中华绒螯蟹多倍体的诱导研究：Ⅱ热休克诱导中华绒螯蟹三倍体胚胎…

采用热闹休克方法在中华绒螯蟹进行了三倍体、四倍体的人工诱导研究。结果表明,在卵子受精后１０－２５分钟,用３８－４１℃的高温处理１－２分钟三倍体的平均诱导率为１０－５０％,则对受精后３０分钟的卵子进行了诱导,或在４０℃下处理超过２．５分和处理温度高于４２℃诱导１．５分钟的各试验组,均未检测到有三倍体胚胎。依据诱导三倍体的适宜诱导温度和处理时间,将受精后８１／２－９５／６小时的卵子用４０℃热休克处理１     

咖啡因加热休克诱导皱纹盘鲍多倍体的研究

报道了用咖啡因加热休克抑制受精卵的第一极体的释放诱导皱纹盘鲍（Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｄｉｓｃｕｓ ｈａｎｎａｉ Ｉｎｏ）多倍体的研究结果。皱纹盘鲍的卵在２１℃海水中受精,受精后１０分钟开始处理,药物浓度分别为２．５ｍｍｏｌ／Ｌ、５ｍｍｏｌ／Ｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ,热休克温度分别为２４℃、２６℃、２８℃,处理的持续时间为１０分钟至３０分钟,共分５个时间段。结果表明,药物浓度５ｍｍｏｌ／Ｌ和１０ｍｍｏｌ／Ｌ     

罗氏沼虾四倍体诱导的研究

对罗氏沼虾卵子极体排出时间和第一次卵裂时间进行了观察,并在此基础上,采用热休克和细胞松弛素 B(C,B)两种诱导方法成功诱导出了罗氏沼虾四倍体。石蜡切片显示,当罗氏沼虾卵子完全成熟时,第一极体已经 排出。第二极体排出的时间约在受精后55min。经过雌性原核和雄性原核的联会,第一次卵裂的时间约在受精后 210-230min。设计了多种处理条件,其中热休克诱导罗氏沼虾四倍体的最好条件是:受精后210min,用40℃水温处 理胚胎1．5min,在这种条件下,最高可以得到35．86％的四倍体率;而C．B诱导罗氏沼虾四倍体的最好条件是:受精 后230min,用1．0mg/L的C．B处理胚胎10min,此时最高四倍体诱导率达33．78％。     

静水压休克诱导水晶彩鲫三倍体和四倍体的细胞学机理初探

本文分析了静水压休克诱导水晶彩鲫三倍体和四倍体的细胞学机理,促使第二极体保留的压力敏感期较短,在卵子第二次成熟分裂中后期的某段时间,也就是受精后４－５ｍｉｎ时;而在这之前,为卵子启动期,施加压力会破坏卵子的激动和修整过程,造成发育受阻;其后,为压力不应期,此时第二次成熟分裂态势也趋明朗,压力对保留第二极体失去作用。本文还对促使第二极体保留生产鱼类三倍体和抑制第一次卵裂诱导鱼类四倍体的条件等问题进行     

秦艽体细胞愈伤组织诱导及继代研究

本文报道了秦艽取叶、幼苗为外植体诱导愈伤组织试验。结果表明,取幼苗６７－Ⅴ培养基,２４－Ｄ２５ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,诱导频率最优,可高达１００％。继代培养,以６７％培养基,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,２４－Ｄ（１－１５）ｍｇ／Ｌ最优     

热休克诱导鳙鱼四倍体的研究

采用热休克法研究了诱导鳙鱼四倍体的可能性和处理条件。结果表明:1)恰好在卵子开始第一次卵裂前用39—42℃水浴处理1—3分钟,可获得较高频率的四倍体;2)开始处理的时间至关重要,提前或推迟处理导致几乎全部死亡或四倍体频率大大下阵;3)热休克组的孵化率显著下降,畸形率明显升高;4)含高频率四倍体的热休克组的细胞分裂和胚胎发育延迟。     

