单克隆抗体在乙肝病毒研究中的应用

一、已建株的抗乙肝病毒杂交瘤细胞株1975年G.Kohler等用细胞融合方法建立分泌特异抗体的杂交瘤细胞株。随后该项技术广泛用于生物科学的各个领域。八十年代初,Wands J R建立了分泌抗乙肝病毒表面抗原(HB_(?)Ag)单克隆抗体(McA的细胞株。     

抗卵清蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备

为制备分泌抗卵清蛋白的杂交瘤细胞,以高纯度的卵清蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得杂交瘤细胞,用ELISA间接法检测上清液中的抗卵清蛋白抗体效价,经3次单克隆化筛选,获得5株分泌抗卵清蛋白抗体的杂交瘤细胞株。     

分泌抗北京鸭免疫球蛋白单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2(简报)

淋巴细胞杂交瘤技术作为一种新的生物工程技术,已在生物学和医学领域内得到广泛的应用。我们继建立产生抗北京鸭红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系CBH-1后,又建立了一株产生抗北京鸭免疫球蛋白(I_g)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为CBH-2。这种杂交瘤细胞经体外培养,能稳定地分泌抗北京鸭I_g的单克隆抗体。此单克隆抗体在以北京鸭抗体进行放射免疫和酶标等测定时,可用作第二抗体。现将主要结果简报于下。北京鸭I_g抗原的制备及免疫:从北京鸭颈动脉采血,分离血清,用50%和33%硫酸铵沉淀法提取二次。每只Balb/cJ小鼠腹腔免疫剂量为0.3毫克,共免疫三     

大鼠杂交瘤技术及抗HIV、HBsAg大鼠单克隆抗体的制备

在目前制备单克隆抗体的三个主要体系：小鼠、大鼠和人杂交瘤体系中,大鼠系统具有某些特有的优点。本文以制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎表面抗原的大鼠单克隆抗体为例,较详细的介绍了大鼠杂交瘤的特点及大鼠单克隆抗体制备技术。     

抗伏马菌素B_1单克隆重组抗体的筛选

为了克服无功能抗体编码基因及基因重组等因素导致PCR直接从杂交瘤细胞中扩增组装的重组抗体不一定具有活性,分离伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)的特异重组抗体,首先通过杂交瘤技术制备分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,然后构建单克隆重组抗体基因文库,利用噬菌体展示技术筛选抗FB1的重组抗体,并分析比较其亲和力。结果筛选得到的4个杂交瘤细胞株均能够稳定分泌抗FB1单克隆抗体,从抗体基因文库中获得抗FB1的重组抗体FBMH7,分析结果显示其结合能力相对其亲本单克隆抗体降低3.7倍,但仍对FB1抗原具有较高的亲和力(KD=2.00×10-7),为发展伏马菌素的免疫检测技术体系奠定了基础。     

蛇毒类凝血酶鼠单克隆抗体的制备

采用杂交瘤技术,获得了４株稳定分泌抗蛇毒类凝血酶的单克隆抗体杂交瘤细胞株,均属ＩｇＧ１ｋ链,４株杂交瘤细胞培养上清液效价为 ４ × １０－１～４ × １０－２,腹水效价为 ４ × １０－１～３．２ ×１０－５。     

产生抗登革热Ⅰ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用登革热Ⅰ型病毒(夏威夷株)兔疫的小白鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得7个产生抗登革热Ⅰ型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系,这些杂交瘤细胞上清液及小鼠腹水抗体均用间接兔疫荧光法检测,其中3个杂交瘤细胞系产生的抗体对登革热Ⅰ型病毒具有型特异性。     

呼吸道合胞病毒融合抑制活性单克隆抗体的鉴定及应用

用杂交瘤技术制备了抗呼吸道合胞病毒(RSV-Long株)的单克隆抗体F     

抗HBs/y亚型决定簇杂交瘤细胞株建立成功

由中国预防医学中心病毒所、河南省医科所和天津市卫生防疫站组成的肝炎单克隆抗体研制协作组。应用杂交瘤技术建立了两株分泌抗HBs/a及抗HBs/y亚型决定簇的杂交瘤细胞株SH1D 9(抗HBs/a)及SG3B10(抗HBs/y),经4～6次再克隆并传代3～6个月均能稳定地分泌高滴度单克隆抗体,其特异性     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

