G T N FΔ蛋白的大肠杆菌表达产物经初步分离、纯化及鉴定后,生物学活性及对高表达 I L 6 受体肿瘤细胞的杀伤作用比较结果显示:在 L929细胞上,前者的生物学活性是后者的 27 倍;在 U937 细胞上,前者对肿瘤细胞的抑制率是后者的13 倍.它们对高表达 I L 6 受体的 U937 细胞杀伤作用分别是同样突变位点的人 T N Fα衍生物的37 和 29 倍.实验表明, S A P G T P作为接头构建的 5′ I L6 S A P G T P T N FΔ融合蛋白优于以 P G 作为接头构建的 5′ I L6 P G T N FΔ融合蛋白. 相似文献
19.
通过对重组质粒pGXN300中的 2.3kb EcoRI片段测序分析发现,其上有一完整的lrp基因和部分 putA基因,与 King ND等[1]报道的 B.japonicum的lrp基因DNA序列有 88%同源性。利用 Tn5 gusA5定位 诱变方法,对质粒pGXN300进行插入诱变,得到2.3kb EcoRI片段上有Tn5gusA5插入位点的质粒pGXN300- T38,将pGXN300-T38转移到大豆馒生根瘤苗(B.japonicum)GX201中,得到的GX201转移接合子与不相容 质粒pPH1JI发生同源双交换。通过抗性及gusA活性检测,筛选到一lrp基因突变株。Southem杂交分析证 明这突变株的 Tn5 gusA5插入确实是同源交换而不是转座产生,表明 Tn5 gusA5 诱变可以应用于大豆慢生根 瘤菌中的突变林筛选。 相似文献
20.
酸枣的组织培养和植株再生 总被引:8,自引:0,他引:8
1植物名称酸枣(Zizyphus jujubavar.Spinosa)。2材料类别沂河岸堤自然生长的野生植株上的嫩芽。3培养条件诱导愈伤组织培养基:(1)MS+6-BA2mg·L’(单位下同)+NAA0.1;(2)MS+6-BA2+NAA0.2;(3)MS+6.BA2+NAA0.4;(4)MS+6.BA2+NAA1;(5)MS+6.BA2+NAA0.01;(6)MS+6.BA2+NAA0.05;(7)MS+6-BAI+NAA0.5。芽分化培养基:(8)MS+6-BAI;(9)MS+6-BA2;(… 相似文献