“凤丹”牡丹花丝愈伤组织诱导及分化研究

以"凤丹"花丝为外植体，探究了外植体发育时期、基本培养基和植物生长调节剂（plant growth regulators，PGRs）对愈伤组织诱导、增殖和分化的影响，并对不同类型的愈伤组织进行了形态组织学观察。结果表明：花蕾直径为13~19mm时、半透明或白色的幼嫩花丝更适宜愈伤组织的诱导；愈伤组织诱导的最适培养基为SH添加2，4-D 1 mg·L^-1、NAA 2 mg·L^-1及BA 0.2 mg·L^-1，最高诱导率和诱导量分别为99.12%和5.68 g；愈伤组织增殖的最适培养基为SH添加2，4-D 0.5 mg·L^-1、NAA 0.5 mg·L^-1及BA 0.25 mg·L^-1，增殖率为3.86；花丝愈伤组织根据形态结构可分为三类，Ⅰ类愈伤组织具有典型的胚性愈伤组织特征，可进一步分化产生体胚；Ⅱ类愈伤组织和Ⅲ类愈伤组织内部呈现大量维管组织分化，其中Ⅱ类愈伤组织中观察到了不定芽的分化，Ⅲ类愈伤组织未见分化。上述结果表明"凤丹"花丝具有重要再生潜力，是一种良好的新型外植体，对研究建立牡丹体外再生体系具有重要价值。     

野生大豆的组织培养

植物名称:野生大豆(Glycine soja)。材料类别:将野生大豆的成熟种子经消毒后攒种在附加2,4-D2mg/L(单位下同)+BA2的MS培养基上。3天后种子开始膨胀萌发。种子萌发后与培养基接触的部分膨大,形成愈伤组织。培养20天后,切取已部分形成愈伤组织的子叶、上胚轴、下胚     

从未受精的玉米子房培养出单倍体植株

本实验用Ms和N_6两种不同培养基,对未受精的成熟的玉米子房(已抽出花丝)和未受精的未成熟的玉米子房(雄穗的花粉发育到单核靠边期)进行了离体培养,不经愈伤组织直接获得了单倍体植株,成苗率达2％。实验结果表明,未受精的玉米子房的发育时期对培养出单倍体植株比培养基的选择显得更为重要。     

大花君子兰子房、花托和花丝培养再生植株

植物名称:大花君子兰(Clivia miniata)。材料类别:栽培5年生大花君子兰上未开放花蕾的子房、花托和花丝。培养条件:将无菌子房和花托切成0.5×0.5cm的块,花丝切成1cm的段。诱导愈伤组织的培养基为MS培养基,附加成份(mg/l,下同):(1)KT2或者3、NAA0.5;(2)     

体外培养和遗传育种

将lcm长的蒺藜草Cenchrus ciliariscv.75花序切段培养在补加有2,4-D(lmg / 1), 3-IAA(Smg / 1)和激动素(o.5mg / 1)的MS培养基上.然后置于25℃,- 16小时光周期下培养.4-6天后开始发生愈伤组织,21天后获得了良好增殖的愈伤组织.通常每隔一周在同样培养基上进行一次继代培养.经12-- 14周生长     

竹节参的组织培养与植株再生

植物名称:竹节参(Panax japonicum)。材料类别:嫩茎、根茎。培养条件: 培养基:(1)MS IAA1 2,4-D1 KT0.1(浓度单位:mg/l,下同);(2)MS IAA1 2,4-D0.5 NAA2.5 KT0.1;(3)MS IAA1 2,4-D0.2 KT2。培养物置于23±1℃,1600—2000lx照光12小时的条件下静置培养。生长与分化情况:嫩茎和根茎截段当置于(1)培养基上,10天后便可见到外植体变粗变厚,切口处凹凸不平,略带白色或微黄色,15天后出现瘤状突起,并逐渐形成致密的淡黄色愈伤组织,初时愈伤组织生长缓慢2～3个月以后生长稍快,将愈伤组织移至培养基(2)后,约经1个月可见愈伤组织表面     

甘蔗幼叶切段培养中的体细胞胚胎发生

本文从形态学和组织学方面研究了甘蔗幼叶胚性愈伤组织发生及体细胞胚胎的形成过程。甘蔗幼叶片切段培养于含2.4—D1.5mg/1的MS培养基上,4—6天后切段开始形成愈伤组织,约10天后愈伤组织表面出现白色颗粒状结构。将含有白色颗粒状结构的愈伤组织转移至不含激素的培养基中,7—10天后可见有小植株长出。组织学和形态学观察表明,甘蔗离体再生植株是通过体细胞胚胎发生途径。     

