神经酰胺：细胞凋亡信号转号的第二信使分子

神经酰胺是细胞凋亡信号调控中的一个第二信使因子,许多应激刺激能激活神经鞘磷脂循环产生神经酰胺诱导多种细胞体系发生凋亡。神经酰胺介导细胞凋亡的机理尚未完全明了,可能是通过多个下游靶分子包括ＣＡＰＫ,ＣＡＫＫ,ＰＫＣ,ＳＡＰＫ／ＪＮＫ,ＣＰＰ３２,Ｂｃｌ－２以及Ｒａｓ－ＲａｃｌＪＮＫ／ｐ３８－Ｋ→ＧＡＤＤ１５３信号传导链等作用于不同的信号转导途径而诱导细胞凋亡的。     

JNK／SAPK信号传递途径与细胞应激反应

ｃ－ＪｕｎＮＨ２－末端激酶（ＪＮＫ）又称为应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）,是有丝分裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）家族成员之一。大量研究证实,ＪＮＫ／ＳＡＰＫ信号传递途径在细胞应激反应中起重要作用。ＪＮＫ／ＳＡＰＫ信号传递途径的激活促进细胞凋亡发生,其机制与诱导ＦａｓＬ表达、调控凋亡相关基因差异表达和改变细胞内Ｃａ＾２＋环境与激活ｃａｓｐａｓｅｓ家族在关。在某些情况下,ＪＮＫ／ＳＡＰＫ信号传递途径的激活     

神经酰胺诱导药物敏感型和耐药型细胞凋亡机制的探讨

以药物敏感型细胞株Ｋ５６２／Ｓ和耐药型细胞株Ｋ５６２／Ａ０２为对象．观察原癌基因Ｂｃｌ－２的表达量在两种细胞中的差异,以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力,并利用酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,酪氨酸磷酸酯酶抑制剂ｖａｎａｄａｔｅ,观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系．结果显示：在Ｋ５６２／Ａ０２中Ｂｃｌ－２的表达量明显高于Ｋ５６２／Ｓ;外源性神经酰胺能成功地诱导Ｋ５６２／Ｓ,Ｋ５６２／Ａ０２细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的形态学改变和ＤＮＡ“Ｌａｄｄｅｒ”形成,ＦＣＭ检测出现凋亡细胞峰,但在同样的诱导条件下,Ｋ５６２／Ｓ细胞凋亡明显高于Ｋ５６２／Ａ０２细胞．ＦＣＭ检测ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能显著改变这两种细胞生长周期,但细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期,便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用,ｖａｎａｄａｔｅ单独对细胞地明显作用,但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率．以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Ｂｃｌ－２基因起重要作用,神经酰胺能诱导Ｋ５６２／Ｓ和Ｋ５６２／Ａ０２细胞调亡．     

细胞内信号传递与转录调控的研究进展

综合近年来有关细胞内信号传递与转录调控的研究进展,总结出３个细胞内信号传递系统－ＭＡＰ激酶途径、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ途径和ＮＫ－ｋＢ途径,细胞外信号分别通过以上３种途径,在细胞核、细胞膜、细胞浆中激活转录因子,调控基因表达,其中可逆性磷酸化对转录因子活性的调节起着重要的作用。     

核受体辅助因子及其信号转导

类固醇激素、核受体及其辅助因子在细胞增殖、分化中起重要的作用。核受体与相应的配体结合后同细胞内的辅助激活因子ＣＢＰ／Ｐ３００、ＰＣＡＦ、Ｐ／ＣＩＰ和ＳＲＣ家族等结合形成的复合物能使组蛋白乙酰化促进基因的转录,当缺乏配体时核受体同辅助抑制因子ＳＭＲＩ、mSin3A及ＨＡＤ１具有很强的结合力使组蛋白去乙酰化抑制基因的转录活性。ＭＡＰＫ、ＰＫＡ、ＡＰ－１、Ｓap-a、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＪＡＫ信号传导中核受体辅助因子参与信号传导过程影响基础的转录。     

嗜冷细菌弧菌菌株ABE—1中呼吸作用依赖性钠泵偶联位点

嗜冷细菌弧菌菌株ＡＢＥ－１中呼吸作用依赖性钠泵偶联位点ＹＡＳＵＨＩＲＯＴＡＫＡＤＡ．ＮＯＲＩＹＵＫＩＦＵＫＵＮＡＧＡ．ＡＮＤＳＨＯＪＩＳＡＳＡＫＩ研究了嗜冷细菌弧菌菌株ＡＢＺ－１呼吸作用依赖性原钠泵与呼吸链的偶联位点。几种抑制实验表明由呼吸作用依赖性...     

