体外化学修饰红细胞--通用型血?

目前国内外对通用型血的研究主要是改造修饰红细胞表面抗原。研制的方法有两种：体外酶解修饰人A、B抗原制备O型血和使用化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)共价结合到红细胞表面,遮蔽血型抗原。两种修饰的结果均表明对红细胞的结构、功能无影响。这两种修饰方法为制备通用型血供临床输血开拓了崭新的途径,具有重要意义。     

甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰遮蔽人ABO血型抗原

输血是一种非常有效的临床治疗手段 ,但血型不符会造成输血死亡事故 .为了解决输血中存在的血型匹配困难等问题 ,使用甲氧基聚乙二醇 (mPEG)化学修饰法 ,对红细胞表面的血型抗原进行化学修饰 ,从而达到遮蔽红细胞血型抗原的目的 .通过对mPEG BTC、mPEG ALD和mPEG 2 NHS三种mPEG衍生物对红细胞A抗原和B抗原修饰效果的比较 ,结果表明mPEG BTC修饰效果最好 ,可以完全遮蔽红细胞的A抗原和B抗原 ,使修饰后的A型、B型和AB型红细胞呈现出与O型红细胞相同的血型血清学特征 ;进一步研究证明 ,mPEG BTC与红细胞结合牢固 ,对红细胞结构、功能、变形能力、常规指标和沉降率等基本没有影响 .初步实现了A→O ,B→O和AB→O的血型改造 ,从而为临床输血治疗遇到的偏型、稀有血型、配型困难等问题的解决 ,提供了新的技术方法与思路 .     

甲型副伤寒菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备 …

以脱毒后去除类脂Ａ的甲型副伤寒杆菌高分子量Ｏ－ＳＰ１和低分子量Ｏ－ＳＰ２为特异笥抗原,以破伤风类毒素（ＴＴ）为蛋白质载体,用已二酸二肼（ＡＤＨ）作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示单独注射Ｏ＿ＳＰ１或Ｏ－ＳＰ２免疫小鼠后,均不能刺激小鼠产生抗ＬＰＳ抗体;而用Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ和Ｏ－ＳＰ２－ＴＴ结合物免疫后,小鼠血甭中均产生了特异性抗－ＬＰＳ－ＩｇＧ抗体,且Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ免疫组     

脑袋越大越重，人就越聪明吗？

通常人们常说的血型，是根据血液中红细胞表面抗原的不同而划分的。输血时经常提到ABO血型系统，它是根据红细胞表面特异性抗原的不同将血型分为A、B、O和AB型，红细胞表面的抗原和它的抗体一旦结合，就会发生溶血（红细胞破裂，血红蛋白溢出）反应，所以输血一定要注意血型相配。     

1939例ABO血型系统新生儿溶血病的血型分布

目的：探讨在母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病（HDN）中的血型分布。方法：对临床表现怀疑为HDN的1939例新生儿进行血清学试验检测,包括新生儿红细胞直接抗人球蛋白试验,红细胞抗体释放试验和游离抗体试验,同时检测母亲ABO血型和RhD血型。结果：1939例婴儿母亲血型均为O型RhD阳性。A型血新生儿818例,其中直接抗人球蛋白试验阳性率17.2%（141/818）,红细胞抗体释放试验阳性率89.2%（730/818）。B型血婴儿1121例,其中直接抗人球蛋白试验阳性率10.9%（121/1121）,红细胞抗体释放试验阳性率78.6%（881/1121）。结论：ABO血型不合引起的HDN中,A型新生儿比B型新生儿患病几率更大。     

