符合大肠癌早期无创分子诊断要求的粪便DNA样本贮存条件考察

目的:考察在不同温度下储存时间和反复冻融对粪便中人基因组DNA含量的影响。方法:1.将粪便样本在室温、4℃、-40℃和-70℃条件下分别放置不同时间和-40℃条件下保存并反复冻融后,使用QIAamp DNA Stool Mini Kit试剂盒提取得到粪便DNA,通过实时荧光定量PCR体系对人KRAS基因定量确定人基因组DNA含量,评价粪便样本不同冻存条件对其中人基因组DNA含量的影响。2.将粪便DNA样本在4℃和-40℃条件下分别放置不同时间和-40℃条件下保存并反复冻融后,评价粪便DNA样本不同冻存条件下对其中人基因组DNA含量的影响。结果:1).粪便样本常温放置2小时,其中人基因组DNA即发生明显降解(P0.01),4℃可保存3天左右,-40℃可保存4周,-70℃可保存3个月以上,粪便反复冻融第3次,其中人基因组DNA降解具有统计学意义(P0.05)。2).粪便DNA 4℃可保存3天,-40℃可保存4周,粪便DNA反复冻融第4次,其中人基因组DNA降解具有统计学意义(P0.05)。结论:符合大肠癌早期无创分子诊断要求的粪便DNA贮存条件:粪便样本室温收集后尽快保存;短期可处理的粪便样本存放在4℃条件下(3天内);暂无法处理则存于-40℃(1个月内);粪便样本长期保存在-70℃条件下,可保存3个月。     

雨生红球藻FACHB-712营养细胞和厚壁孢子低温保藏效果及优化

以高产虾青素的雨生红球藻（Haematococcus pluvialis Flotow）FACHB-712藻株为材料,研究2种细胞形态（营养细胞和厚壁孢子）在低温保藏下的复苏率及其差异原因。结果显示,采用两步法（先预冻降温后再投入液氮中）冻存其营养细胞,在不同冻存条件下,其存活率均低于5%,以10%甘油作为保护剂、冻存速率为0.5℃/min、预冻温度为-40℃、保留30 min,然后再投入液氮罐（-196℃）中保藏,其存活率可达到13.3%。采用两步法冻存厚壁孢子,其复苏存活率高达66.13%,复苏萌发后细胞的生长特性、虾青素含量与液氮保藏前无明显差异（P > 0.05）。对液氮保藏前后藻细胞形态和超微结构观察结果表明,超低温保藏后,营养细胞的结构受到较大损伤,而厚壁孢子受到的损伤相对较小。当添加不同保护剂后,直接将厚壁孢子分别冻存在-20℃、-80℃低温及液氮中,发现-80℃低温冻存处理组的复苏存活率相对较高,可达27%。研究表明采用两步法先预冻降温后再投入液氮中冻存厚壁孢子,是长期保藏雨生红球藻FACHB-712的最佳方法,也可采用一步法将厚壁孢子冻存于-80℃冰箱中。     

利用澳洲瓢虫防治吹绵蚧初步研究

利用澳洲瓢虫防治吹绵蚧, 在国外已有70多年的历史, 防治效果显著, 我国引入澳洲瓢虫后, 在防治上亦取得很好的效果。据我们室内饲养结果, 一年发生8代, 完成一世代的历期19-229天, 平均56.26天。每雌虫产卵5—612粒, 平均产卵173.82粒, 卵孵化率为30.55-99.42%。过冬的成虫于3月上旬大量产卵, 3月中旬出现产卵高峰, 第一代成虫于4月下旬出现。澳洲瓢虫在重庆地区防治吹绵蚧的有效期为3-11月。成虫抗药力最强, 卵次之, 幼虫最差。在生物防治区, 当澳洲瓢虫与吹绵蚧的虫口比例为1:15左右时, 经14-20天后, 吹绵蚧便被消灭。从放虫的日期起, 约经55-69天, 可将全国内的吹绵蚧消灭。     

恒河猴(Macaca mulatta)肾细胞冻存复苏培养及其生物学特性的研究

本文使用深低温(-196℃)冻结保存动物细胞技术,对胰酶分散的恒河猴肾细胞的冻存,复苏培养及其生物学特性进行了研究。结果表明、液氮冻存2—58周的恒河猴肾细胞,其平均存活率为63.3—74.4％。复苏培养细胞于6—7天形成緻密单层,对脊髓灰质炎病毒敏感;国产二甲基亚砜可以用作冻存细胞的保护剂;复苏培养的细胞核型正常;其生物学特性与未冻的原代细胞一致。     

