猪生长激素的提纯及其生物学活性和某些理化性质的研究

通过调pH抽提、硫酸铵分级分离和DEAE-纤维素柱层析等方法从猪垂体中提取了生长激素。平均产率约为0.5g生长激素/1000g鲜垂体。用去垂体大白鼠胫骨测定法测得共促生长效应为1.84。提取的生长激素在高pH不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳时呈现两条带;Sephadex G75柱层析得到一个峰;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现一条带,其分子量约为21,900道尔顿;聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳呈现五条带,主带在pH7.8处;DNS法测定其N-末端氨基酸为苯丙氨酸一种。此外,还测定了它的氨基酸组成。     

胸腺腺苷脱氨酶免疫亲和纯化和性质研究

用免疫亲和层析结合常规生化方法从人胸腺中纯化腺苷脱氨酶达电泳纯, 比活力14898U/mg, 得率34.15%.该酶分子质量为41.3ku, 约由380个氨基酸残基构成, 等电点为4.9, 最适温度37～40℃, 最适pH为7.0以腺苷或2-脱氧腺苷为底物, 其K_m分别为83μmol/L和61μmol/L. 对氯汞苯甲酸能显著抑制酶活性, 二硫苏糖醇可使被抑制的活性得到部分恢复.     

一种凋亡相关蚯蚓丝氨酸蛋白酶的纯化、活性鉴定及部分性质研究

通过多级柱层析,从赤子爱胜蚓抽提物（一组抗肿瘤活性蛋白成分）中纯化得到凋亡相关丝氨酸蛋白酶1（apoptosis-related serine protease 1, ARSP1）,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得其表观分子质量为28 ku.ARSP1非变性PAGE图谱为相连的多条带,质谱图为多头峰,MALDI-TOF-MS测得各主峰相对分子质量为24 645,25 052和25 281,等电聚焦电泳测得等电点pI＜3.8.测得ARSP1 N端25个氨基酸序列为：I(V)IGGT(S)N(D)ASPGEFPWQLSQTRGGSHS,N端序列比较结果显示其与丝氨酸蛋白酶类高度同源.体外实验中,不仅通过凋亡细胞的相差显微观察验证了ARSP1的细胞杀伤活性,而且进一步通过荧光抗体技术对其直接杀伤细胞活性进行了定位研究.Schiff's试剂糖蛋白染色法鉴定ARSP1为糖蛋白（或糖肽）,纤维蛋白平板法测得ARSP1同时具有纤溶酶和纤溶酶原激活酶活性,进一步通过苯甲磺酰氟(PMSF)对其纤溶酶活性的抑制实验,证明属于丝氨酸蛋白酶类.     

YP3：食用菌榆黄蘑中新的植物病毒抑制物蛋白

食用菌中含有多种抗病毒蛋白,可用于植物保护.采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和SephacrylTMS-200凝胶层析方法,从食用菌榆黄蘑新鲜子实体中提取到一单亚基蛋白,命名为YP3.利用SDS-聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳初步估计其分子量大约为27.6 kDa.氨基酸组成分析表明该蛋白非常类似其它的抗植物病毒蛋白,并且几乎不含糖.其N-末端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP,在GenBank中没有找到同源序列.浓度为0.24 mg/L时蛋白YF3对烟草花叶病毒(TMV 20 mg/L)侵染心叶烟的抑制率为50%.同时还发现YP3对供试的细菌和真菌没有抑制活性,对胃癌细胞株MGC-803、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株SPC-A1的细胞增殖具有一定的抑制作用,其IC50大约为20 mg/L.     

无血清培养基生产重组人红细胞生成素的纯化

用无血清培养基在生物反应器中培养CHO-EPO C2细胞株,培养上清中重组人红细胞生成素表达水平达10～21 mg/L.培养上清经过三步纯化后纯度可达到98%以上,比活性约为1.5×10⁵ U/mg.纯化第一步使用反相柱层析,可将样品体积浓缩约30倍.取其收集液进行DEAE-离子交换柱层析,最后进行分子筛层析,全过程回收率为40%左右.SDS-PAGE表明,所制备终产品分子质量为35～40 ku,等电聚焦方法测其等电点在3.75～4.15之间,均属文献报道范围;ELISA和蛋白质印迹实验结果证明其具有天然红细胞生成素抗原性;采用溴化氰裂解方法做肽谱电泳,结果与理论推测相符.该纯化路线简单、迅速、高效,重复性好,可用于规模化生产临床使用重组人红细胞生成素.     