炭疽疫苗免疫小鼠外周血TH2，TH1和浆细胞免疫应答动态观察

为了深入了解炭疽两种疫苗——A16R芽孢苗与炭疽无菌培养滤液佐剂吸附苗（anthrax vaccine adsorbed,AVA苗）诱导小鼠免疫应答类型的差异,筛选疫苗免疫评价有效的免疫学参数,分别从抗体及细胞应答水平上对炭疽两种疫苗免疫Balb／C小鼠后免疫应答产生过程进行了动态观察．抗体检测结果分析显示,A16R芽孢苗免疫小鼠血清中可同时检测到抗芽孢抗体与抗AVA抗体,AVA免疫可诱导小鼠产生高效价的抗AVA抗体;两种疫苗免疫小鼠血清IgG抗体亚型均以kG1和IgG2b为主,A16R免疫组IgG2a明显高于AvA免疫组．细胞应答结果分析显示,两种疫苗免疫外周血中均可检测到抗原特异性的TH2,TH1和浆细胞应答．TH2应答于免疫后5天即可在外周血中检测到,至观察末期仍可维持在较高水平;TH1应答,A16R免疫组出现早于AVA免疫组,免疫后5天即可检测到,AVA免疫组于二次免疫的7天才出现,观察末期两组均可检测到低水平的TH1应答;两种疫苗免疫小鼠外周血中均可检测到抗原特异性的浆细胞,A16R免疫组出现早,维持时间长,至观察末期仍呈现上升趋势,AVA免疫组,浆细胞出现较晚,维持时间较短,观察末期仅检测到低水平的浆细胞．上述结果表明,多抗原刺激物的A16R芽孢苗较AVA能更有效的诱导细胞免疫应答;炭疽疫苗免疫后小鼠外周血中TH2,TH1和浆细胞细胞应答,可以同抗体一起,作为疫苗有效性的免疫评价指标．     

抗-D抗体及其应用

Rh血型是仅次于ABO血型系统的人类红细胞抗原系统,至今已发现40多种抗原,但与临床密切相关的是D,C、c、E、e等5种抗原,其中最主要的是D抗原。相应的抗-D抗体无论是在临床输血检测,还是在Rh(D)新生儿溶血病、溶血性输血反应等的防治方面均具有非常重要的意义。传统的抗-D抗体的制备需用人的血清,来源受限。各种抗-D人源性单克隆抗体和基因工程抗体已经成为发展方向。     

甲型副伤寒菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性

以脱毒后去除类脂A的甲型副伤寒杆菌高分子量O SP1和低分子量O SP2 为特异性抗原 ,以破伤风类毒素 (TT)为蛋白质载体 ,用己二酸二肼 (ADH)作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫NIH小鼠 ,结果显示单独注射O SP1或O SP2 免疫小鼠后 ,均不能刺激小鼠产生抗 LPS抗体 ;而用O SP1 TT和O SP2 TT结合物免疫后 ,小鼠血清中均产生了特异性抗 LPSIgG和IgM抗体 ,且O SP1 TT免疫组血清中IgG抗体水平明显高于O SP2 TT免疫组 ,两组结合物免疫血清中抗体类型以IgG为主。O SP1 TT结合物免疫组第二次免疫和第三次免疫后IgG抗体水平均较前一次有显著升高 (p<0 0 1)说明 ,O SP1 TT结合物具有加强应答效果。补体介导的体外杀菌试验证明 ,O SP1 TT与O SP2 TT结合物免疫血清具有特异性杀菌活性。     

ABO血型及其遗传控制

ABO血型的发现（K．Landsteiner,1900）与孟德尔定律重被发现（deVries,Correns,VonTschermak）同年,临床输血配型沿用至今。但对它的研究一直持续到分子生物学时代,可谓是既古老又现代的课题。1ABO血型的分型及其免疫学特征众所周知,ABO血型的分型是根据血液凝集试验确定的。不同型别血液的凝集现象是免疫反应,是细胞表面抗原与异型血清中抗体结合的结果。用以表征其型别的A、B和C（1902年根据LudwikHirszfeld的建议改记作O）源于凝血团的类型编号。红细胞表面具有抗原A的血液称为A型;抗原为B者称作B型;同时具有抗原A…     

He—Ne激光与云芝多糖配合使用对小鼠免疫功能的影响

Ｈｅ－Ｎｅ激光与云芝多糖单独使用或配合使用均可显著提高小鼠植物血球凝集素（ＰＨＡ）刺激的淋巴细胞转化率、血素抗绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）血凝抗体效价、脾细胞产生溶血抗体能力、自然杀伤（ＮＫ）细胞及巨噬细胞（ＭＰ,Ｍｅｇａ,Ｐｈｇｏｃｙｔｅ）抗瘤活性,且配合使用好于单独使用,说明Ｈｅ－Ｎｅ激光与云芝多糖具有协同作用。     

