探究杂交瘤技术制备单克隆抗体时与骨髓瘤细胞有效融合的细胞类型

杂交瘤技术制备单克隆抗体,一般取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,并通过筛选获得杂交瘤细胞后再生产。脾脏内含有B1细胞、Mz-B细胞、T1 B细胞、T2 B细胞、初始B细胞、致敏B细胞、短寿命浆细胞、中心母细胞、中心细胞、抗体分泌细胞等不同类型的细胞。制备单克隆抗体使用的抗原多为蛋白质,经典的免疫策略要用抗原反复刺激免疫动物,所获单克隆抗体类型多为高亲和力的免疫球蛋白G(IgG),结合近期发明的一些新技术等,可认为与骨髓瘤细胞有效融合的主要是由记忆B细胞增殖分化而来的抗体分泌细胞。     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

无牛血清IgG细胞培养基（—GFCS培养基）的制备及其在杂交瘤细胞体外培养中的应用

为了制备不含牛血清IgG的细胞培养基（－GFCS培养基）,并研究其在杂交瘤细胞体外培养中的应用,采用蛋白G亲和层析的方法,将含有血清的细胞培养基中的牛血清IgG去除,以制备无IgG的培养基。使用该培养基体外培养杂交瘤细胞后,监测细胞生长和上清抗体浓度。对培养上清中的IgG类单克隆抗体可以采用蛋白G亲和层析进行纯化。与示去除牛血清IgG的培养基相比,－GFCS培养基培养的杂交瘤细胞的生长状况及上清抗体浓度均无明显变化;从－GFCS培养上清中成功纯化出不被血清IgG污染的IgG类单克隆抗体,本文结果表明,采用－GFCS培养基体外培养分泌IgG类单抗的杂交瘤细胞,可以简化上清抗体的纯化工艺。     

DMSO抑制杂交瘤增殖促进抗体的分泌

利用DMSO促进杂交瘤细胞分泌单克隆抗体,并对其作用机制进行了研究。结果表明在杂交瘤细胞对数生长后期添加0.6%浓度的DMSO与对照相比可提高抗体的产量2倍;流式细胞仪检测细胞周期表明此时837%的细胞处于G1期;免疫印记结果显示在有DMSO作用下杂交瘤细胞P27 蛋白表达显著升高。因此,DMSO 可通过促进P27蛋白的表达,抑制杂交瘤细胞的增殖,从而提高杂交瘤细胞分泌抗体的能力。对DMSO进一步在高密度大规模培养杂交瘤细胞中的应用具有重要意义。     

单克隆抗体的研究进展

单克隆抗体是一种由骨髓瘤细胞和带有抗体的B淋巴细胞结合形成的杂交瘤细胞,简称单抗。首先,本文对单克隆抗体的研究发展历程进行了分析和探讨,指出单克隆抗体的发展历程包括鼠源性单抗、嵌合抗体、人源化抗体以及人源性抗体这四大阶段,分别对其优缺点进行了说明;接下来,又对单克隆抗体在临床上的应用进行了说明,从疾病诊断方面及疾病的治疗两方面进行探讨。     

分泌抗北京鸭免疫球蛋白单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2(简报)

淋巴细胞杂交瘤技术作为一种新的生物工程技术,已在生物学和医学领域内得到广泛的应用。我们继建立产生抗北京鸭红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系CBH-1后,又建立了一株产生抗北京鸭免疫球蛋白(I_g)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为CBH-2。这种杂交瘤细胞经体外培养,能稳定地分泌抗北京鸭I_g的单克隆抗体。此单克隆抗体在以北京鸭抗体进行放射免疫和酶标等测定时,可用作第二抗体。现将主要结果简报于下。北京鸭I_g抗原的制备及免疫:从北京鸭颈动脉采血,分离血清,用50%和33%硫酸铵沉淀法提取二次。每只Balb/cJ小鼠腹腔免疫剂量为0.3毫克,共免疫三     

P2X7受体短肽单克隆抗体的制备及鉴定

旨在制备与鉴定鼠抗P2X7受体的蛋白单克隆抗体.以人P2X7受体的胞外段制备短肽作为抗原,皮下注射免疫Balb/c小鼠.分离小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合并培养,挑选阳性杂交瘤细胞,扩大培养,制备和鉴定P2X7其生物学效应.结果显示,获得1株稳定分泌抗人P2X7受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型重链为IgG1,轻链为κ;该株杂交瘤细胞腹水效价为1∶6.4×104;传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;Western blotting检测证明该单抗与人细胞表面的P2X7受体蛋白特异地结合.所制备的抗人P2X7受体的单克隆抗体具有高度的特异性及稳定性,为针对P2X7受体为靶点的抗体药物的开发应用、疾病的辅助诊断奠定了基础.     

杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展

单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体,但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求,更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展,体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。由于杂交瘤细胞的半贴壁性质,无论是悬浮培养还是贴壁培养,均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述,主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法,以及不同培养方法优化的进展。     

单克隆抗体及其在肿瘤中的应用

(一) 概况单克隆抗体(Monoclonal Antibody)简称单抗(McAb),是指单个B淋巴细胞的纯系所产生的抗体。1975年Kohler和Milstein首先创立了B细胞杂交瘤技术。用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞(Hybridoma),经反复单个细胞培养(cloning和recloning),形成既具有分泌特异性抗体又具有体外长期繁殖能力的细胞系。杂交瘤细胞经多次筛选     

抑制T细胞增殖的抗CD98重链单克隆抗体的建立

目的寻找能调节T细胞功能的相关分子,进行与T细胞介导的自身免疫性疾病相关的研究。方法收集BALB/c小鼠脾细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系。筛选得到43株能调节T细胞功能的杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖的杂交瘤细胞系进行了进一步的深入研究。结果显示其目标分子是CD98重链,同时后续实验显示抗CD98单克隆抗体能抑制纤连蛋白介导的细胞分布,但不影响氨基酸转运。而且混合淋巴细胞反应显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应。结论抗CD98单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导的自身免疫性疾病的相关预防及治疗中。     

简易的杂交瘤细胞载体培养

通常杂交瘤细胞是悬浮培养在扁瓶或搅拌瓶中,其培养的细胞浓度和抗体的产量都不高。大量生产单克隆抗体则要依靠各种细胞培养器、中空纤维、微胶囊、固定化细胞和连续灌注等系统,但这些系统设计复杂,技术要求高,价格昂贵,效果不一。最近Wang G等人采用园片状聚脂载体(Fibra-     

杂交瘤细胞在CeIIiGen培养器中大量连续培养

一鼠杂交瘤细胞DA4—4(Atcc,HB57)分泌抗人IgM的单克隆抗体IgGl,该细胞被培养在1．5L celliGen一中空纤维柱连续灌注系统中,ceuiGen细胞培养器显示很低的机械剪切力,提高搅拌速度到150rpm增加了氧的传递,但不对杂交瘤细胞造成损害。在连续培养对,DA4·4细胞密度可达20×10⁶／mI以上,单克隆抗体浓度高达4．75mg／mI,该培养系统每日可收获抗体1．Og左右。     

单克隆抗体技术相关专利分析

单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）是来自单个B淋巴细胞或一个杂交瘤细胞克隆的只识别某一种特定抗原表位（抗原决定簇）的抗体,因具有高度的特异性和均一性,且能大量制备,从而为抗体的研究和应用带来了突破,     

杂交瘤单克隆抗体研制中细胞的冻存与复苏

细胞的冻存与复苏是杂交瘤单克隆抗体(MCAb)研制中的一个重要环节.如果这个问题不解决,不但融合得不到成功,而且得到有价值的杂交瘤也会丧失掉.一、细胞的冻存在液氮中冷冻是保存杂交瘤细胞(或骨髓瘤细胞)最好的方法.在MCAb的研制中,一旦测得较有价值的阳性孔,就要一面进行克隆化,一面扩大培养,并冻存起来,以防体     

