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菠菜磷酸丙糖转移蛋白在烟草中正义及反义表达及其对碳水化合物转运的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
以菠菜(Spinacia oleracea L.)为材料,取幼叶分离mRNA,反转录合成cDNA,以cDNA第一链为模板,通过PCR扩增,获得菠菜磷酸丙糖转移蛋白(Triose phosphate translocator,TPT)cDHA目的片段。对其进行序列分析,结果表明,分离的目的片段核苷酸序列与文献报道相比同源率为99.9%,只不1个碱基发生改变。将得到的菠菜tpt cDNA与CaMV35 相似文献
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海藻糖合酶基因的克隆及其植物表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以担子菌灰树花的菌丝体中提取总RNA,并纯化出mRNA,mRNA经反转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板经PCR扩增海藻糖合酶(Tsase)基因,获得一长约2.2kb的片段,把该片段连接一pGEM-T-easy vector上进行测序,其全长共2199bp。随后将此片段以正向插入植物表达载体pBI121的HindⅢ+Xbal位点构建pUB,再把海藻糖合酶基因以正向插入载体pUB的BamH 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒基因组cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)┥nL株的基因组RNA为模板,经逆向转录酶作用,合成第一链cDNA,再以RNadse/H与DNA聚合酶I联合作用合成dscDNA,并以dC同聚物尾化。pUC8DNA在Pst I酶解后,以dG同聚物尾化,两者退火构成重组质粒,转化到E.coli JM101受体菌中,另以γ-^32P-ATP标记BVDV RNA制备探针,通过菌落原位杂交筛选重组子。酶切分配表明重组质粒插入 相似文献
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介绍了一种从人血清中同步扩增和检测HBV-DNA和HCV-RNA的方法。HCV-RNA反转录成cDNA,这种cDNA和从HBV中抽提出的DNA一起,用根据HBV、HCV保守区序列设计的特异引物进行同步PCR扩增,这种方法对于检测HBV和HCV重复感染很有用处 相似文献
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甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物RNA3序列分析及编码25kD蛋白基因在大 … 总被引:2,自引:1,他引:1
以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板,通过反转录--PCR扩增获得BNYVVRNA3全长cDNA。将其克隆到PEM-7Zf上,得到重组质粒pGBY56。序列分析结果表明,内蒙分离物RNA3基因组全长 1775nt 相似文献
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人IgG Fc基因克隆及人源抗HBsAg全分子抗体在CHO … 总被引:1,自引:0,他引:1
利用mRNA提取试直接从健康人外周血白细胞中提取mRNA,逆转寻为 cDNA,合成引物扩增人抗体分子IgGI亚型Fc基因,克隆到pGEM-T-Vector中并测序。合成引物扩增人抗体分子轻,重链信号肽序列,分别克隆并测序将轻链信号肽和轻链(kappa)VL-CL基因进行重组形成轻链全分子基因,再将其克隆到哺乳细胞表达载全pcDNA3.1中。将重链信号肽、重链(gamma)VH-CH1和Fc基因进行 相似文献
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植物甜蛋白mabinlinⅡcDNA的克隆与序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据已由作者克隆的mabinlinⅡB亚基185bp的cDNA片段,设计合成系列引物.从马槟榔(CapparismasaikaiLévl.)种子提取总RNA并纯化mRNA,经反转录合成cDNA第一链.采用RACE方法,快捷克隆mabinlinⅡ全长cDNA.经序列测定与分析,该cDNA为583bp,其中编码序列长465bp,共编码155个氨基酸. 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物(NM)RNA为模板,通过反转录和PCR扩增得到了BNYVV RNA4基因组的cDNA克隆pGBF6。序列分析结果表明,pGBF6含有全长RNA4 cDNA插入片段,大小为1465个核苷酸,含有一个849个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由282个氨基酸组成的分子量为31kDa的蛋白。与法国F2分离物RNA4相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别 相似文献
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核酸酶保护试验在黄瓜花叶病毒株系鉴定中的初步应用 总被引:3,自引:0,他引:3
采用黄瓜花叶病毒(CMV)亚组Ⅰ株系Fny-CMVRNA_2的1209~1626核苷酸片段和亚组Ⅱ株系Ls-CMVRNA_2的2002~2433核苷酸片段的cDNA克隆,体外转录,同时掺入 ̄(32)P获得负链RNA探针,与纯化的番茄和甜椒上的CMV中国分离物的RNA杂交,结果表明:CMV番茄和甜椒中国分离物与Fny-CMV的核苷酸有高度同源性,隶属于Fny-CMV为代表的亚组Ⅰ株系。并利用K-CMV株系(亚组Ⅰ,源于中国)的RNA_2全长cDNA克隆的两个EcoRI位点间的核苷酸序列(1657~2125nt)作探针,与上述两种CMV中国分离物的RNA杂交,进一步比较分析了这两个分离物和K-CMV株系的关系。讨论了核酸酶保护法在CMV株系鉴定中的作用。 相似文献