马来丝虫幼虫低温保存的初步研究

以5％二甲基亚砜为冷冻保护剂,将马来丝虫微丝蚴置于含20％小牛血清的RPMI-1640保存液内,在低温下(-196℃)保存。经过30—270天,微丝蚴解冻后的存活率为93—98％,大部均可使蚊虫宿主感染,并在终宿主长爪沙鼠体内发育为成虫,在其腹腔液内检获微丝蚴。 同法冻存含马来丝虫感染期幼虫的蚊体,经30、90、及181天后,解冻的蚊体内幼虫,其存活率为46.2—54.4％,90天前大部幼虫可在沙鼠体内发育并产出子代,但冻存180天组似已失去感染性。     

海藻酸盐-淀粉共聚及固定化淀粉用作α-淀粉酶的亲和吸附剂

本文描述了两种分离α-淀粉酶的新颖吸附剂,可用于层析法的固相填充物。第一种吸附剂是海藻酸盐与淀粉的共聚物。当海藻酸盐和淀粉的混合物经CaCl_2的络合作用后,便可使淀粉转化为小珠状吸附剂。由于小珠又与3-氯-1,2—环氧丙烷进行交联作用,以致原先水溶性淀粉变成不溶性。另一种吸附剂是淀粉在海藻酸盐基质中经交联固定化后而     

小村血厉螨Haemolaelaps casalis(Parasitiformes,Gamasoidea)生活史的实验研究

小村血厉螨的生活史分为5期:卵、幼虫、第一期若虫、第二期若虫和成虫。雌螨直接产第一期若虫最多,其次为幼虫,产卵最少。发育所需的时间与温度有关,在15-35℃间温度愈高发育愈速;在25-30℃时,卵期1-2天,幼虫1-2天,第一期若虫4-7天,第二期若虫4-10天,雌螨生殖前期7-14天,自第一期若虫到下一代第一期若虫全部生活史需15-27天。 小村血厉螨雌螨消化血时间的长短与温度及吸血量有关。 当有足够湿度时,耐饿力与温度成反比:30-35℃平均耐饿5周,25-30℃8周,20-25℃11周,15-20℃12周,5-15℃15周。 与其他巢穴型革螨相同,小村血厉螨雌螨的寿命是较长的,当25-30℃时活4-7个月。雌螨一生都进行生殖,可产7-26个后代。在实验情况下雌雄比例是近于3:1。雌螨可以孤雌生殖方法进行繁殖,其后代全部是雄性。 本文比较了小村血厉螨与一系列现有的其他革螨资料,并论述其减少产殖量与减少成虫前期死亡机会的关系。其减少成虫前期死亡机会是以胚胎发育化和缩减摄食营养期数来达到的。     

整肠生同足三里封闭治疗小儿肺炎继发性腹泻31例

整肠生为地衣芽胞杆菌活菌制剂 ,主要作用机制是以菌治菌。笔者针对小儿肺炎继发性腹泻双例足三里注射三氮唑核苷联合用药取得一定效果 ,现报告如下。1　病例　作者自 1998年以来收集 3 1例 ,其中男 18例 ,女 13例 ,年龄 6月～ 3岁 ,平均 2 1月 ,病程 3～ 8d,大便次数 10次左右 ,稀水样 8例 ;大便次数在 6次左右 ,绿色粘冻样 15例 ;大便次数 4次左右 ,蛋花样便 9例。2　治疗效果例 1,患儿 ,男 ,7月 ,因发烧咳嗽 3 d以 11支气管肺炎”于 1998年 6月 7日入院 ,入院时大便正常 ,入院后用头孢拉定 5 d,出现腹泻 ,每日 5～ 6次 ,为粘冻样便 ,大便…     

人外周血淋巴细胞长期冻存后结构和功能的研究

从肝素和 ACD 抗凝血中分离的淋巴细胞,用 DMSO 或甘油作为低温保护剂,保存在液氮内,在冻前和冻后10、20、40和365天时分别检测细胞的功能活性。当冻存液内含10%DMSO 和40%人 AB 血清时,冻存效果最好。冻存一年时,淋巴细胞的回收率和存活率均大于92.5%。冻存细胞的 E 和 ME 花环形成率、ANAE 阳性率、LDH 同工酶谱和细胞超微结构与冻前相比,均无明显变化,冻存细胞的淋转能力虽在冻存初期有所下降,以后就处于稳定状态。     

感染伤寒期间抗体对沙门氏伤寒菌脂多糖和蛋白质抗原的反应——Ⅱ、放射免疫测定肠抗体

由12例血培养证实的伤寒病人,16例年龄、性别可比较的健康对照,以及4例由胆汁培养及反复便培养确定的慢性伤寒带菌者,病人组均于患病13—15天采集十二指肠空肠间分泌物的同时并采集血清标本,其中有3例病人于1—2周后复采标本一次,在聚乙烯微量板上行固相放射免     

