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阳离子脂质体介导基因转染的最优化条件 总被引:10,自引:0,他引:10
阳离子脂质体介导基因转染的最优化条件王瓞林其谁(中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海200031)关键词阳离子脂质体基因转染表达真核细胞阳离子脂质体转染的重要参数有:脂质体浓度和DNA的浓度、细胞密度以及脂质体-DNA复合物与细... 相似文献
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阳离子脂质体与基因转移 总被引:14,自引:0,他引:14
阳离子脂质体是表达带正电的脂南体。它可与带负电的基因(DNA或RNA)形成带正电的脂-基因复合物,此复合物借静电作用吸附于细胞表面,通过与细胞膜融合或细胞内吞而将结合的基因导入细胞,并获得表达。阳离子脂质体转基因的操作简便、重复性好,杂效率高,在基因工程、物种培育和基因治疗研究等方面有广阔的应用前景。 相似文献
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核酸转染技术和阳离子脂质体 总被引:4,自引:0,他引:4
阳离子脂质体介导转染是一种具创新性的、高效的转染技术,并且逐渐成为介导核酸进入真核细胞的标准方法。因此,如果在使用其他的转染手段并不理想时,宜试用阳离子脂质体介导的转染技术。 相似文献
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阳离子脂质体介导基因转染肿瘤细胞 总被引:1,自引:0,他引:1
使用基因转运载体运载肿瘤细胞进行转染是基因治疗的关键环节之一。Lipo-fectamine2000和DOTAP作为商品转染试剂,具有较高的转染效率。为了进一步发掘其作为基因转运载体的应用潜力,该文研究了Lipofectamine2000和DOTAP的粒径、Zeta电位及形态,并分别与绿色荧光蛋白基因(pGFP—N2)、荧光素酶基因(pGL3)结合,形成脂质体/DNA复合物,通过载入人喉癌细胞(Hep-2)和人肺癌细胞(NCI—H460),考察了其转染效率和细胞毒性。结果表明,脂质体Lipofectamine2000与DOTAP都能有效压缩DNA,形成复合物。Lipofectamine2000与DOTAP井目比,转染效率高,与DNA最佳转染比例范围为2:1~4:1。毒性实验显示,在N/P大于3/l时,Lipofectamine2000与DOTAP对癌细胞具有一定的细胞毒性。细胞种类对脂质体的转染效率有很大影响,Lipo—fectamine2000对Hep-2细胞的转染效率比NcI—H460高。 相似文献
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目的:探讨阳离子脂质体法对体外分离培养的Sprague-Dawley(SD )大鼠骨髓来源-血管内皮祖细胞(Bone Marrow-Endothelial progenitorcells,BM-EPCs) 进行基因转染时脂质 体和DNA质粒安全有效的剂量组合.方法:体外分离、培养SD大鼠BM-EPCs ;免疫荧光技术测 定CD34、CD133、Dil-acLDL,对细胞进行鉴定;按照正交设计,用不同水平的脂质体和质粒 pEGFP转染细胞;荧光显微镜下计数阳性转染细胞,计算转染率.结果:SD 大鼠BM-EPCs细胞 表面抗原CD133、CD34呈阳性表达并具有吞噬Dil-acLDL的功能,形态学上两种细胞亚型-早 期及晚期外生EPCs共存于其中.Lipofectamine 2000和pEFGP不同剂量组合均可转染大鼠BM -EPCs,其中脂质体5ìl/质粒8ìg时的转染效率高于二者其它剂量组合(P<0.05). 结论:优化条件后的阳离子脂质体Lipofectamine 2000可安全、有效转染体外分离培养的SD大鼠BM-EPCs. 相似文献
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脂质体介导转染法的原理与应用 总被引:5,自引:0,他引:5
脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层 ,又称为人工生物膜。最初 ,人们只是运用脂质体模拟生物膜 ,研究膜的构造及功能 ,从而发现了膜的融合及内吞作用 ,因而可用作外源物质进入细胞的载体。相对于电穿孔法和磷酸钙共沉淀转染法 ,脂质体介导转染法简便易行 ,成本适中 ,具有较高的转染率和较小的细胞毒性。1 .脂质体的组成和制备1 .1 组成脂质体的脂类 现有的商业化脂质体均为阳离子脂类与中性脂类的复合体 ,如LipofectAMINE、Lipofectin等 ,中性脂类多为二油酰磷脂酰乙醇胺 (DOPE)。其中 ,阳离子脂类… 相似文献