杨树菇（Agrocybe aegerita）中一种抑制TMV侵染的蛋白质纯化及部分特性

用硫酸铵分级沉淀、离子交换（DEAE－Sepharose)和分子筛（S－200）的方法,从食用菌杨树菇的子实体中分离提纯了一种具有抑制烟草花叶病毒（TMV）侵染活性的蛋白质,称作为AAVP。用SDS－PAGE、IEF等方法分析AAVP。结果均呈现为单一条带。经SDS－PAGE测定其亚基的相对分子质量为15．98kD,IEF－PAGE计算其等电点为3．75。氨基酸组成的分析结果表明,AAVP中不含Cys,含有少量的His和Met,而富含酸性氨基酸。AAVP是一种N端焦谷氨酰环化封闭的蛋白质,经N端去封闭后测得N端氨棋酸序列为QGVNIYNIVAGA。当AAVP的浓度为200mg/L时,对TMV的抑制率为84．32％。而它对供试的3种植物病原真菌：绿色木霉、香蕉炭疽菌和甘薯割病菌的菌丝生长没有任何抑制作用。     

重组中国汉族人源γ-干扰素的纯化和鉴定

在E.coli中高表达的中国汉族人源γ-干扰素是以包涵体的形式存在的,包涵体经各种溶液洗涤后,用8 mol/L尿素裂解,裂解上清在8 mol/L尿素存在下,经离子交换柱层析和凝胶过滤两步纯化,得到纯度大于95%的γ-干扰素,稀释复性后,其比活为5.5×10⁵ U/mg. 激光解析电离质谱分析表明,中国汉族人源γ-干扰素的分子质量为17.32 ku,其N端序列与Gray等报道的γ-干扰素N端序列一致.中国汉族人源γ-干扰素的氨基酸组成分析结果也与其理论值相吻合.     

蚯蚓两种抗菌肽的分离纯化及部分性质

经硫酸铵沉淀、超滤、阳离子交换分离和反相快速蛋白质液相色谱（FPLC）分析,得到了两种新的蚯蚓抗菌肽F-1与F-2,经电喷雾离子源质谱（ESI-MS）测定,其相对分子质量为535.27和519.27.串联质谱（MS/MS）数据表明F-1的肽序列为Ac-Ala-Met-Val-Ser-Ser,F-2的肽序列为Ac-Ala-Met-Val-Gly-Thr.最小抑菌浓度（MIC）实验表明,F-1与F-2对鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum)、绿脓杆菌(Pseudomonas pyocyanea)、鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumanii)、土生克雷伯氏菌（Klebsiella terrigena）的最小抑菌浓度分别为11.4 mg/L和12.85 mg/L,对粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的最小抑菌浓度分别为22.8 mg/L和25.68 mg/L.对真菌白色念株菌（Candida albicans）没有表现为完全的抑制作用.     

人脑神经元特异性烯醇化酶的纯化方法

采用改良的Grace层析方法,经一次DEAE-Sephadex A50柱层析即从人脑中纯化了神经元特异性烯醇化酶,比活力为92.1U/mg,纯化倍数为59.4.该酶纯化后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白质谱带.此外,还测定了其部分理化性质,其亚单位分子量为45000,等电点pI为4.7,氨基酸组成分析表明其为一种酸性蛋白质;对2-磷酸甘油酸的K_m值为5.6×10^-4mol/L.     

定向驯化对异养蛋白核小球藻硒的耐受性及富集能力的影响

硒(Se)是生物体必不可少的微量元素,硒缺乏会导致人产生克山病、大骨节病等疾病,缺硒也会给畜牧业带来巨大损失。目前的补硒产品存在硒含量和生物利用度低、安全性差等问题,而通过小球藻培养可获得生物利用度高、安全性好的有机硒,因此是非常有应用前景的补硒产品。首先,为了获得对硒的耐受性和富集能力更强的藻种,研究通过定向驯化的方式逐步提高培养基中Na₂SeO₃浓度来驯化蛋白核小球藻,并对驯化时间和驯化过程中Na₂SeO₃的浓度梯度进行了优化。结果表明,驯化后的藻种对硒的耐受性和富集能力明显提高。在5L发酵罐中,驯化后的藻株可以耐受40mg/L的Na₂SeO₃,胞内有机硒合成速率提高了175.6%。之后,在5L发酵罐中进一步优化了硒的补加方式,在异养培养过程中分批补料添加40mg/LNa₂SeO₃时,最终获得的蛋白核小球藻细胞干重达106.4g/L,有机硒含量为1227mg/kg,有机硒合成速率为1.36mg/(L·h)。研究结果与已有蛋白核小球藻异养富硒文献报道的最高细胞密度75g/L和最高有机硒含量560mg/kg相比分别提高了41.9%和119.1%。上述结果表明,通过定向驯化的方法,可大大提高蛋白核小球藻对硒的耐受性和富集能力。     