离体培养菠萝的分化

菠萝的各种器官(幼嫩的聚花果、花药、吸芽或裔芽的腋芽、小的冠芽和小的裔芽)培养在含有1—10毫克/升的 NAA(萘乙酸)和 BA(6—苄基腺嘌呤)的 MS 培养基上。花药的培养是采用含有四分体至成熟花粉各时期的材料,但均没有观察到形成花粉愈伤组织,偶而能形成花丝愈伤组织,     

碱蓬茎段培养再生植株的研究

将碱蓬(Suaeda Forsk)种子经消毒后分别接种在4种不同pH值的培养基上,两天后观察发现以pH 7培养基上的种子出苗最快,出苗率最高。6d时观察,在pH9的培养基上也有较高的出苗率。用上述无菌苗茎段为外植体,分别接种在4种不同生长素的培养基上均能产生愈伤组织,除含有2,4-D的培养基外,其它3组愈伤组织的诱导频率均达到100％。把愈伤组织移到添加BAP与IAA的分化培养基上,三个星期后由愈伤组织分化出不定芽,分化频率为12.5％。当不定芽长至1.5cm~2cm时转入生根培养基,两个星期后长出白色的根,获得完整植株。     

洋桔梗体细胞胚性愈伤组织诱导过程中超氧化物歧化酶和酯酶变化

通过转移洋桔梗非胚性愈伤组织到含有1.0mg/L2,4-D的MS培养基(ecIM)上诱导了洋桔梗胚性愈伤组织形成,而非胚性愈伤组织在含1.0mg/L2,4-D和0.5mg/LKT的MS培养基(necSM)上继代培养。本研究比较分析了洋桔梗愈伤组织在ecIM和necSM上的超氧化物歧化酶(SOD)活性及其同工酶酶谱、酯酶同工酶酶谱随着培养天数的变化。实验结果表明在ecIM和necSM上培养的洋桔梗愈伤组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性在培养早期较低,然后随着培养天数增加而升高,维持在较高水平上,但SOD活性变化无明显规律性;另一方面,SOD同工酶在第4天后出现一新的同工酶谱带;此外,在ecIM和necSM上培养洋桔梗愈伤组织的酯酶(EST)同工酶在培养至第16~20天期间呈现显著缺失。     

红豆草组织培养中体细胞胚的形成及其胚胎学观察

红豆草(Onobrychis viciaefolia Scop)幼苗的茎或根放入含有Kinetin(1mg/1)和6-BA(1mg/1)的LS固体培养基上,4周后可产生愈伤组织。当愈伤组织被转移到含有6-BA(1mg/1)的LS固体培养基上3—4周后,发现在愈伤组织上形成了体细胞胚,这种胚在不含任何激素的LS液体培养基浸湿的滤纸上会发育为完整植株。在愈伤组织分化的过程中进行胚胎学显微观察,发现了从单个的胚性细胞到高级阶段胚的体细胞胚发育的各个阶段,看来十分明显,红豆草的分化植株最初来源于单个的胚性细胞,这就使得在红豆草的组织培养中通过体细胞胚发生的途径在细胞水平上进行遗传选择成为可能。     

稀土元素对枸杞体细胞胚诱导频率的影响

本文系统研究了稀土元素对枸杞体细胞胚发生额率的影响,企图为建立高频率体细胞发生体系提供参考资料。实验以宁夏枸杞(Lycium chinense)叶片为外植体,材料离体后接种在附加2,4-D 0.2mg/L 和水解酪蛋白500mg/L 的 MS 培养基上,首先诱导愈伤组织,所得愈伤组织经多次继代培养和筛选,使其具有胚性愈伤组织的特征。然后,转移到附加不同稀土元素成分和浓度的 MS培养基上诱导体细胞胚。十五天后,取出愈伤组织,置实体显微镜下,剥离与统计体细胞胚的     

甘蔗原生质体的体细胞胚胎发生

用甘蔗(台糖134)花粉植株叶外植体产生的愈伤组织,作为分离原生质体的材料。原生质体以液体浅层培养的方式培养在修改的 MS 培养基上,经培养后一周内,观察到第一次细胞分裂,约5—6周后,形成了愈伤组织。将胚性细胞团组成的愈伤组织转移到除去或降低2,4-D浓度,但含有 BA 的分化培养基上,约2—3周后,有的愈伤组织发育了胚芽鞘,另一些愈伤组织分化出胚根或根。系统观察了这些原生质体在分裂和愈伤组织形成过程中的体细胞胚胎发生。     

玉米未成熟胚乳愈伤组织和器官的发生及其倍性变化的初步研究

本试验在附加和不附加外源激素的MS培养基上,均得到了玉米未成熟胚乳愈伤组织。愈伤组织在附加外源激素的MS培养基上达到器官分化,获得了发育正常的和许多畸形的胚乳植株。所得到的愈伤组织细胞和植株根尖细胞染色体数目和倍性是不稳定的,二者有相同的趋向,其中有整倍体的细胞(2n=10,20,30,40,50),也有各种非整倍体的细胞(2n=5—49)。     