梯度磁场对冬小麦种子萌发影响的研究

用梯度磁场处理 Ｂ７３、３３３８、品 ９ 和二粒燕冬小麦种子,结果表明,各品种处理 ４ 分钟时,品 ９、二粒燕的发芽势比对照平均高 １０２％ 、９７％ 和 ５６％ 、５８％ ;而 Ｂ７３、３３３８ 则比对照平均低 ６２％ 、５８％ 和１２１％ 、１４５％ 。同时发现,对同一品种处理不同时间时,其发芽势和发芽率不同,对３３３８ 而言,处理 ２ 分钟比处理 １ 分钟和８ 分钟高,对于品 ９ 则处理４ 分钟比处理 １ 分钟和 ２ 分钟高。结果还表明,处理 １、２、４ 分钟的各品种种子浸泡液的电导率比对照都高,而处理 ８ 分钟,各品种的电导率稍低于或接近对照     

九孔鲍四倍体诱导的研究

采用二倍体鲍卵子,抑制其第一极体、抑制其第一极体和第二极体诱导四倍体,用三倍体鲍卵子与普通鲍精子受精并抑制其第一极体,以及用三倍体鲍的其它方法诱导四倍体。用倍体分析仪检测DNA相对含量以判别其倍性。实验结果,先后共培育出存活的四倍体鲍239个,个体大小为2.5～6.0cm;挑选性腺发育较好的四倍体鲍(包括雌雄),与普通鲍杂交繁育三倍体,先后共培育出10批次,培育出的苗量共计15.8万个。     

细胞松弛素B对日本沼虾四倍体的适宜诱导条件的研究

本文研究了用细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导日本沼虾(Macrobrachium nipponense)多倍体的处理条件和方法。试验水温分别为18—19℃、22—23℃,CB浓度为1.0—2.0mg/L,处理的起始时间在受精后5—9h,处理的持续时间为10—20min。结果表明,在水温为18—19℃时,四倍体卵子的最适诱导条件为:受精后7—8h,CB溶液的浓度1.5mg/L,处理20min,四倍体诱导率最高可达56.1%;在水温为22—23℃时,最适诱导条件为:在受精后6 h左右,CB溶液浓度为1.5mg/L,处理15—20min,四倍体诱导率最高可达54.3%。处理的起始时间和CB溶液的浓度对胚胎的四倍体率有显著影响(P<0.05);胚胎的成活率随CB浓度的提高与处理的持续时间的延长而下降。考虑到胚胎成活率因素,建议选择CB浓度为1.5mg/L,处理持续时间15—20min。     

人工诱导兴国红鲤三倍体最佳诱导条件的研究

采用冷休克处理兴国红鲤受精卵诱导产生三倍体鱼 ,初步探讨了获得三倍体兴国红鲤的最佳诱导条件 ,即最恰当的诱导温度 ,最恰当的诱导起始时间 ,最恰当的冷休克处理时间。结果表明 ,在人工授精后 5～ 8min ,将受精卵置于 0～ 2℃的冰水中冷休克处理 1 0～ 1 5min ,再迅速回温至正常水温 ( 2 0～ 2 5℃ )的水中发育 ,可以获得 ( 70± 5) %的三倍体兴国红鲤胚胎 ,孵化率为 50 %～ 70 % ,成活率可达 4 0 %～50 %以上 ,此为采用冷休克技术人工诱导兴国红鲤三倍体的最佳条件。     

鱼类染色体组操作的研究 Ⅱ.静水压处理和静水压与冷休克结合处理诱导水晶彩鲫四倍体

采用静水压处理和静水压与冷休克结合处理两种方法进行了抑制第一次卵裂诱导水晶彩鲫四倍体的研究。水晶彩鯽受精卵在受精后(发育水温14—15℃)50、54、55和60min时的静水压(650kg/cm~2)处理(3min)组中都出现了四倍化胚胎,而在受精后48和48min以前的相同处理组中都没有观察到四倍化胚胎。在受精后(发育水温16-18℃)48、50、52、55、56和60min时的静水压与冷休克结合处理组中,也都出现了四倍化胚胎,且四倍化率比仅用静水压处理高,但存活率更低。在经过处理而发育形成的胚胎中,既有四倍体、次四倍体和4n/2n嵌合体,也有二倍体和次二倍体,并在一些次二倍体和次四倍体中期相中还观察到休克处理致使染色体断裂的痕迹——染色体片段。在抑制卵裂诱发加倍的效应期内,可能存在瞬间对休克耐受性较强的时期,而在此前后,对休克更为敏感。在少数处理组中,已筛选出了数尾四倍体鱼。文中还对鱼类四倍体的诱导技术、抑制卵裂诱发染色体组加倍的效应期以及四倍化胚胎的存活率和生命力等有关问题进行了分析和讨论。     