不同水分条件下坚韧胶衣固氮活性对冻融的响应

坚韧胶衣Collema tenax是干旱和半干旱生态系统中生物土壤结皮的重要组分,其固氮作用对生态系统氮素循环具有重要影响。该地衣生长于温度和水分条件变化剧烈的土壤表面,但在我国北方其固氮活性对冻融的响应尚不清楚。采用乙炔还原法研究了坚韧胶衣固氮活性在不同水分条件下(湿冻组:地衣体含水量200%干重;干冻组:地衣体含水量20%干重)和4次冻融处理之间的差异。坚韧胶衣固氮活性为2,371.0-8,701.8nmolC2H4/m2·h,湿冻组固氮活性低于干冻组,对照组固氮活性最高,湿冻组和干冻组的固氮活性(对照的百分比)均与冻融次数呈显著的线性负相关关系(干冻组:R2=0.916,p0.001;湿冻组:R2=0.965,p0.001),但湿冻组的斜率绝对值(25.05)明显高于干冻组斜率绝对值(7.60)。结果表明低温对坚韧胶衣固氮活性具有显著抑制作用,干燥条件下坚韧胶衣固氮活性对于低温胁迫的敏感性比地衣体湿润条件下更低,这种较低的敏感性可能是该地衣对我国北方干燥和冷热变化剧烈的气候特点的生理适应策略。     

采集到制备的不同时长对脐带血干细胞冻前质量的影响

目的:分析采集到制备不同的时长对脐带血干细胞的冻前相关质量指标的影响,为确定合适的采集到制备时长提供依据。方法:选取1712份脐带血样本,按照采集到制备的时长分为12 h组、(12-24) h组、(24-36) h组和(36-48) h组,分析脐带血干细胞冻前有核细胞数量、有核细胞活性、CD34+细胞百分比及CFU-GM集落数的变化。结果:(1)冻前有核细胞数量随着时间延长而下降,但各组冻前有核细胞数量的差异无统计学意义(P0.05);(2)各组的有核细胞活性结果比较发现,(12-24) h组和(24-36) h组的有核细胞活性差异无统计学意义(P0.05),其余各组间有核细胞活性比较差异均有统计学意义(P0.05);(3)CD34+细胞百分比随时间延长有微弱的升高趋势,但是差异无统计学意义(P0.05);(4)各组的CFU-GM集落数比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:随着脐带血采集到制备的时长增加,有核细胞活性会逐渐下降。脐带血采集后在36小时内制备是安全的,其干细胞的质量指标可稳定保持在较高水平,脐带血在36-48小时制备虽然质量有微弱下降,其干细胞的冻前质量也满足临床出库需求。     

抑制洋葱发芽有新招

洋葱作为一种具保健功能的蔬菜,备受广大人们的青睐。但洋葱鳞茎在贮藏过程中极易萌发,经萌发后的洋葱,大部分养分就从肉质鳞片中转移到芽的部分,使鳞茎变软中空,品质下降,直至不堪食用,商品性严重丧失。因此,如何抑制洋葱鳞茎的萌发,就成了人们关注的焦点。对此,科学家们通过大量的研究工作,提出了以下几种抑制洋葱萌发的方法。1.冻藏处理在当年11月份以前,将洋葱放置在0℃冷库中贮藏,当库外最低气温降至-2℃至-3℃时,冷冻机便停止工作,夜间将库门打开,导入冷空气,以降低库温。次年1月份,当外界最低气温降至-10℃至-15℃时,库温相应降至-5…     

灰白蚕蛾生物学特性的研究

灰白蚕蛾Ocinara varians Walker是榕树的一种重要害虫,该虫在福建福州一年发生7代,无明显越冬现象。幼虫一般5龄,少数6龄。卵期4-18天,幼虫期11-15天,肾期3-17天。每雌可产卵155-261粒,成虫寿命5-16天。     

钨酸盐去阻遏的棕色固氮菌提取液中无机钼酸对固氮酶的活化

钨酸盐中培养并去阻遏的棕色固氮菌(W-Av)只有极微弱的固氮酶活性(0.3～0.5 nmole C_2H_4/分/毫克W-Av蛋白)。当以部分纯化的钼铁蛋白补入W-Av的提取液中,后者的固氮酶活性能够上百倍地提高。当有适量保险粉及ATP和ATP发生系统存在时,W-Av提取液与钼酸钠在30℃下保温,固氮酶得到活化。在本实验的最适条件下,固氮酶的活性可达5～8nmole C_2H_4/分/毫克W-Av蛋白或25～40n mole C_2H_4/分/n mole Mo。就固氮酶的活化来说,W-Av提取液是比较稳定的,在-15℃下冻存可维持二十天以上,60℃加热5分钟,总活性约降低一半。W-Av提取液与钼酸钠保温后在-15℃下保存四天,已活化的固氮酶活性也只比对照略为降低。钨酸盐抑制固氮酶的活化,但不抑制已活化的固氮酶活性。     