一株耐盐日本曲霉的筛选及其溶磷促生作用

【目的】从内蒙古种植葵花的盐碱地中筛选高效溶磷真菌,为盐碱地增产节肥开发生物肥料提供溶磷菌种资源。【方法】利用ITS r DNA序列鉴定菌株、固体培养基测定耐盐性,液体摇床培养与盆栽试验结合分析菌株溶磷能力,盆栽和田间试验明确菌株M1促进作物生长和增产作用;LC-MS技术测定菌株M1在液体培养基中分泌有机酸和植物激素含量,明确菌株M1的溶磷和促生机理。【结果】溶磷菌株M1鉴定为日本曲霉(Aspergillus japonicus)。液体培养基接种菌株M1培养6 d,以Ca_3(PO_4)_2为磷源时上清液有效磷达1020.89 mg/L,溶解率为63.30%;以AlPO_4为磷源时有效磷达995.69 mg/L,溶解率为48.59%;以贵州开阳磷矿粉、江苏锦屏磷矿粉、云南晋宁磷矿粉、河北钒山磷矿粉和云南昆阳磷矿粉为磷源接种菌株M1,从晋宁磷矿粉释放的有效磷浓度最高,达到363.64 mg/L。菌株M1可耐受10%NaCl。将M1制备的菌剂分别接种于施用Ca_3(PO_4)_2、AlPO_4和开阳磷矿粉3种磷源的4种盆栽试验土壤包括北京石灰性潮土、安徽黏性潮土、安徽水稻土和山东沿海盐潮土。结果显示,菌株M1对玉米植株促生效果显著,玉米植株鲜重比对照提高2.14%–90.91%、干重增加22.15%–268.28%;土壤有效磷提高21.81–24.27 mg/kg。菌株M1与4种土壤的适配性均高于对照菌株DSM 821。田间小区花生产量结果显示,接种溶磷菌剂M1增产效果最好,花生果实产量达4.46 t/hm~2,比不接种菌剂的对照处理增加0.81 t/hm~2,增产22.19%。菌株M1在含有磷酸三钙、磷酸铝和开阳磷矿粉3种难溶磷培养液中经过6 d培养,均产生7种有机酸,其中草酸和柠檬酸含量最高,分别为616.16 mg/L和413.69 mg/L;培养液均能检测到吲哚乙酸(IAA)和玉米素,IAA含量为15.45–77.58 mg/L,玉米素浓度为0.06–0.11 mg/L。【结论】获得了一株高效溶解多种难溶磷的日本曲霉菌M1,它能显著增加土壤有效磷、促进玉米生长和花生增产,与4种典型土壤适配性好,具有良好的农业应用前景。     

纳米铁氧化物对Pelotomaculum schinkii培养系丙酸厌氧降解产甲烷的影响

微生物能利用导电材料进行电子传递,提高种间电子传递效率。铁基纳米导电物质可以加速土壤及厌氧消化系统中微生物间的种间电子传递,促进有机废弃物的产甲烷过程。前期获得了厌氧丙酸富集培养系,互营丙酸氧化菌（Pelotomaculum schinkii）在培养系中占优势,本研究考察了10~4 000 mg/L 纳米铁氧化物对丙酸降解产甲烷过程的作用及微生物的影响。结果表明,低浓度的铁基纳米材料对丙酸降解有一定的促进作用,而高浓度会抑制产甲烷：10~1 000 mg/L纳米Fe₃O₄对产甲烷无明显影响,1 500~4 000 mg/L最大产甲烷速率抑制了26%~80%,延滞期增加了174%~222%;10~200 mg/L纳米Fe₂O₃使最大产甲烷速率提高了21%~29%,1 500~4 000 mg/L最大产甲烷速率抑制了48%~58%,延滞期增加了29%~85%。微生物群落解析结果表明,与对照相比,10~1 000 mg/L纳米Fe₂O₃使P. schinkii相对丰度略有增加,而4 000 mg/L纳米₃O₄/Fe₂O₃使P. schinkii的相对丰度下降了70.7%和55.9%,说明高浓度纳米铁氧化物会抑制P. schinkii的活性,导致丙酸降解及产甲烷速率降低。     