墨兰及其杂种的组织培养与快速繁殖

针对墨兰及其杂种常规分株繁殖慢、种子在自然状况下极难萌发的情况,以仙殿白墨及其它与象牙白、西藏虎头兰杂交所得的杂种的胚,仙殿白墨与其杂种Ｆ１代的茎尖、花芽、幼叶、根进行离体培养。结果表明,胚培养以１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋１０％椰子汁培养基萌发效果较好,发育到一定时期的早期胚即能萌发;茎尖、花芽培养在ＭＳ＋６－ＢＡ０５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ＋０５％活性炭培养基上诱导原球茎比较适合,根与幼叶离体培养未诱导出原球茎;根状茎增殖在以花宝一号、花宝二号、蛋白胨等为主要原料并附加０５％活性炭的自制Ｇ３培养基上长得粗壮且繁殖速度快;根状茎出芽诱导在Ｂ５＋６－ＢＡ２～３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０２ｍｇ／Ｌ＋０５％活性炭培养基上效果最好;生根壮苗以１／２ＭＳ＋ＮＡＡ２０ｍｇ／Ｌ＋１０％苹果汁＋１０％香蕉汁＋１０％活性炭培养基能达到较理想的效果;蔗糖浓度生根培养时以２％较佳,其它培养以３％较好。仙殿白墨杂交种的胚萌发率比仙殿白墨略低,萌发期略长;但其花芽与茎尖的原球茎诱导、根状体增殖、根状茎出芽、生根壮苗培养、生长势、抗逆性等方面均具有杂种优势。     

鸡胚血液中原始生殖细胞的分离及其培养的研究

从孵化４８～５５小时鸡胚中抽取血液,每只胚胎可获血液２～６μｌ左右。一步法离心分离原始生殖细胞,可使其浓度由０．１％以下提高到５０％以上。将多余血细胞用微量吸管移走后,加入添加１０％胎牛血清的ＴＣＭ—１９９做为培养基,３７．５℃,５％ＣＯ２,９５％空气,饱和湿度下培养,原始生殖细胞可成活２４小时左右。     

中国对虾卵子活化及卵裂的激光扫描共聚焦显微镜研究(英文)

有报导,与其它动物不同,对虾的卵子一接触海水、不经过受精,就可以被活化。但是,只有受精卵才能卵裂发育。而且,各种对虾卵子内皮质棒及皮层颗粒的形态结构、活化过程各有不同。本文就中国对虾卵子的活化及卵裂过程进行了激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）研究。该技术可以清晰地显示细胞的立体图像。采集中国对虾,人工诱导产卵,未受精卵取自产卵虾体内,受精卵分期分批取样,固定。供试样品经ＰＢＳ漂洗,ＡＯ、ＦＩＴＣ和ＰＩ染色,ＬＳＣＭ观察、图像处理。刚产出的、未活化卵子形态不规则,皮层内富含皮质棒和皮层颗粒（Ｆｉｇ１）。不论受精与否,产入海水的卵子都能被激活并恢复减数分裂。活化后的卵子释放出皮层囊泡内的皮质棒（Ｆｉｇｓ２＆３）。释放出的皮质棒转变为均质的胶质层（Ｆｉｇｓ４＆５）。随后,皮层颗粒释放并在卵子表面转化为均质化的孵化膜。卵子开始举起,与孵化膜之间形成卵周隙。卵周隙内具有絮状物质（Ｆｉｇｓ６,７＆８）。卵子产出后笫８～１０ｍｉｎ,经过减数分裂,第一极体排放,并随着孵化膜的举起而被推向卵外（Ｆｉｇ５）。笫２０ｍｉｎ,第二极体排放,并由卵子表面到达孵化膜的内缘（Ｆｉｇ６）。在２０℃水温条件下,受精卵产入海水中６０     

低温保存的小鼠卵母细胞的体外授精研究

采用75分钟和150分钟两种精卵作用时间,对经6℃低温处理2小时和6小时的小鼠卵母细胞进行体外受精。精卵作用75分钟后,经6℃处理的卵子无一受精,而对照组的受精率为30.7％。作用150分钟后,低温处理2小时、6小时和对照组的受精率分别为62.0％,36.55％和76.0％。并对试验所出现的现象作了讨论。     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４－２产脂肪酶活力为５９６ｕ／ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ）为：糊精１０、黄豆饼粉３０、尿素１０、Ｋ２ＨＰＯ４０．５、ＭｇＳＯ４０．５、ＮａＣｌ１和ＡＥＯ９０．５,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９．５～１０．０,在２６℃培养４８ｈ。用ＰＶＡ橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９．８,最适温度３７℃,在ｐＨ８．６～１０．２于５℃存放２４ｈ,酶活力不变。０．１４ｍｏｌ／Ｌ的氯     