松茸毒蛾生物学特性的研究

松茸毒蛾Dasychira axutha Collenette是马尾松的一种重要害虫,该虫在福建一年发生3代,以蛹越冬,翌年4月上旬羽化,幼虫一般6龄,少数7或8龄。卵期4-13天,幼虫期30-53天,越冬代蛹期143-170天。母雄可产卵34-529粒,成虫寿命3-16天,该虫多发生在避风、郁闭度大的中、幼龄纯林中。     

冻存时间对脐血造血细胞体外增殖潜能的影响

目的研究冻存时间对脐血造血细胞增殖潜能的影响.方法在所分离的脐血有核细胞中加入联合低温保护剂Dextran-40+10%DMSO,经梯度降温后置液氮深低温保存.采用无血清造血细胞扩增液对冻存不同时间的脐血造血细胞进行体外扩增,动态监测扩增潜能.结果将冻存1个月、4个月脐血造血细胞体外扩增5周,其总有核细胞分别被扩增了(1499.0±115.6)倍和(1513.0±110.4)倍,FCs均于体外扩增的第3周达到高峰,分别扩增了(53.8±6.3)倍和(54.8±6.7)倍,D34+造血细胞于体外扩增的第2周均达到高峰,分别扩增了(63.8±6.1)倍和(62.4±5.7)倍;统计分析冻存1个月与4个月后造血细胞扩增结果,不存在显著性差异,>0.05.结论在适宜深低温条件下冻存脐血造血细胞,在一定时间内,冻存时间的长短不会导致其增殖潜能下降.     

微生物的保存方法(续五)

<正> (九)非冻干的其他干燥保存法 如前所还,冻干法的基本特征是首先使试料冻结,继而使冰升华。所以,同液态干燥法相比,具有下列优点:(1)可防止发生气泡;(2)操作的全过程可在低温下进行;(3)在干燥过程中保持着多孔状态,不会形成皮膜或干燥不均匀;(4)能保持原形不变,加水后容易溶解。所以,冻干法可以说是微生物干燥保存的主要方法。 但是,冻干法并非在任何情况下总是最好的方法。例如,试料的予冻就有可能对于某种微生物具有极大的伤害。因此,人们又设计了几种不通过结冰进行干燥的方法。这一节就介绍此类干燥保存方法。 用土、砂等也是一种干燥方法,是一向应用甚广的主要的微生物保存方法,即前述的载体保存法。     

可溶性核糖核酸的研究 Ⅲ.酵母可溶性核糖核酸中抗碱二核苷酸的分离与鉴定

利用Tomlinson和Tener的DEAE-纤维素柱层析方法,我们从酵母SRNA的碱水解产物分得抗碱二核苷酸的层析峰。将抗碱二核苷酸混合物用大肠杆菌碱性磷酸单酯酶处理后,纸层析分离可得到四个部分,分别称A_1,A_2,A_3及A_4。经鉴定A_1为2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(G'pG),A_2主要为2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(C'pG,纯度约为87%),A_3则至少合2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(C'pA)和2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(G'pA),A_4较为复杂,未最后鉴定。因此酵母SRNA中至少含有下列四种抗碱二核苷酸:2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(G'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(C'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(C'pAp)及2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(G'pAp)。除此以外,还得到核苷二磷酸的层析峰,其中主要为鸟便嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸,只有少量的腺嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸。     

乳猪肝细胞短期培养后的低温保存

本文对乳猪肝细胞短期培养后冻存法和直接冻存法进行比较。采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞,将肝细胞接种到含10％DMSO、激素、生长因子和10％NBS的RPM1 1640培养基中,用阶段性冻存法保存肝细胞,分别对直接冻存和培养后冻存10天、20天复苏的肝细胞进行培养,动态观察其活率和功能。研究结果表明各组复苏后的肝细胞均保持较高的活率;短期培养后冻存组肝细胞活率、G-6-Pase活性、白蛋白和葡萄糖合成功能及安定转化能力均较直接冻存组为高;LDH活性低于直接冻存组;冻存时间的长短对其白蛋白、尿素和葡萄糖合成功能有一定影响。因此,短期培养后冻存法较直接冻存法为好。