人突触小体相关蛋白25单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗人突触小体相关蛋白25(SNAP25)的鼠源单克隆抗体。方法:利用大肠杆菌表达SNAP25蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备杂交瘤细胞,筛选针对SNAP25的阳性杂交瘤细胞株,鉴定抗体亚型;用杂交瘤细胞株制备腹水单抗,纯化后利用SDS-PAGE检测抗体纯度。结果:表达并纯化得到纯度大于90%的SNAP25蛋白,免疫小鼠后经2轮筛选得到12株阳性杂交瘤细胞株,其中抗体重链包括IgG1、IgG2型,轻链大部分为κ链;选择具有相对较高抗原结合活性的14号杂交瘤细胞株制备腹水,纯化后得到纯度大于90%的抗体。结论:获得1株高纯度的针对SNAP25的鼠源单克隆抗体,为肉毒毒素的检测奠定了基础。     

连续分泌抗北京鸭红血球单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-1

以北京鸭红血球为抗原免疫Balb/cJ小鼠,三天后取脾细胞与小鼠NS-1骨髓瘤细胞在PEG作用下,用两种方法进行细胞融合。只有淋巴细胞杂交瘤细胞能在一种选择性培液——HAT液中生长,具有分泌抗体活性的杂交瘤细胞,借助其上清液的斑点试验加以选择。对斑点试验阳性的杂交瘤细胞进行克隆化和扩大培养,得到能专一分泌抗北京鸭红血球单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤,定名为CBH-1。在体外经过69代培养,历时十月余,分泌能力仍未见衰减。体内可传4—5代,腹水中可检出大量分泌抗体。用降植烷、Arlacel A和石蜡油诱发动物的腹水,其量以降植烷最高、石蜡油次之。使用国产石蜡油作为诱发腹水试验似具有一定实用价值。加5γ转铁蛋白至每毫升不含牛血清的DMEM液中,在15天的培养期内,结果至少与加20%小牛血清的培液的结果相似。首次克隆化后的CBH-1细胞中,空斑形成细胞达97.5%,再次克隆化的细胞中,空斑形成细胞达99.8%,证明是均一的细胞群落。本文还就杂交瘤制备过程及细胞稳定性问题进行了讨论。     

用Epstein-Barr病毒转化法获得分泌肾综合征出血热病毒抗体的B淋巴细胞系

人B淋巴细胞膜上带有Epstein-Barr(EB)病毒受体,用EB病毒转化人B淋巴细胞是获得人源性单克隆抗体的重要方法之一。最近David等报道,先用EB病毒转化感染巨细胞病毒(CMV)患者的脾脏B淋巴细胞,再将转化了的B淋巴细胞和人骨髓瘤细胞WL-L_2-727融合,获得迄今为止分泌抗体滴度最高的人—人杂交瘤312A和914,能稳定分泌抗体达12     

抑制T细胞增殖的抗CD45单克隆抗体的建立

目的寻找能调节T细胞功能的相关分子,进行与T细胞介导的自身免疫性疾病相关的研究。方法从BALB/c小鼠骨髓中收集树突状细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系。筛选得到很多株能调节T细胞功能的杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖的杂交瘤细胞系进行了进一步的深入研究。结果显示其目标分子是CD45,同时增殖实验结果显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应。结论抗CD45单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导的自身免疫性疾病的相关预防及治疗中。     

用去掉免疫球蛋白IgG的腹水提高体外培养的单克隆抗体产量(英文)

发展了一种在实验室大幅度提高抗体产量的方法,即采用添加2%的去免疫球蛋白IgG的腹水于无血清培养基中的方法,培养杂交瘤细胞,获得了高达3.55 ×10⁶/ml的细胞密度,纯化后获得了135μg/ml的单克隆抗体产量,比通常的用无血清培养的单位体积培养液抗体产量高4倍。对于体外生产单克隆抗体而言,这种方法经济并且易于推广,它的成功是抗体产量提高的一个巨大进步。     

应用流式细胞仪定量评估人—鼠杂交瘤株细胞抗体生成功能稳定性的研究

用FACS分析和Luria-Delbrǔck方程计算淋巴细胞杂交瘤株细胞丧失抗体生成功能的突变机率(μ),以评估杂交瘤的稳定性。结果表明μ值大,则杂交瘤不稳定,易丧失抗体生成功能,反之则杂交瘤比较稳定。实验证明所建立的方法能反映杂交瘤稳定性的程度,具有实验少人为主观因素干扰,统计意义强,适用范围广等优点。