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由于大多数阳离子脂质体在血液中的稳定性差,致使它们进一步运用于基因治疗的潜能没能完全发挥出来。本文阐述了血清因素影响阳离子脂质体转染的机制,阳离子脂质体与网状内皮细胞系统的关系以及目前消除血清影响的一些对策和亟待改进之处。 相似文献
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阳离子脂质体是一种有临床应用潜力的抗肿瘤药物递药系统,助类脂能起到稳定双层膜和降低阳性成分毒性的作用,同时提供阳性类脂的细胞渗透功能。为了进一步发掘助类脂的应用潜力,该文采用胆固醇(cholesterol)作为助类脂制备阳离子脂质体,测定了脂质体的粒径及Zeta电位,脂质体的平均粒径为100~140 nm,Zeta电位为45~60 mV。脂质体分别与绿色荧光蛋白基因(pGFP-N2)、荧光素酶基因(pGL3)结合,形成脂质体/DNA复合物,通过载入人喉癌细胞(Hep-2),考察了其转染效率和细胞毒性。结果表明,阳离子类脂与胆固醇以1:1、1:2和1:4摩尔比例混合制备脂质体均能高效转染Hep-2细胞。毒性实验显示,阳离子类脂单独存在时对癌细胞具有一定的细胞毒性,随着胆固醇的加入,脂质体对细胞的毒性明显减小,与商品试剂DOTAP和Lipofectamine 2000相当。 相似文献
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阳离子脂质体转染人类骨骼肌原代细胞的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨不同脂质体介导基因转染人类骨骼肌原代细胞的转染效率和基因的表达.将含有β-半乳糖苷酶LacZ结构基因的质粒,用三种不同的阳离子脂质体导入人类骨骼肌原代细胞中,通过X-Gal染色观察不同的转染效率.结果发现,Fugene 6转染效率最高,蓝染细胞达10%,其脂质体与DNA的最佳比例为3∶ 2.Fugene 6可有效地将外源基因导入骨骼肌原代细胞,而且外源基因可以长效高效地表达,有望用来作为基因治疗的载体. 相似文献
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SA脂质体—高效介导DNA转染的新试剂 总被引:11,自引:2,他引:11
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SA脂质体介导DNA转染细胞的进一步研究 总被引:3,自引:0,他引:3
SA脂质体可高效介导DNA转染CV-1细胞,本文进步研究表明,SA脂质体还可介导DNA高效瞬时和稳定地转染CHO和COS细胞。SA脂质体和DNA形成复合物可保护DAN不被核酸内切酶和DNaseI降解。荧光标记和细胞松驰素B抑制实验分别表明,SA脂质体易被细胞吸附,主要通过内吞传送DNA进入细胞,而Lipofectin主要通过融合传送DNA进细胞。 相似文献
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通过改变转染试剂及DNA用量和转染时间等影响转染效率的重要因素来实现阳离子脂质体lipofectamineTM2000(lipo2000)对PC12细胞的高效转染.结果表明,lipo2000转染PC12细胞的最佳转染条件:lipo2000用量为5μL,DNA 2μg,转染时间为6 h,这种条件下的PC12细胞转染率高达40%,且未影响细胞的正常分泌,这为应用PC12细胞进行神经生物学研究提供了基础资料. 相似文献
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用于转基因的阳离子脂质体 总被引:1,自引:0,他引:1
通过直接导入外源基因来治疗人类疾病的方法需要一种有效、安全并且可重复进行的载体,阳离子脂质体是基本满足这些条件的有限几种载体中的一员. 目前已经有十几种阳离子脂质体. 这些脂质体通过外周的电荷与DNA相结合,静电吸引形成复合物在与细胞膜相互作用后,通过细胞的内吞或融合作用使复合物进入细胞内,从而将外源基因导入细胞,这种DNA传递技术的有效性和安全性已经确立. 二例利用阳离子脂质体的人体基因治疗临床试验也已开始实施,将来会有更多的临床试验得到开展,阳离子脂质体在基因治疗领域有较好的前景. 相似文献
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目的:合成一种高效、低毒的新型阳离子聚合物载体。方法:以低分子量的聚乙烯亚胺(PEI)为阳离子聚合物的基本单位,以可水解的2,4-戊二醇二丙烯酸盐(PODOA)为交联剂,合成高分子聚合物。用DNA凝胶迟滞实验验证聚合物与DNA的亲和力,以绿色荧光蛋白基因和萤光素酶检测其基因转染效率,用聚合物凝胶电泳实验鉴定其降解性,以MTT法检测其细胞毒性。结果:聚合物具有高的DNA结合亲和力、高基因转染效率,基因转染后的萤光素酶活性高达3×10^9RLU/mg,其基因转染效率相当于甚至优于目前市售的转染试剂,而细胞毒性明显低于其他试剂。该聚合物在中性环境下可降解,而在酸性条件下非常稳定。结论:合成的聚合物具有高转染效率和低细胞毒性,可能在转染和基因治疗研究中起重要作用。 相似文献