Na_2SeO_4对蛹虫草子实体生长的影响

蛹虫草是一种药食两用真菌,具有与冬虫夏草相似的功能,且富硒能力较强。本研究通过大量的人工栽培试验,旨在探究不同浓度Na_2SeO_4对新疆本地蛹虫草子实体生长的影响。试验表明,质量浓度为20 mg/L的Na_2SeO_4对蛹虫草的生长不产生显著影响,但蛹虫草各项生物学指标均随着培养基中外源Na_2SeO_4浓度的增加而呈下降趋势,说明随着外源Na_2SeO_4浓度的增加会对蛹虫草的生长产生抑制效应,当外源Na_2SeO_4质量浓度达到200 mg/L时,生产的蛹虫草已不具备商品价值。由此可见,20 mg/L的质量浓度是以Na_2SeO_4为硒源进行蛹虫草富硒研究的安全浓度。该研究为富硒产品开发寻找新的硒源开辟了新思路,为新疆地区进一步大规模栽培富硒蛹虫草提供一定的参考,但是对以Na_2SeO_4为硒源的最佳富硒浓度还有待于进一步研究。     

Complete nucleotide sequence and genome organization of tobacco mosaic virus isolated fromVicia faba

Based on reported TMV-U1 sequence, primers were designed and fragments covering the entire genome of TMV broad bean strain (TMV-B) were obtained with RT-PCR. These fragments were cloned and sequenced and the 5’ and 3’ end sequences of genome were confirmed with RACE. The complete sequence of TMV-B comprises 6 395 nucleotides (nt) and four open reading frames, which correspond to 126 ku (1 116 amino acids), 183 ku (1 616 amino acids), 30 ku (268 amino acids) and 17.5 ku proteins (159 amino acids). The complete nucleotide sequence of TMV-B is 99.4% identical to that of TMV-U1. The two virus isolates share the same sequence of 5’, 3’ non-coding region and 17.5 K ORF, and 6, 1 and 3 amino acid changes are found in 126 K protein, 54 K protein and 30 K protein, respectively. The possible mechanism on the infection of TMV-B inVicia faba is discussed.     

Design,synthesis and anti-TMV activities of novel chromone derivatives containing dithioacetal moiety

Thirty-five novel chromone derivatives containing dithioacetal moiety were designed, synthesized, and their anti-TMV activities were evaluated through half-leaf method. The results showed compound c23 illustrates highly curative, protective and inactivating activities against TMV at 500 mg/L, with the values of 68.8%, 58.8%, 86.0% respectively, which were superior to that of Ribavirin (42.3%, 49.8%, 68.4%, respectively) and similar to that of Ningnanmycin (59.4%, 52.4%, 88.4%, respectively). The EC₅₀ value of inactivating activities of compound c23 is 9.3 mg/L, which was better than that of Ribavirin (135.2 mg/L), and equivalent to that of Ningnanmycin (8.8 mg/L). Furthermore, compound c23 can destroy the integrity of TMV-CP, resulting in reduced infectivity of TMV. Meanwhile, compound c23 can combine with TMV protein coat and hydrolyze TMV protein coat to impact the process of self-assembling of TMV, with the association constant (K_d) 4.5 mg/L. This finding suggests that chromone derivatives containing dithioacetal moiety can be used as new antiviral agent.     

不同氮处理下速生柳对水体氮的吸收、分配及生理响应

采用水培法,研究了旱柳苗在外源添加不同氮水平(贫氮、中氮、富氮、过氮)的铵态氮(NH+4-N)和硝态氮(NO-3-N)的生长、氮吸收、分配和生理响应。结果表明:一定范围氮浓度的增加能够促进旱柳苗的生长,但过量氮会抑制其生长,且NH+4-N的抑制作用大于NO-3-N;两种氮处理下,旱柳表现出对NH+4-N的吸收偏好,在同一氮水平时,旱柳各部位氮原子百分含量Atom%15N(AT%)、15N吸收量和来自氮源的N%(Ndff%)均为NH+4-N处理大于NO-3-N处理,且随着氮浓度的增加,差异增大,且在旱柳各部位的分布为根﹥茎﹥叶;2种氮素过量和不足均会对旱柳根和叶生理指标产生不同的影响,其中在过氮水平时,NH+4-N和NO-3-N处理下根系活力比对照减少了50.61%和增加了19.53%;在过氮水平时,NH+4-N处理柳树苗根总长、根表面积、根平均直径、根体积和侧根数分别对照下降了30.92%、29.48%、19.44%、27.01%和36.41%,NO-3-N处理柳树苗相应的根系形态指标分别对对照下降了1.66%、5.65%、1.49%、5.06%和25.72%。可见,高浓度NH+4-N对旱柳苗的胁迫影响大于NO-3-N,在应用于水体氮污染修复时可通过改变水体无机氮的比例,削弱其对旱柳的影响,从而提高旱柳对水体氮污染的修复效果。     