N_2和NH_4~＋培养下粪产碱菌固氮酶铁蛋白圆二色谱及热力学特性比较

Ｎ２和ＮＨ培养下粪产碱菌固氮酶铁蛋白（分别为Ａｆ２和Ａｆ＊２）的氧化态和还原态的ＣＤ谱及ＭＣＤ谱存在明显差异。还原态Ａｆ２与Ａｆ＊２在２１０ｎｍ附近的ＭＣＤ谱完全不同,但它们的氧化态ＭＣＤ谱相同。热力学测定结果表明．在２９８°Ｋ,１．０１３×１０５Ｐａ下,Ａｆ２与ＭｇＡＴＰ饱合络合时的培（△Ｈ°）变化为－２７．０ｋＪ／ｍｏｌ,自由能（△Ｇ°）变化则为－２０．８ｋＪ／ｍｏｌ．熵（△Ｓ°）变４也为－２０．６Ｊｍｏｌ－１Ｋ－１。而Ａｆ＊２与ＭｇＡＴＰ饱合络合时的烂变化为－４４．３５ｋＪ／ｍｏｌ,自由能变化为一２０．４ｋＪ／ｍｏｌ,熵变化为－７９．９Ｊｍｏｌ－１Ｋ－１。Ａｆ２与ＭｇＡＴＰ络合后再与Ｎ２培养的钼铁蛋白反应为吸热反应,而Ａｆ＊２与ＭｇＡＴＰ络合后再与ＮＨ培养的钼铁蛋白反应为放热反应。     

用pKKH质粒在大肠杆菌中表达HuIFN－β

应用ＤＮＡ重组技术,将ＨｕＩＦＮ－β基因插入到质粒ｐＫＫＨ的ｔａｃ启动子下游,转化大肠杆菌ＪＭ１０１和ＪＭ１０３,经ＩＰＴＧ诱导,表达ＨｕＩＦＮ－β,收集并裂解细菌,用Ｗｉｓｈ－ＶＳＶ系统细胞病变抑制法检测生物学活性为２．１８×１０８－８．７×１０８ＩＵ／Ｌ菌液。经初步纯化ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳可见分子量为２０ＫＤ较纯的表达带。     

MAPK信号转导通路对炎证反应的调控

丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｈｅｎ－ａｃｔｅｖａｔｃｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓａ,ＭＡＰＫ）是生物体内重要的信号转导系统之一,参与介导生长、发育、化裂、分化、死亡以及细胞间的功能同步等多种细胞过程,在哺乳动物细胞中已发现和克隆了ＥＲＫ、ＪＮＫ／ＳＡＰＫ、ｐ３８／ＲＫ、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１四个ＭＡＰＫ亚族。这些ＭＡＰＫ能被多种炎性刺激所激活,并对炎症的发生、发展起生重要调控作用。研究感染和炎症反应     

佛波酯诱导内皮素和FOS／JUN基因在血管内皮细胞中的表达及AP－1结合活性

佛波酯诱导内皮素和ＦＯＳ／ＪＵＮ基因在血管内皮细胞中的表达及ＡＰ－１结合活性温进坤,魏素珍（河北医学院生化教研室,石家庄０５００１７）张晨晖,姚阿卿,周爱儒,汤健（北京医科大学心血管基础研究所,北京,１０００８３）关键词内皮素基因表达;ＡＰ－１转录因...     