免疫磁珠技术分离唾液A/B血型抗原并用于吸附血清A/B抗体

目的:应用免疫磁珠分离技术获得具有良好抗原性的A/B血型抗原,并探究其作为ABO血型抗体吸附剂去除A/B抗体的可行性。方法:将含有血型物质的唾液进行预处理,再与包被了抗体的磁珠混合,分离出纯度较高的A/B抗原,运用酶联免疫及凝集抑制试验验证所得抗原的抗原性及是否存在交叉反应。用未纯化A/B抗原和纯化A/B抗原包被磁珠,对含有抗A/B IgM、IgG的血清进行抗体吸附,用纯化A/B抗原对100份来自O型血孕妇的临床血清样本进行抗体吸附,分别评价其吸附效果。结果:纯化抗原与对应抗体反应后,其吸光度显著高于对照组(A抗原与A抗体0.85±0.12 vs.0.27±0.03,P0.01;B抗原与B抗体0.86±0.09 vs.0.24±0.06,P0.01),与其它类型抗体反应后的吸光度值与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。进行红细胞凝集抑制试验时,纯化抗原可显著抑制相应抗体与红细胞的凝集反应,对其它类型抗体与红细胞的凝集没有抑制作用。血清抗体吸附实验表明纯化抗原的吸附效率比未纯化抗原的高(97.00%vs.88.00%,P0.001)。临床样本抗体吸附实验显示,纯化A抗原对抗A IgM/IgG的吸附效率分别为96.88%、98.44%;纯化B抗原对抗B IgM/IgG的吸附效率分别为96.88%、98.44%。结论:磁珠纯化抗原能特异性地与对应抗体结合,有效吸附血清中的血型抗体,有望作为合成A/B抗原的替代品。     

清洁级实验动物四种病毒抗体玻片酶免疫检测试剂盒的研制

本文报道对清洁级实验动物应排除的四种病毒（淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、小鼠脱脚病病毒、鼠肝炎病毒和仙台病毒）抗体玻片酶免疫（ＥＩＡ）检测试剂盒的研制。四种病毒感染的细胞和对照细胞经冷丙酮固定于载玻片上制成特异性抗原和对照抗原,此四种病毒的抗血清各１０份和ＳＰＦ小鼠血清２０份分别与四种病毒的特异性抗原和对照抗原进行ＥＩＡ交叉试验,结果显示,抗原只与其相应抗血清发生特异性显色反应,与非特异性小鼠血清和ＳＰＦ小鼠血清不显色。与ＨＩ或ＥＬＩＳＡ方法比较,通过对１１２份普通小鼠血清进行测试,结果表明,ＥＩＡ对仙台病毒抗体的检出率（１９．６％）显著高于（＜０．００５）ＨＩ（６．３％）,对小鼠脱脚病病毒抗体的检出率（２３．３％）与ＨＩ（２１．４％）无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。ＥＩＡ对淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和鼠肝炎病毒抗体的检出率分别为１．８％和７１．２％,ＥＬＩＳＡ对两种病毒抗体的检出率分别为１．８％和６７．６％,两种方法对两种病毒抗体的检出率无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。重复性试验表明两批四种病毒抗体试剂盒对１０８份小鼠血清两次测定的符合率为９６～１００％。四种病毒的ＥＩＡ抗原在－１８℃保存１２个月或在２－８℃保存３     

福氏2a痢疾杆菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫学特性

通过己二酸二肼（ADH）将福氏2a痢疾杆菌脂多糖（LPS）经酸水解脱毒纯化后得到的O－SP和破伤风类毒素（TT）蛋白共价结合,制备了福氏2a痢疾杆菌结合物。以2.5μg多糖或含2.5μg多糖的结合物经皮下注射免疫NIH品系雌性小鼠,同时以25μg多糖或含25μg多糖的结合物经耳缘静脉注射家兔。用ELISA方法分别检测小鼠和家兔血清中抗脂多糖抗体水平及抗TT水平,并用豚鼠血清补体介导进行了体外杀菌实验。结果显示：用本实验方法提取的多糖,合成的多糖衍生物,多糖－蛋白结合物都具有福氏2a痢疾杆菌O－抗原特异性,其化学组成及结构特异性和国外文献报道基本一致。单独用多糖免疫小鼠和家兔未能诱导LPS抗体,而结合物免疫小鼠和家兔的血清诱导出了较高的抗LPS IgG抗体及抗TT抗体,并有较强的体外杀菌活性。产生的抗体存在着免疫记忆性,可以产生再次免疫应答加强反应。     

