成纤维细胞生长因子与其受体相互作用及其抑制剂的研究进照

成纤维细胞生长因子(FGF)有许多重要的生理功能,并与肿瘤的形成有关.为了弄清FGF与成纤维细胞生长因子受体(FGFR)相互作用的机制,人们对FGF和RGFR的各个结合结构域进行了深入、细致的研究,定位了aFGF、bFGF的肝素结合区、bFGF的受体结合区、FGF受体的肝素结合区、配体结合区和FGF受体相互结合区,提出了两个FGF与FGFR相互作用的模型,在此基础上设计了FGF的核酸类、糖类和多肽类抑制剂,为寻找新一代抗癌药物打下了理论基础.     

Notch信号转导与调控

Notch是一个进化上十分保守的跨膜受体蛋白家族,它可以通过与表达配体的相邻细胞间的相互作用转导信号,从而决定动物系统发育过程中多种细胞的“命运”.Notch信号转导过程包括Notch受体与配体的结合、Notch受体的酶切活化、可溶性NICD转移至细胞核并与CSL DNA结合蛋白相互作用,从而调控靶基因的表达.Notch活性水平、时间和空间分布受到包括配体、蛋白质转运、泛素化降解等多水平内源性和外源性诱导因素的调节.系统介绍了Notch信号转导通路的分子组成、Notch信号激活的生化机制、Notch信号的多水平调节以及与部分相关疾病的关系.     

用原子力显微技术研究受体-配体间的相互作用

原子力显微镜(AFM)不仅能对纳米生物结构进行实时动态的形态和结构观察,而且还能以10^-12N(pN)的精度对溶液中生物分子表面的相互作用力进行直接测量,逐渐成为一种研究受体-配体间相互作用的良好工具。本简要综述用AFM研究受体-配体间作用力、受体-配体间相互作用的影响因素及对这些因素的处理方法。     

蛋白质与极性配体复合物的绝对结合自由能计算

介绍了用分子动力学模拟与热力学积分法相结合,模拟蛋白质与配体的绝对结合自由能的方法.通过分子转换法,使蛋白质分子（包括水分子）与配体小分子之间的相互作用逐渐减弱 （或增强）至完全消失（或完全出现）. 运用体约束方法,计算了配体与受体结合后平动、转动自由度的丧失即熵效应所引起的自由能变化.以胰蛋白酶双突变体（D189G/G226D）与极性配体苯甲脒为例,研究了蛋白质活性部位与极性配体的相互作用对结合自由能的影响,该复合物绝对结合自由能的模拟结果(－15.5 kJ/mol)与实验值(－10.5 kJ/mol)相近.     

细胞核受体LXRβ的体外酶标测活方法的建立与应用

目的:克隆并表达大鼠细胞核受体LXRβ配体结合区(LBD)序列,并进行配体依赖性受体与共激活因子结合区短肽相互作用的酶标法分析,建立简易经济可靠的体外高通量筛选LXR调节剂方法.方法:从含大鼠LXRβ cDNA序列的pSG5/rLXRβ上扩增LBD区序列,测序核实序列后,将此序列克隆入表达载体,构建原核表达载体pET28a(+)-rLXRβ-LBD;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,通过SDS-PAGE、Western blotting检测及Ni2+亲和层析柱分离纯化;建立ELISA方法检测配体依赖性受体-共激活短肽相互作用.结果:重组蛋白rLXRβ-LBD在大肠杆菌中高效表达(占菌体总蛋白30%),SDS-PAGE显示在36kDa处有免疫特异性蛋白,纯化后全长蛋白占90%以上.ELISA结合测试显示在激动剂猪脱氧胆酸二甲酰胺存在时,rLXRβ-LBD能与共激活短肽结合,亲和力与双荧光酶报告基因测活结果吻合.结论:成功克隆并表达rLXRβ-LBD序列,建立起ELISA筛选方法,为LXR-LBD配体功能活性的研究和配体的高通量筛选提供新方法.     

受体活性修饰蛋白研究进展

受体活性修饰蛋白(receptor activity-modifying proteins,RAMPs)属于单跨膜蛋白家族,分三个结构域,RAMP的N端和跨膜区决定本身的功能和受体表型,胞内C端对于配体的信号传导和受体循环有重要作用。目前发现有三个成员:RAMP1、RAMP2和RAMP3。RAMPs通过改变G蛋白偶联受体的糖基化,作用于配体结合区域来调节受体表型。RAMP1与降钙素受体样受体(calcitonin receptor like receptor,CRLR)结合表现出降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)受体表型:RAMP2和RAMP3与CRLR结合则对肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)表现高亲和力,与降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)结合则作为胰淀粉样酶(amylin,AMY)受体。由此可见,RAMPs不仅调节受体与配体结合,还影响细胞内的蛋白相互作用调节细胞内信号传导来影响细胞的增殖、迁移、分化等生物学特性。RAMPs还对心血管系统的病理生理有重要调节作用。     