P物质对大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸激活的氯电流的调控

采用制霉菌素穿孔膜片箍技术,研究了Ｐ物质对急性分离的大鼠骶髓后的核神经元士的宁敏感性甘氨酸反应的调控作用。在箍制电压为－４０ｍＶ时,ＳＰ时１ｍｍｏｌ／Ｌ－１μｍｏｌ／Ｌ之间呈浓度依赖性地增强３０μｍｏｌ／Ｌ甘氨酸激活的氯电流。ＳＰ既不改变ＩＧｌｙ的翻转电位,也不是影响Ｇｌｙ与其受体的亲和力。Ｓｐａｎｔｉｄｅ和选择性Ｎ中受体拮抗剂,Ｌ－６６８,１６９,可阻断ＳＰ的增强作用,而选择性ＮＫ２受体拮抗剂,     

应用Dot—ELISA检测PVX,PVY和PVS

以ＮＣＭ为固相载体、应用间接ＥＬＩＳＡ法测定了纯化的ＰＶＸ、ＰＶＹ和ＰＶＳ;对接种的烟草,马铃薯块茎的芽、休眠块茎顶端的稀释度ＰＶＸ分别为：１／２０４８０－１／８１９２０、１／５１２０;ＰＶＹ分别为１／８１９２０、１／２０４８０和１／５１２０;ＰＶＳ分别为１／８１９２０－１／３２７６８０、１／２０４８０－１／８１９２０和１／５１２０－１／２０４８０,和Ｃｏｃｋｔａｉｌ－ＥＬＩＳＡ相关,检测ＰＶＸ和     

大肠杆菌精氨酰－tRNA合成酶变种ArgRS381KA的基本性质

本文研究了Ｌｙｓ３８１变为Ａｌａ的精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）变种ＡｒｇＲＳ３８１ＫＡ的最适ｐＨ和稳态动力学性质;比较了此酶与天然酶ＡｒｇＲＳ的荧光光谱性质和热稳定性。实验结果表明ＡｒｇＲＳ３８１ＫＡ的氨酰化活力和ＡＴＰ￣ＰＰｉ交换活力的最适ｐＨ分别为８．０和７．０,与天然酶相同;ＡｒｇＲＳ３８１ＫＡ的氨酰化活力对精氨酸、ＡＴＰ和ｔＲＮＡＡｒｇ的Ｋｍ分别为１２μｍｏｌ／Ｌ、０．３ｍｍｏｌ／Ｌ和１．１μｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为１６０００Ｕ／ｍｇ,ｋｃａｔ为１６ｓ－１;ＡＴＰ￣ＰＰｉ交换活力对精氨酸、ＡＴＰ和ＰＰｉ的Ｋｍ分别为９２．９μｍｏｌ／Ｌ、０．８５ｍｍｏｌ／Ｌ和８０．１μｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为２８０００～３００００Ｕ／ｍｇ,ｋｃａｔ为３２ｓ－１．ＡｒｇＲＳ３８１ＫＡ的荧光激发光谱和发射光谱与ＡｒｇＲＳ基本相同。热失活速度比天然酶慢。     

大肠杆菌精氨酰－tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化和基本性质

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力的最适ｐＨ分别为ｐＨ８．３和ｐＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别为２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．０μｍｏｌ／Ｌ：Ｖｍａｘ为７６３０单位／毫克;ｋｏａｔ为９Ｓ－１。ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力对ＡＴＰ和Ａｒｇ的Ｋｍ分别为８．３ｍｍｏｌ／Ｌ和９９μｍｏｌ／Ｌ;Ｖｍａｘ为１６３２０单位／毫克;ｋｃａｔ为１８Ｓ－１。     

黄芪多糖和白细胞介素2对LAK细胞毒活性的调节作用

采用扶正中药黄芪的有效成分黄芪多糖（ＡＰＳ）和不同来源的白细胞介素２的伍用,探讨其对ＬＡＫ细胞毒性的调节作用,乳酸脱氢酶释放法（ＬＤＨ）测定ＬＡＫ细胞毒性的实验结果表明：ＡＰＳ自身具有增强ＬＡＫ细胞毒性的作用,有效剂量范围为１μｇ／ｍｌ￣１００μｇ／ｍｌ;ＬＡＫ细胞发挥细胞毒活性伍用一定剂量的白细胞介素２;ＡＰＳ（１０μｇ／ｍｌ）和ＩＬ－２（５００μ／ｍｌ）对ＬＡＫ细胞毒性具有非常显著的协同增强作     

新麦草的组织培养及染色体分析

新麦草的组织培养及染色体分析孙震晓,夏光敏,陈惠民（山东大学生物系．济南２５０１００）ＴＩＳＳＵＥＣＵＬＴＵＲＥＡＮＤＣＨＲＯＭＯＭＥＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＰｓＡＴＨＹＲＯＳＡＣＨＹＳＪＵＮＣＥＡ（ＦＩＳＣＨ．）ＮＥＶＳＫＩｓｕｎＺｈｅｎ－ｘｉａｏ;ｘ...     