Epstein—Barr病毒潜伏膜蛋白（LMP）基因免疫的初步研究

利用基因免疫技术,将重组质粒ＰＢＳ－ＬＭＰ－Ｈｙｇ直接注入ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌中,于第２、４、８周,用间接免疫荧光法检测鼠血清中抗ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）特异抗体,结果表明,所有免疫小鼠（５／５）均产生特异体体,且抗体滴度随时间变化逐渐增高。     

自体血液回输技术应用于非体外循环冠状动脉旁路移植术的效果

目的探讨非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCAB)中应用自体血液回输技术的临床效果。方法对2017年2月～2018年2月在我院接受OPCAB治疗的85例患者的临床资料进行回顾分析。按照是否采用自体血液回输技术分为观察组(自体血回输)和对照组(未应用),观察比较两组术后24 h血常规指标水平,并测定术后引流量、异体血输注量及输血不良反应情况。结果两组患者的血红蛋白、红细胞比容、红细胞计数、血小板计数及术后引流量等指标比较,差异均无统计学意义(P0.05);观察组的异体血输注量、输血不良反应发生率显著低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论将自体血液回输技术应用于OPCAB治疗中,可有效减少异体血输注量和输血不良反应发生,对患者血常规无明显影响,且安全性较高,值得临床应用。     

脂多糖模拟肽13L诱导对小鼠内毒素休克的保护反应

为研究LPS 2630表位模拟肽13L是否能诱导抗脂多糖（LPS）抗体的产生、对细菌攻击及内毒素休克的保护性反应,合成了模拟LPS表位的短肽13L．用合成肽13L-蓝载体（blue carrier,BC）交联物免疫Balb／C小鼠,观察小鼠体内抗LPS抗体产生的规律,并观察免疫小鼠细菌感染存活时间,用颈总动脉插管测定技术观察免疫小鼠内毒素休克的血压变化．结果显示,合成肽13L-BSA交联物能与兔抗鼠伤寒和大肠杆菌LPS抗血清及抗鼠伤寒LPS单抗结合,证明短肽13L可模拟LPS的抗原性．用13L-BC交联物免疫可诱发小鼠体内针对大肠杆菌LPS 2630和鼠伤寒沙门氏菌LPS 7261的抗体反应,该反应可被灭活大肠杆菌及两种LPS所加强,其抗体亚类主要为IgG2a,其次为IgG2b与IgM,而IgG1与IgG3含量极低．免疫13L-BC小鼠显示对细菌攻击的抵抗,与免疫BC对照小鼠比较,其存活时间分别为（12&#177;1．3）天和（5．3&#177;0．4）天（P〈0．01）．免疫13L-BC小鼠对静脉注射LPS诱发内毒素休克的保护作用体现在血压下降幅度明显低于对照动物,在LPS 2630攻击后1、2、3及4h时两组动物血压明显差别（P〈0．05、P〈0．01、P〈0．05及P〈0．01）,而LPS 7261攻击后1、2、3及4h时两组动物血压差别则略小于LPS 2630组（P〉0．05、P〈0．05、P〈0．05及P〈0．01）．上述结果证明,LPS表位模拟肽13L交联物免疫小鼠可产生针对细菌攻击及内毒素休克的保护性效应,提示该模拟肽作为LPS交叉保护性疫苗候选的可行性．     