大豆未成熟胚培养中高浓度植物生长素的作用及其植株再生

用大豆(Glycine max(L.)Merr.)未成熟胚为外植体,在含高浓度 NAA 或2,4-D 的培养基上可诱导绿色结构体和体细胞胚状体。叶状、花状和喇叭形状的绿色结构体在含30mg/l2,4-D 的 MS-1培养基上可重新愈伤组织化。这种由高浓度2,4-D 诱发并保持的愈伤组织,转到低激素水平的培养基上后,能诱导出大量的同类形状的新结构体。绿色结构体可以进一步发育成叶丛状,但顶端不伸长。使用含2m g/l GA,和0.1mg/l IBA 的培养基,能促进顶端伸长和根的发育,获得正常植株。由未成熟胚的子叶(其时种子长度约4—6mm)诱导的愈伤组织具有再生能力。在含高浓度2,4-D(5-30mg/l)的培养基上诱导出的愈伤组织具有较高的产生绿色结构的潜力。而高浓度 NAA(10mg/l)培养基产生的愈伤组织具有较强的产生根状体的潜力。培养的外植体或愈伤组织在含5mg/l 2,4-D 的培养基上,不需要经常的继代培养,即可长期保存。     

2,4-D浓度对胡萝卜体细胞胚胎发生及其同工酶的影响

在含有不同浓度2,4-D的MS培养基上生长的胡萝卜组织,培养26天后,不含2,4-D培养基上的培养物,其酯酶同工酶谱比在含有2,4-D培养基上的培养物少一条酶带8(图3)。过氧化物酶同工酶谱中,发现前者出现的酶带1(图4)在后者的酶谱中看不到。 胡萝卜的培养组织和完整的小植物皆具有分泌过氧化物酶和酯酶的能力。总过氧化物酶活力的变化与愈伤组织、胚状体和小植物的形成有一定关系。     

罗汉果组织培养中愈伤组织和腋生枝的形成

用罗汉果茎段为外植体,培养在MS+BA1.0+IBA0.1毫克/升培养基上,诱导愈伤组织和芽形成。观察了罗汉果茎段愈伤组织的生长以及腋生枝的形成。罗汉果茎段培养5天后,潜伏腋芽开始萌动和生长。培养10天后罗汉果茎段的基部一端开始膨大。培养20天后产生大量白色疏松的愈伤组织,这时腋生枝已经长成3—6厘米长。培养30天后基部的愈伤组织中有少量瘤状小突起,但再分化形成芽的频率极低。结果表明,罗汉果茎段组培形成的苗均是从腋芽产生的。     

三尖杉外植体来源与培养基成分对愈伤组织生长的影响

为了建立和优化获得有效生物碱成分的三尖杉愈伤组织的培养技术和方法,以大连地区移栽自庐山植物园的三尖杉(Cephalotaxus)植株为原料,就外植体种类、基本培养基种类、激素种类和浓度等因素对愈伤组织诱导、生长的影响进行了系统的研究和归纳。实验发现,幼茎外植体因其出愈率早、诱导率高而最佳;培养基MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导率达91%,继代培养基中一定浓度的NAA(1.0～3.0mg/L)有利于愈伤组织的产生,但是高浓度的NAA(8.0mg/L)则对愈伤组织的生长有抑制作用,其在MS基础培养基上较在B5和1/2MS培养基上褐化轻,生物量增长快,冬季诱导的愈伤组织,其诱导率普遍高于夏季所诱导的愈伤组织。结果表明,以11月份三尖杉幼茎为外植体,以MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为诱导培养基和继代培养基,继代6～8代,每代培养30～35d,收获愈伤组织或细胞培养物,该程序是获得大量三尖杉愈伤组织的较佳培养程序。     

土贝母幼叶离体培养再生植株

用土贝母(Bolbostemma paniculatum)带有四片展开叶的幼茎,分别将幼茎、卷须、未展开叶及各片展开叶剪成小块或小段,做为外植体,分别放在含有0.5、1、2、4、6mg/l不同浓度2,4-D的MS培养基上,于26℃黑暗中培养。三天后叶组织均呈现不同程度卷曲,一周后出现愈伤组织。至两周后各种外植体都有较多的愈伤组织长出。愈伤组织致密,     

菠萝杂种胚愈伤组织分化成苗

“邱”ד皇后”菠萝杂种胚愈伤组织已分化成苗。将带杂种胚的种子培养在含有苄基腺嘌呤或吲哚丁酸的培养基上,诱发胚芽愈伤组织。愈伤组织从根部形成,最终包裹了整个胚。将原始愈伤组织进行多次中间培养,就可促使它继续生长。中间培养的愈伤组织中,发现有芽分化。将从芽丛上分离的单株移至基本培养基上培养。从一个杂种胚平均可获得20～25株发育完全的植株。