环磷酸鸟苷(cGMP)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性的鉴定

<正> 自从1975年单克隆抗体技术建立以来,已被应用在各个生物学领域中,国内外都尚未建立抗cGMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。我们为了获得更纯,特异性更高的抗cGMP抗体,对此项工作进行了探索,已筛选出能分泌抗cGMP抗体的杂交瘤细胞株,并进行了初步鉴定;现将工作简报如下: 用琥珀酰环磷酸鸟苷(ScGMP)与牛血清白蛋白相连后的化合物(ScGMP-BSA)为抗原免疫BALB/c小鼠,每月一次,共四次,最后一次为尾静脉连续注射三天,第四天将免疫     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的研制

报告了利用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗呼吸道合胞病毒蛋白的鼠单克隆抗体.     

H18杂交瘤抗凋亡能力的改造

利用PCR从pGEMTbcl-X_L质粒中获得bcl-X_L基因,构建真核表达载体pEF-bcl-X^{L,脂质体法转染杂交瘤细胞,G418筛选稳定表达株,Western blotting检测目的蛋白表达,流式细胞仪检测Bcl-X_L提高杂交瘤抗正丁酸钠诱导凋亡的功能。 将构建的编码鼠bcl-X_L基因的真核表达载体pEF-bcl-X_L,转染H18细胞后,获得稳定的表达株细胞;稳定表达Bcl-X_L的细胞具有抗正丁酸钠诱导凋亡的功能。鼠bcl-X_L基因在杂交瘤细胞中稳定表达,提高了杂交瘤抗凋亡的能力,对高密度大规模培养杂交瘤细胞具有重要意义。}     

抗hAFP单克隆抗体的制备

人甲种胎儿蛋白(hAFP)是一种重要的分化抗原和肿瘤相关抗原,是癌肿早期诊断和胎儿产前诊断中的一个重要标志物。本文应用 B 淋巴细胞杂交瘤技术,将为 hAFP免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与 SP2/O 骨髓瘤细胞通过化学方式融合,从而筛选出稳定分泌抗 hAFP 单克隆抗体的二株杂交瘤细胞株。     

HBV前S2蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达系统中表达,表达产物用谷胱甘肽亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗前S2蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力.结果获得一株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞7A6;相对亲和力均在107以上.Western blot显示该株mAb能特异识别重组前S2蛋白.结论成功地制备出抗HBV前S2蛋白的一株mAb.     

TT病毒重组蛋白单克隆抗体的制备

采用杂交瘤技术,获得了4株稳定分泌抗TTV重组蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,1株属IgG2bλ链、1株属IgG1κ链、2株属IgG2aκ链。4株杂交瘤细胞培养上清液效价为1：80-1：1280,腹水效价为1：32万-1：160万。     

鼠抗衣原体属抗原单克隆抗体的研制

本文利用杂交瘤技术,成功地建立了３株稳定分泌小鼠抗衣原体属脂多糖抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞。实验结果表明,３株单抗均为ＩｇＭ类,特异性强,识别相似抗原位点,为今后的应用打下了基础。     

猪生长激素及其单克隆抗体的制备与纯化

本文介绍一种简便快捷提纯猪生长激素的方法。通过杂交瘤技术,首次获得抗猪生长激素的单克隆抗体,并讨论和比较从腹水纯化单克隆抗体的各种方法。     

人生长分化因子15单克隆抗体制备、鉴定及药用价值初探

目的:制备稳定分泌抗人生长分化因子15(GDF15)单克隆抗体(m Ab)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的m Ab进行鉴定。方法:根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的m Ab,用间接ELISA检测m Ab腹水效价。结果:获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水m Ab效价可达1×104~1×109。结论:获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性m Ab,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。     

建立敏感的抗—HBs免疫分析法

<正>固相放免分析如AUSAB试剂(Abbott实验室)已普遍地用于检测抗-HBs,同时也广泛用于临床作为证实已患过乙型肝炎的检测方法。然而,新研究领域的发展例如:抗-HBs杂交瘤细胞分泌克隆的筛选以及对乙肝疫苗免疫小动物后所得抗血清的分析需要建立一种可靠的免疫分析方法。以便在用大量材料作分析时减少AUSAB的高昂费川。另外,在测定杂交瘤克隆细胞融合后的早期分泌物时需要比AUSAB试剂更敏感的试剂。