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6株A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1(1D)基因的核苷酸序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
早期收集保藏的6株A型口蹄疫病毒(FDMV)(AL1-AL6),适应BHK21单层细胞后,提取6株细胞增殖病毒的RNA。用一对FMDV通用引物经反转录(RT)-PCR法扩增了约500bp的期望的DNA片段。克隆目的的基因后,采用双脱氧DNA链末端终止法测得了6株病毒的VP1基因210-639核苷酸序列。分析表明,3株病毒缺失3个核苷酸,从推导的氨基酸序列比较,确定缺失的3个核苷酸正好是一个密码子, 相似文献
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用抗原捕获/多聚酶链反应(AC/PCR)对戊型肝炎病毒(HEV)细胞分离株MJ90和R25基因组的部分核苷酸序列进行扩增,获得了与HEV缅甸株ET1·1相同的cDNA扩增带。该cDNA扩增带纯化后用双脱氧核苷酸DNA链末端终止法测序,CJ90、R25株的核苷酸和氨基酸序列与ET1·1克隆的同源性分别为99.6%、100%和99%、99%,从而证明MJ90和R25毒株为HEV. 相似文献
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从簇毛麦叶片中提取总RNA,进一步分离mRNA。以mRNA为模板反转录合成cDNA,两端经T4DNA多聚酶修平后加EcoR1接头分子,连接于质粒pGEM-7Zf(+)的EcoR1克隆位点,转化大肠杆菌JM103菌株建立了cDNA文库。用PCR扩增重组质粒的cDNA插入序列,用^32P标记后分别与HindⅢ或XbaⅠ酶切的小麦-黑麦附加系DNA进行Southern杂交。根据其杂交结果,目前已鉴定出4 相似文献
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杆状病毒DNA解旋酶 总被引:3,自引:0,他引:3
DNA解旋酶 (helicase)是DNA复制过程中一类重要的酶 ,负责打开DNA双链 ,并参与新生链的合成 ,在DNA修复和重组过程中都发挥着必不可少的作用。杆状病毒DNA解旋酶除了参与DNA复制外 ,对于晚期基因的转录、关闭宿主蛋白质合成及决定杆状病毒宿主域方面都有重要的作用。1.杆状病毒解旋酶的结构目前已有 5种杆状病毒的DNA解旋酶基因得到克隆并测序 ,分别是苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV) ,黄杉毒蛾核多角体病毒 (OpMNPV) ,家蚕核多角体病毒 (BmNPV) ,甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)及粉… 相似文献
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蝶兰胚珠的cDNA文库构建及其特异基因表达的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以蝶兰(Phalaenopsis"Mt.Kaala”cvSM9108)为材料,分别提取大孢子母细胞时期胚珠和成熟胚珠的PolyARNA,反转录成cDNA,构建起两个cDNA文库。克隆筛选采用差异杂交法。从上述两个cDNA,对其在植物体不同器官和不同发育时期的胚珠内的表达进行了分析。结果表明该两个cDNA均为胚珠特异,并且分别在胚珠发育的特定时期表明。推测该两个cDNA的表达受胚珠内部的不同因子调控 相似文献
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应用Taq DNA聚合酶(Thermus aquaticus DNA polymerase)直接对RNA进行反转录成cDNA第一链,然后用特异引物进行PCR扩增,结果表明,反转录达到AMV逆转录酶的效果,且可能得到比AMV逆转录酶更完整的cDNA第一链。 相似文献
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将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白 相似文献
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马铃薯卷叶病毒基因间隔区的克隆及序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列.设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株(PLRV-Ch)的RNA为模板,反转录合成cDNA第一条链,经PCR扩增后克隆于pUC19质粒中,进一步用PCR鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:PLRV-Ch基因间隔区由197个核苷酸组成,与国外报道的荷兰PLRV-N加拿大PLRV-C,澳大利亚PLRV-A,苏格兰PLRV-S各株系核苷酸序列具有很高的同源性,同源率依次为99%、98%、93%、98%。 相似文献
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用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR技术,从GA株马立克氏病病毒(MDV)感染的成纤维细胞(GEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约1300bp编码序列,将该pcR扩增的产物于EcoRI和Kpnl位点克隆到pUC18质粒载体中,在以digoxigenin(dig)标记的gDPCR产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含MDVgD基因的重组质粒p18MgD。将p18MgD质粒DNA用dig标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA。酶切位点分析表明,该gD克隆也和已发表的MDV的RBIB株gD一样,不含有EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、SmaⅠ、pvuⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是MDVgD克隆。 相似文献