肽生长因子

<正> 生长因子与靶细胞之间的相互作用涉及到配体:受体复合物迅速的内在化(internalization)。受体具有内部的酪氨酸蛋白激酶的活性,它可以部分地介导肽因子的生物活性。序列分析资料指出主长因子和(或)其受体与某些具酪氨酸激酶活性的致癌基因产物有关。     

成纤维细胞生长因子与其受体相互作用及其抑制剂的研究进展

成纤维细胞生长因子（FGF）有许多重要的生理功能，并与肿瘤的形成有关.为了弄清FGF与成纤维细胞生长因子受体(FGFR)相互作用的机制，人们对FGF和FGFR的各个结合结构域进行了深入、细致的研究，定位了aFGF、bFGF的肝素结合区、bFGF的受体结合区、FGF受体的肝素结合区、配体结合区和FGF受体相互结合区，提出了两个FGF与FGFR相互作用的模型，在此基础上设计了FGF的核酸类、糖类和多肽类抑制剂，为寻找新一代抗癌药物打下了理论基础.     

CHO细胞表达人源μ型阿片受体及其活性分析

μ型阿片受体在阿片类药物镇痛与成瘾中发挥重要作用 .从人脑组织总RNA通过一次反转录和两次PCR法扩增获得 μ型阿片受体的cDNA ,将其克隆至pcDNA3 1 (+)中 ,转染CHO细胞后 ,筛选单克隆细胞株并制备膜受体 ,检测重组细胞株表达的 μ型阿片受体与特异性配体的结合能力 .通过饱和性结合和竞争性结合试验证实 ,重组细胞株表达的 μ型阿片受体与天然的 μ型阿片受体具有基本一致的生物学特性 ,为进一步研究阿片受体与配体相互作用的分子机制打下了基础     

乙酰胆碱结合蛋白的特点及应用

乙酰胆碱结合蛋白(acetylcholine-binding proteins,AChBPs)的基本特征、结构特点和激活机制与烟碱型乙酰胆碱受体(the nicotinic acetylcholine recepror,nAChRs)相似.通过对AChBPs晶体结构与功能的研究,能准确阐明nAChRs结构与功能的关系.通过对配体和AChBPs的复合物的晶体结构解析,有助于我们理解配体与nAChRs相互作用的机理,为开发治疗疼痛、成瘾、帕金森症、阿尔茨海默氏症和癫痫等疾病的新药提供理论基础.     

胸腺基质淋巴细胞生成素的研究进展

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种新型的细胞因子,它存在多种类型。已鉴定了人、小鼠和大鼠的TSLP受体,属于造血细胞因子受体家族成员,功能性TSLP受体复合物是由TSLP受体和IL- 7Rα组成,与配体相互作用能活化Stat3和Stat5,发挥着多种生物学功能。     

HIV-1跨膜蛋白gp41与N-取代吡咯衍生物的结合模式研究

采用分子对接,分子动力学(MD)模拟和分子力学/泊松-波尔兹曼溶剂可有面积方法与分子力学/广义伯恩溶剂可及面积方法(MM-PBSA/MM-GBSA),预测两种N-取代吡咯衍生物与HIV-1 跨膜蛋白gp41疏水口袋的结合模式与作用机理．分子对接采用多种受体构象,并从结果中选取几种可能的结合模式进行MD 模拟,然后通过MM-PBSA计算结合能的方法识别最优的结合模式. MM-PBSA计算结果表明,范德华相互作用是结合的主要驱动力,而极性相互作用决定了配体在结合过程中的取向．进一步的结合能分解显示,配体的羧基与gp41残基Arg579的静电相互作用对结合有重要贡献．上述工作为进一步优化N-取代吡咯衍生物类的HIV-1融合抑制剂建立了良好的理论基础．     

T细胞活化的动力学模型

T细胞表面DIGs(detergent-insoluble elycolipid-enriched domains)在细胞活化过程中的作用正成为研究的热点问题,为了证实受触发的TCR（T cell receptor)向DIG中聚集的重要性,以及PTKs(protein tyrosin kinases）参与T细胞活化信号转导的机制,提出了一个突性的理论模型,在TCRs的连续触发模型基础上,研究了T细胞活化早期TCR与其特异性配体的相互作用机制,及辅助受体CD4／CD8在细胞膜上“免疫突触”形成过程中的作用,解释了不同配体对最终T细胞活化结果的影响。研究表明,TCR与配体的结合亲和力、TCR与配体复合物的离解率、以及辅助受体间的相互作用是T细胞的活化过程中的重要参数,对于一定的T细胞克隆,其特异性配体与其TCR－pep复合物的离解率,决定了这一配体究竟是显效剂抑或是拮抗剂。辅助受体CD4／CD8参与识别配体的同时,又可以通过它与TCR－pep复合物的相互作用。改善配体对T细胞刺激信号的强度,影响最终的活化结果。通过模型,证明了TCR与配体复合物在DIG中的聚集是细胞活化的重要事件,DIG中的PTKs保证了活化信号的转导。     