凝血酶激活的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的构建、表达、纯化和性质研究

用Ｋｕｎｋｅｌ突变法,将单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｃｕ－ＰＡ）ｃＤＮＡ基因中编码Ｐｒｏ１５５—Ｌｙｓ１５８的片段定点突变,并将此突变的ｓｃｕ－ＰＡ（ｔｓｃｕ－ＰＡ）的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｎｅｏ中,与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞．获得的稳定表达株在无血清培养基中２４ｈ的表达量为６２０ＩＵ／１０６细胞．经锌离子螯合Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析得到ｔｓｃｕ－ＰＡ纯品．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ｔｓｃｕ－ＰＡ分子量为５３ｋＤ左右,与预期的结果相符．ｔｓｃｕ－ＰＡ是由凝血酶激活而不是由纤溶酶激活,但激活后也能转变为双链分子（ｔｃｕ－ＰＡ）．ｔｓｃｕ－ＰＡ仍保持了ｓｃｕ－ＰＡ的血纤维蛋白亲和性．酶动力学研究表明,激活后的ｔｓｃｕ－ＰＡ水解Ｓ２４４４的Ｋｍ和Ｋｃａｔ值与高分子量尿激酶（ＨＵＫ）相似．体外溶栓实验结果表明,ｔｓｃｕ－ＰＡ可以选择性地溶解富含凝血酶的血凝块,对贫凝血酶的血凝块作用不大     

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对BAEE的降解

以苯甲酰－Ｌ－精氨酸乙酯（ｂｅｎｚｏｙｌ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ,ＢＡＥＥ）为底物,研究了蚯蚓体内纤溶酶原激活剂（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｆｒｏｍＥｉｓｅｎｉａｆｅｔｉｄａ,ｅ－ＰＡ）的酶学性质．酶促反应的最适ｐＨ为８．４,ｅ－ＰＡ降解ＢＡＥＥ的Ｋｍ为１．２４±０．１６×１０－５ｍｏｌ／Ｌ,Ｋｃａｔ为１３．８０±４．０２ｓ－１．测定了构成ｅ－ＰＡ的大,小亚基分别降解ＢＡＥＥ的Ｋｍ和Ｋｃａｔ．结果表明,大亚基的Ｋｍ与全酶的Ｋｍ相差不多,但比小亚基小约１０倍,即对底物的亲和力比小亚基强约一个数量级．大小亚基的Ｋｃａｔ比较接近,分别是全酶的１／６和１／３．研究了８种抑制剂对ｅ－ＰＡ降解ＢＡＥＥ活性的影响,其中ｐｅｐｓｔａｔｉｎ和Ｅ－６４（一种巯基抑制剂）对酶促反应有激活作用,ＴＰＣＫ,ＴＬ－ＣＫ,ＰＭＳＦ,ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ和ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ对其有不同程度的抑制作用,ＥＤＴＡ对ｅ－ＰＡ的活性没有影响．对ｅ－ＰＡ的ＢＡＥＥ活性和ｅ－ＰＡ的纤溶活性之间作了比较．     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最适温度为４０℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂,ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断,结果表明,ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂,其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ;ＤＦＰ为非竞争性抑制剂,抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

新疆阿尔泰山驼鹿的初步考察

新疆阿尔泰山驼鹿的初步考察ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＩＮＳＰＥＣＴＩＯＮＯＮＴＨＥＥＬＫ（ＡＬＣＥＳＡＬＣＥＳ）ＩＮＸＩＮＪＩＡＮＧＡＬＴＡＩＭＯＵＮＴＡＩＮＫｅｙｗｏｒｄｓＸｉｎｊｉａｎｇ;Ｅｌｋ（Ａｌｃｅｓａｌｃｅｓ）１９９４年７－８月,我们受新疆...