不同佐剂对preS2／S乙型肝炎疫苗免疫原性的影响

目的探讨不同佐剂对preS2／S乙型肝炎疫苗免疫原性的影响。方法将BALB／C小鼠随机分为6组：铝屯剂组（S＋AI和S2／S＋A1）、细胞因子佐剂组（S2／S＋CKl、S2／S＋CK2和S2／S＋CK3）及阴性对照组（NG）,用相应抗原且腔免疫各组小鼠,1mL／只,分别于免疫后2、4和6周采血,分离血清,ELISA法检测血清中抗-HBs抗体和preS2圭体水平;wsT一1法检测淋巴细胞增殖情况。结果免疫后2周,铝佐剂组（S＋A1和S2／S＋A1）抗体水平较高,阳转i达100％,而细胞因子佐剂组抗-HBs抗体水平均较低,S2／S＋CK2及S2／S＋CK3组抗体阳转率为0,与NG组比较2异无统计学意义（P〉0．05）;免疫后4周,细胞因子佐剂组抗-HBs抗体水平升高明显,铝佐剂组S2／S＋A1抗体水习显著高于S＋A1（P〈0．05）;免疫后6周,细胞因子佐剂组抗体水平高于铝佐剂组,其中S2／S＋CKl组抗体水平较高免疫后2周,各组小鼠血清中抗-preS2抗体均达到较高水平,各组间差异均无统计学意义（P〉0．05）;免疫后4月和6周,抗体水平均有所下降,但下降不明显;铝佐剂组S＋AI和S2／S＋A1抗-preS2抗体水平差异无统计学意义（P0．05）。免疫后4周,各组小鼠淋巴细胞刺激指数铝佐剂组（S＋A1和S2／S＋A1）低于细胞因子佐剂组,且差异有统t学意义（P〈0．05）,其中S2／S＋CKl组淋巴细胞增殖水平较高。结论不同佐剂的preS2／S乙型肝炎疫苗均能诱导较高水平的抗-HBs和抗-preS2抗体,细胞因子佐剂组淋巴细胞增殖水平显著高于铝佐剂组,为新型乙型肝炎疫l和治疗性乙型肝炎疫苗的研究提供了实验依据。     

携带HCV核心蛋白原核表达质粒与真核表达质粒的减毒伤寒沙门菌诱导小鼠免疫应答之比较

丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,得到重组菌SL7207/pZW-C和SL7207/pCI-C,分别将重组菌口服接种小鼠,检测小鼠的免疫应答,结果发现：① SL7207/pCI-C免疫鼠的CD3⁺CD4⁺ T细胞持续降低,而SL7207/pZW-C免疫鼠的CD3⁺CD4⁺ T细胞无明显改变;② SL7207/pCI-C免疫只诱导低水平抗HCV核心蛋白抗体,加强免疫对抗体阳转率及抗体水平无明显影响,而SL7207/pZW-C免疫组所有小鼠均产生较高水平的抗核心蛋白抗体。③ SL7207/pCI-C免疫鼠脾细胞的体外增殖活性、细胞毒性T细胞活性以及加强免疫对细胞免疫应答的增强作用均明显不及SL7207/pZW-C免疫鼠。结果提示：携带真核表达质粒pCI-C的沙门菌因在小鼠细胞内表达天然形式（结构以及磷酸化修饰）的HCV核心蛋白,可能通过对T细胞的免疫抑制作用而弱化免疫应答。而以携带原核表达质粒pZW-C的沙门菌免疫可避免这一问题,并具有接种方便,成本低廉等优点,从而可望作为基于HCV核心蛋白为靶抗原的HCV疫苗的候选免疫方式。     

恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的表达及其生物活性

采用遗传工程技术获得了含有恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的重组质粒pMC055－CS的工程菌株,能高效分泌CS抗原的融合蛋白至胞外,可达25mg／L．具有霍乱毒素B亚单位（CT－B）和子孢子CS的抗原性．将纯化的融合蛋白免疫C57纯系小鼠,免疫后抗CT－B抗体滴度可达1：3200～6400,抗CS抗体滴度可达1：320～640．免疫小鼠采用约氏疟子孢子腹腔攻击,保护率达34～45％．     

自体输血与异体输血对创伤性颅脑损伤开颅手术患者凝血功能、细胞免疫功能和神经损伤标志物的影响

摘要 目的：探讨自体输血与异体输血对创伤性颅脑损伤（TBI）开颅手术患者凝血功能、细胞免疫功能和神经损伤标志物的影响。方法：回顾性分析2019年4月~2022年5月期间在本院行开颅手术的120例TBI患者的临床资料。根据输血方式的不同将患者分为异体输血组（n=58,异体输血）和自体输血组（n=62,自体输血）,观察两组临床指标、细胞免疫功能、凝血功能、神经损伤标志物和不良反应发生率情况。结果：两组患者手术出血量、输血量、输注含凝血成分血制品比例对比,差异无统计学意义（P>0.05）。自体输血组出院时CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺高于异体输血组,CD8⁺低于异体输血组（P<0.05）。两组出院时凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）、活化部分凝血活酶时间（APTT）组间对比无统计学差异（P>0.05）。自体输血组出院时S100钙结合蛋白B（S100B）、神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）低于异体输血组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间比较无差异（P>0.05）。结论：自体输血用于TBI开颅手术患者,对患者的凝血功能影响较小,同时还可改善机体细胞免疫功能,降低神经损伤标志物水平。