ERR促进乳腺癌发生的作用机制

乳腺癌是发病率逐年增加、女性最常见的恶性肿瘤之一.ERR(雌激素受体相关受体)α,β和γ(NR3B1-3)是核受体超家族成员,也是配体依赖的转录因子.ERRs可通过线粒体、血管生成、脂肪生成等方式参与乳腺癌肿瘤细胞的代谢.ERRs的功能不受配体影响,但受特异性共调控子调节.这些调控子包括类固醇受体的共激活体(SRC)、PPARγ共激活体PGC-1α/β和共抑制体受体相互作用蛋白140(RIP140).对ERR的研究可为治疗乳腺癌提供新的途径.     

《神经递质和药物》

《神经递质和药物》(Neurotransmitters and drugs)第三版,由Zygmunt L. Kruk和Christopher J.Pycock著,1991年Chapman & Hall出版社出版,204页。为了了解药物怎样调节神经系统就需要知道神经递质的功能、分布和控制知识。该书对主要神经递质作了简明和系统介绍。涉及到合成、贮存、释放、受体相互作用和失活机制,     

不同配体与同一膜受体结合的初步探讨

研究了伴刀豆球蛋白A(ConA)和层粘连蛋白(LN)与巨噬细胞膜受体竞争结合,初步推测两个配体与同一膜受体结合的可能性.结果表明,LN可以竞争抑制FTTC-ConA与巨噬细胞膜受体的结合,说明ConA和LN两种配体各自的巨噬细胞膜受体中有部分可能是共同的,而加入ConA反而增加巨噬细胞膜上结合的FITC-LN量,这可能是因为ConA和LN的分子特性导致的.     

EphB4/ephrinB2逆向信号对RAW264．7破骨细胞分化中PDZ结构域蛋白表达变化的研究

Eph受体是酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的亚家族,ephrin(Eph受体相互作用蛋白)是其配体,它们是膜结合蛋白,相互依赖进行信号转导.内居蛋白(syntenin)与Pick1属于PDZ结构域(PSD-95/Dlg-/Zo-1 domain)蛋白,报道称能与ephrinB配体结合,但是否受Eph受体调控尚未见报道.以RAW264.7细胞株为研究对象,通过蛋白质印迹及/或免疫荧光分析显示RAW264.7细胞经RANKL诱导的破骨细胞表达ephrinB2、内居蛋白(syntenin)和Pick1三个蛋白质.将提前成簇的可溶性EphB4蛋白加入培养液,与ephrinB2配体结合,用来研究EphB4/ephrinB2逆向信号对syntenin和Pick1表达水平变化的影响.免疫印迹及Real-time RT-PCR分析结果显示,在EphB4-Fc实验组中Pick1的蛋白质及mRNA水平都有明显增加,然而在EphB4-Fc实验组与Fc对照组别间syntenin的蛋白质及mRNA水平未见明显变化.免疫共沉淀结果显示,syntenin和Pick1不能与ephrinB2共沉淀.以上结果初步探索了体外破骨细胞分化过程中,EphB4/ephrinB2逆向信号对PDZ结构域蛋白(ephrinB2配体潜在的下游信号分子)表达变化的调控.     

重组人受体蛋白FKBP12与新型神经生长促进剂非共价键复合物的电喷雾质谱

系统地用电喷雾质谱(ESI-MS)研究了重组人受体蛋白FKBP12(rhFKBP12)和其小分子神经生长促进剂配体的非共价键相互作用, 从52个化合物中筛选出3个有非共价键结合的化合物000107, 000308和A2B12, 并通过竞争实验测定了它们与rhFKBP12的结合位点和相对结合强度. 清华大学对其中的两个000107, 000308做出了复合物X射线晶体衍射的三维结构, 与ESI-MS的结果相同, 其中000308有较好的促神经生长的活性.     

生物分子相互作用分析技术应用实例（一）——配体垂钓和抗体测定

BIA技术(biomolecular interaction analysis)——即生物分子相互作用分析技术的应用范围相当广泛.先介绍利用BIAcore分离得到了ECK-酪氨酸激酶受体的蛋白配体.另一应用实例是利用BIAcore直接从杂交瘤细胞上清液中测定单克隆抗体的活性、亲和力和动态常数.     

雄激素受体的结构和功能

雄激素受体(AR)属于核受体超家族中的类固醇受体.AR一般由四个结构域组成:N端转录激活区(NTD)、DNA结合区(DBD)、铰链区和配体结合区(LBD).AR的配体,雄激素是主要的内源性性类固醇激素,而更多的研究却表明雄激素在鱼类性分化过程中不起作用,AR在此过程中的作用尚不清楚.本文讨论了雄激素受体的起源、进化,并着重阐述了雄激素受体各个结构域的功能.