鱼类染色体组操作的研究 Ⅰ.静水压休克诱导三倍体水晶彩鲫

采用静水压休克方法研究了促使第二极体保留诱发三倍体水晶彩鲫的最佳条件。在卵受精后4—5min采用600kg/cm~2或650kg/cm~2的静水压处理3min,不但能导致100％的三倍化,而且胚胎的存活率相当高,孵化率为对照组的90％左右。研究表明,静水压休克是进行鱼类染色体组操作的有效方法,休克的最佳条件易于掌握,处理程序易于标准化。文中讨论了静水压处理的条件与三倍体出现率和胚胎存活率的关系,以及最佳条件下和不适条件下胚胎死亡的原因。     

兔受精卵显微注射外源基因后体外培养的卵裂发育

从超数排卵的１４只母兔获得４３８枚受精卵,卵龄１６～２２小时．显微操作在带微分干涉和相差的Ｎｉｋｏｎ倒置显微镜下进行．注射针的尖端外也０．５μｍ,离尖端４０和８０μｍ处的外径分别为４．２和６．５μｍ．注射用外源基因是绵羊生长激素基因与ＭＴ－１启动基因藕连的线状ＤＮＡ溶液（１ｎｇ／μｌ）．１４０枚注射的受精卵和未注射的１４５枚受精卵（对照）,在Ｈａｍ’ｓＦ—１０培养液（补充生长因子）中培养（３８℃,５％的ＣＯ２）．结果,培养４８小时后,注射组卵裂发育率分别是：未卵裂７．９％（１１／１４０）、卵裂至２～４细胞期１１．０％（１６／１４０）、卵裂至８～１６细胞期８０．７％（１１３／１４０）．对照组相应的卵裂率分别是４．１％（６／１４５）、１２．４％（１８／１４５）和８３．４％（１２１／１４５）．两组卵裂发育率相近．本实验的显微操作对注射后卵的发育没有产生明显的伤害影响．     

普通小麦与鸭茅状摩擦禾的远缘杂交 Ⅲ受精和早期胚胎的发育

用石蜡制片法和整体解剖法,对小麦品种Ｆｕｋｕｈｏ经鸭茅状摩擦禾花粉授粉后不同时间固定的子房样品进行了细胞胚胎学观察。结果表明,观察的１６８个授粉后１２０小时（５天）以内的小麦子房中有３２１％、０６％和２６２％分别发生了卵细胞单受精、极核单受精和卵细胞、极核双受精现象。发生卵细胞受精、极核受精和总受精频率分别为５８３％、２６８％和５８９％。对１１６个授粉后９天的小麦子房进行整体解剖,检测到有５００％的子房有幼胚。报道了小麦与鸭茅状摩擦禾杂交的受精过程和早期胚胎发育的情况。为小麦与鸭茅状摩擦禾杂交提供了高频率受精和胚形成的细胞胚胎学证据。     

人工诱导泥鳅雌核发育的细胞学研究和诱导参数优化

为培育泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)全雌品种,研究通过细胞荧光染色后进行细胞学观察确定人工诱导泥鳅雌核发育的热休克起始时间,并进一步利用核型和流式细胞分析等方法对人工诱导雌核发育泥鳅进行鉴定。结果显示,二倍体泥鳅受到灭活的鲤(Cyprinus carpio)精子刺激后,第二极体与卵核分开的时间在人工授精后3—5min;卵子在人工授精后3.5min后再热休克2min的诱导孵化率达到10.26%。通过分析野生型泥鳅胚胎、人工诱导雌核发育泥鳅胚胎、泥鳅×鲤杂交胚胎和单倍体泥鳅胚胎的发育,发现部分雌核发育的胚胎可以正常发育,而杂交胚胎和单倍体胚胎会出现明显的发育障碍。核型和流式细胞检测分析表明利用本研究获得的热休克参数进行处理可得到二倍体雌核发育子代,二倍率达64.71%。研究从细胞学层面获得泥鳅雌核发育的诱导参数,可为利用人工诱导雌核发育开展全雌泥鳅育种提供指导。