Effects of GNA and other mannose binding lectins on development and fecundity of the peach-potato aphid Myzus persicae

Three mannose-binding lectins were assayed in artificial diets for their toxic and growth-inhibitory effects on nymphal development of the peach-potato aphid Myzus persicae. The snowdrop (Galanthus nivalis) lectin GNA was the most toxic, with an induced nymphal mortality of 42% at 1500 g ml^–1 (30 M) and an IC₅₀ (50% growth inhibition) of 630 g ml^–1 (13 M). The daffodil (Narcissus pseudonarcissus) lectin NPA and a garlic (Allium sativum) lectin ASA induced no significant mortality in the range 10–1500 g ml^–1, but did result in growth inhibition of 59% (NPA) and 26% (ASA) at 1500 g ml^–1 (40 M for NPA, 63 M for ASA). All three lectins were responsible for a slight but significant growth stimulation when ingested at 10 g ml^–1, reaching +26%, +18% and +11% over the control values for the garlic lectin, the daffodil lectin and the snowdrop lectin, respectively. GNA, as well as the glucose/mannose binding lectin Concanavalin A, were also provided at sublethal doses throughout the life cycle of the aphids, and effects on adult performance were monitored. Adult survival was not significantly altered, but both lectins adversely affected total fecundity and the dynamics of reproduction, resulting in significant reduction in calculated r _ms (population intrinsic rate of natural increase) on lectin-containing diets. These effects are discussed in relation to the use of transgenic plants expressing these toxic lectins for potential control of aphid populations.     

喷施铜和硼肥对忍冬生理生化及其茎藤指标成分的影响

以4年生忍冬为试验材料，采用盆栽和叶面喷施方式，设置不同质量浓度的铜肥(10，30，50 mg/L Cu²⁺，分别表示为Cu₁₀、Cu₃₀、Cu₅₀)和硼肥(20，40，60 mg/L B₄O^2-₇，分别表示为B₂₀、B₄₀、B₆₀)及其配施组合处理，测定忍冬叶片的光合参数以及茎藤的营养物质、药效成分含量、矿质离子含量，探究施铜和硼肥对忍冬光合生理、营养物质、矿质离子及其茎藤品质的影响，为优化忍冬栽培技术和提高其药材品质提供理论参考。结果表明：(1)喷施一定质量浓度的铜硼肥有助于提高忍冬叶片的净光合速率，尤以B₄₀Cu₅₀配施处理最佳；适宜质量浓度的铜硼肥有利于增加总叶绿素含量，高质量浓度的铜硼肥则起抑制作用。(2)配施铜硼肥对忍冬藤中营养物质及药效成分含量的影响比单施铜、硼肥更显著，其中B₄₀Cu₅₀处理可显著提高忍冬藤中可溶性蛋白、淀粉、还原糖含量，B₂₀Cu₁₀处理可显著提高可溶性糖含量；有利于忍冬藤中绿原酸和马钱苷积累的最佳配施处理分别是B₆₀Cu₅₀和B20Cu₃₀。(3)喷施铜硼肥对忍冬藤矿质离子的含量也具有显著的影响，单施与配施铜硼肥处理忍冬藤矿质离子含量均有增加，且配施铜硼肥比单施铜硼肥增加效果显著，尤以B₂₀Cu₁₀、B₂₀Cu₃₀、B₂₀Cu₅₀处理最佳。综合考虑，B₄₀Cu₅₀配施处理可有效增加忍冬藤的营养与药用指标成分含量，是忍冬叶面喷施铜和硼肥的最佳比例。     

蝉拟青霉液体发酵条件优化

采用液体发酵蝉拟青霉,对蝉拟青霉的发酵条件进行优化,以提高蝉拟青霉胞外多糖产量及生物量。摇瓶发酵条件下,在单因素基础上设计正交实验确定各因素的最佳组合。优化后得最佳发酵培养基:蔗糖8%,牛肉膏0.75%,酵母膏0.125%,MgSO_4·7H_2O 0.3%,KH_2PO_4 0.2%,麸皮0.5%。该条件下胞外多糖产量为5.96 g/L,生物量为42 g/L,较优化前提高了1倍。采用发酵罐进行扩大培养,对分批发酵时的初糖浓度进行了优化,并分析了补料分批发酵对发酵过程的影响。发酵罐培养时最适初糖浓度为5%,此时生物量最高为38 g/L,多糖含量最高为5.5 g/L;采用补料分批发酵时,多糖产量最高为5.89 g/L,生物量最高为40 g/L,效果优于分批发酵。